Method Article

보상 성 폐 성장의 마우스 전폐 절제술 모델

DOI:

10.3791/52294

⸱

December 17th, 2014

 ,  , 
1Division of Critical Care Medicine, Cincinnati Children's Hospital Medical Center

In This Article

Summary

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마우스 폐절제술은 일반적으로 사용되는 보상적 폐 성장 모델입니다. 이 절차는 계통 추적 또는 형질전환 마우스 모델과 함께 사용하여 기본 메커니즘을 밝힐 수 있습니다.

Abstract

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인간의 경우, 손상된 폐의 수리 및 개조 중단은 궁극적으로 장애나 사망으로 이어질 수 있는 많은 급성 및 만성 폐 질환에 기여합니다. 폐 복구 및 재생에 대한 부상 기반 동물 모델은 부상 특이적 반응에 의해 제한되므로 손상 반응 및 부상 해결과 관련된 변화를 폐 복구 및 폐 재생과 관련된 변화와 구별하기 어렵습니다. 그러나 이러한 복구 및 재생 신호 경로를 식별하기 위해 동물 모델을 사용하는 것은 폐 손상 후 폐 기능을 개선하기 위한 새로운 치료법 개발에 매우 중요합니다. 마우스 폐절제술 모델은 폐포 재격격의 메커니즘을 보다 명확하게 정의하기 위해 보상적 폐 성장을 활용하여 이러한 복구 및 재생 신호를 분리합니다. 여기에서는 마우스 폐절제술과 가짜 폐절제술을 수행하는 기술에 대해 설명합니다. 이 기술은 혈통 추적 또는 기타 형질전환 마우스 모델과 함께 사용하여 폐 복구 및 재생의 분자 및 세포 메커니즘을 정의할 수 있습니다.

Introduction

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폐의 주요 기능은 유기체와 대기 사이의 산소와 이산화탄소의 교환을 제공하는 것이다. 인간에서, 선천성 및 획득 조건 호스트 손상된 폐 기능의 감소 결과 폐 표면적 이어질. 즉, 폐 - 같은 흡입 코르티코 스테로이드, 기관지 확장제, 산소 보충, 만성 기계 호흡으로 치료의 호스트가 손상된 폐 기능 1-3의 결과를 완화하기 위해 사용되지만, 이러한 조건을위한 이상적인 치료는 기능 폐 조직의 재성장을 촉진 것 재생.

포유류 조직 재생이 잘 설명되어 있습니다. 아프리카 가시 마우스 반흔 4없이 피부의 넓은 지역을 다시 생성 할 수 있습니다. 인간의 말단 지골 부상 또는 절단 5-7 다음 다시 생성 할 수 있습니다. 다음 전폐 절제술 (PNX), 보상 폐 성장 할, 9 쥐, 마우스 (8) 발생GS (10), 및 11 인간. 정의에 따라 보상 폐 성장은 관련 미세 (12)의 확장과이 확대 airspaces의 기존 airspaces의뿐만 아니라 확장,하지만 다시 격막을 포함한다. 유전자 발현 분석은이 모델은 폐 (13)의 개발 시그널링 많은 이벤트를 되풀이 것을....

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Protocol

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참고 : 동물 use 문 : 본 연구의 모든 절차를 승인 신시내티 아동 병원의 기관 동물 사용 및 관리위원회 (IACUC)의 가이드 라인을 다음과 같이 실시 하였다. 여덟 주령의 C57BL / 6J 수컷 마우스는 잭슨 연구소 (주 바 하버, ME)로부터 획득하고 사용하기 전에 일주일 동안 순응시켰다. 수술까지는 동물은 무균 장벽 시설에 보관하고 멸균 차우 여과 물 광고 libdium를 제공했다. 각 마우스 케이지는 전용 공기와 물을 공급하고, 객실은 12 시간 밤낮주기를 유지 하였다. 수술 회복 후, 마우스, 여과 탑과에서 사육 멸균 우 광고 섭취하는을 제공하고, 물병에서 물을 여과 제공되었다.

악기 1. 준비

  1. 종이 클립과 핀을 사용하여 6 피부 견인기를 확인합니다. 트위스트 종이 핀의 정강이에 종이 클립을 곧게, L일단에 5cm 직선 강선 처마와 와이어의 단부에 단일 0.5 cm "U"자 고리를 만든다.
  2. 플라스틱 랩을 사용하여 약 15 X 15cm 정사각형 외과 드레이프를 확인합니다. 마우스 당 하나의 드레싱을 준비합니다. 각 랩 사이에 종이 타워를 넣습니다.
  3. 12 × 12 인치 코르크 타일, 거즈, 그리고 면봉 면봉의 스택과 함께 모든 수술 도구를 ....

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Results

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. 모두 PNX와 가짜 전폐 절제술 100 % - PNX와 가짜 운영 마우스 무게의 플롯은 그림 6에 제공됩니다 우리의 손에, 생존은 지속적으로 95이다. 오른쪽 폐 - 성장 다시이 모델과 예상 시간 과정에서, 우리는 기 브니 등. (15)과 왕 등의 원고에 독자를 참조하는 방법에 대한 설명. (14)

몇 가지 일반적인 함정이 성공적으로 마우스 PNX와 마우스 가짜 전폐 절제술 절차를 수행하기 위해 피해야한다.

기관 내 삽관 : 마우스 PNX 기술을 배우는 많은 연구자들은 기관 내 삽관에 어려움이있다. 마우스 후두가 전방이고 기관 내 카테터 성대 통과해야하므로 카테터 식도 내로 통과하기 쉽다. 그림 1A에서 알 수 있듯이, 무딘 팁 카테터 curva 다음 가능한 .......

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Discussion

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우리는 지금까지보고 된 마우스 PNX와 마우스 가짜 PNX 절차의 가장 상세한 설명을 제공하고 있습니다. 우리는 절차를 학습 연구자들은 일반적으로 발생하는 일반적인 함정의 여러 가지의 독자가 인식 한 우리는이 함정을 완화하기 위해 실험실에서 개발 한 몇 가지 기술을 설명했다. 이 모델을 이용하여 다른 실험실은 다른 기술 수​​정을 개발하거나 다른 악기를 사용할 수 있습니다. 기술의 차이를 평가할 때, 개별 연구자들은 이러한 차이는 상당히 실험 결과에 영향을 미칠 여부를 결정해야합니다.

보상 폐 성장 PNX 마우스 모델 폐 수리 및 재생의 다른 동물 모델보다 많은 장점을 갖는다. 형질 전환 마우스를 사용할 수 있도록 계보 추적의 많은 수의 과발현 유전자, 대부분의 실험실 (16)에 대한 달성 목표 유전자 삭제 실험의 일반적인. 둘째, MOR폐포 재성장을위한 정량 phometric 기법 17 잘 설명된다. 셋째,이 모델을 채택하는 비용은 중.......

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Disclosures

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저자는 공개할 것이 없습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 도움을 준 신시내티 아동 병원 수의학 서비스와 부서에 감사드립니다. 이 원고는 미국 국립보건원(National Institutes of Health) K12 HD028827의 지원을 받았습니다. 안나 펄(Anna Perl) 박사는 저자들에게 이 수술 절차를 가르쳤다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
6 인치 혈관 클립 어플리케이터Teleflex Medical (WECK)137062
Horizon Small 티타늄 레드 클립Teleflex Medical (WECK)1201
좁은 패턴 12cm 곡선 집게Fine Science Tools11003-12
곡선 톱니 모양 10cm Graefe 집게Fine Science Tools11052-10
Castroviejo 바늘 홀더Fine Science Tools12565-14
스트레이트 9cm 사시 가위 (무딘 끝)Fine Science Tools14075-09
스트레이트 8.5cm 경화 파인사이언스 도구14090-09
스트레이트 무딘 팁 Cohan-Vannas 스프링 가위Fine Science Tools15000-12
피부 접착제Gluture32046
22G Angiocatheter
24G Angiocatheter
3ml Luer lock 주사기
4 개의 짧은 견인
2 개의 긴 견인
장치 5-0 Prolene on curved 절단 바늘Ethicon8698G
0.5 ml 주사기 27G 바늘
일반 식염수
부프레노르핀
프레스 앤 씰 랩Glad Products Company
12 x 12 인치 코르크 보드 스택Office Depot
70% 에탄올
베타딘
마우스 인공호흡기Hugo Sachs ElektronnikMinivent Type 845
Isoflurane 기화기OHMEDAExcel 210 SE
인공 눈물 연고Puralube NDC: 17033-211-38
장치

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Strueby, L., Thebaud, B. Advances in bronchopulmonary dysplasia. Expert review of respiratory medicine. , (2014).
  2. Donn, S. M., Sinha, S. K. Recent advances in the understanding and management of bronchopulmonary dysplasia. Seminars in fetal & neonatal med....

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