瘢痕創傷修復のマウス胎児皮膚モデル
Summary
During mammalian development, early gestational skin wounds heal without a scar. Here we detail a reliable and reproducible model of fetal scarless wound healing in the cutaneous dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.
Abstract
Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs across species but is age dependent. The transition from a scarless to scarring phenotype occurs in the third trimester of pregnancy in humans and around embryonic day 18 (E18) in mice. However, this varies with the size of the wound with larger defects generating a scar at an earlier gestational age. The emergence of lineage tracing and other genetic tools in the mouse has opened promising new avenues for investigation of fetal scarless wound healing. However, given the inherently high rates of morbidity and premature uterine contraction associated with fetal surgery, investigations of fetal scarless wound healing in vivo require a precise and reproducible surgical model. Here we detail a reliable model of fetal scarless wound healing in the dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.
Introduction
胎児皮膚創傷は、妊娠後期1まで急速かつscarlessly癒す。胎児の瘢痕創傷修復は、正常な組織構造および機能の再生によって特徴付けられる。瘢痕化の表現型への瘢痕からの移行は、ヒトにおけるマウス2,3における胎生18日（E18）の周りに妊娠後期に起こる。成人と比較して、胎児の創傷修復を迅速上皮、結合組織の堆積、および線維芽細胞の遊走によって特徴付けられる。
多くの研究は、初期の胎児の発達中の瘢痕創傷治癒の現象の可能な説明を提供してきました。炎症は、大人の創傷修復の基本的なコンポーネントです。しかし、胎児の創傷は、急性炎症4の欠如によって特徴づけられる。これは胎児の段階で免疫系の機能的な未熟さの結果であるかどうかは不明なままである。最近の研究では、豊富に違い、マットと示唆urity、およびE18胎児の皮膚対E15における肥満細胞の機能は、少なくともマウス3において、瘢痕の表現型への移行に関与し得る。他の研究では、プロパティと胎児および成人の創傷マクロファージの存在量の違いが胎児の創傷修復5中に、通常の細胞外マトリックス（ECM）の改革のために責任があることを断定。
胎児および成人の発達中の環境要因の違いはまた、創傷の修復に影響する場合があります。 Longakerらは、胎児から創傷液が成人の創傷液6でなしに比べ、ヒアルロン酸刺激活性の高いレベルを持っていることを示した。従って、胎児の創傷環境におけるヒアルロン酸の高いレベル、細胞運動性および増殖につながる微小環境を促進するグリコサミノグリカンは、初期の胎児の発育中に見られる瘢痕の表現型の原因である可能性がある。フェタチーズはその事実に証拠ポイントのその他のラインLの創傷環境は、比較的低酸素および成長因子7に富む無菌羊水中に浸漬される。しかし、決定的な答えは、線維性の修復に瘢痕再生への移行をトリガー胚形成の間の重要なイベントや要因のために提供されていない。
胎児に瘢痕治癒の責任のメカニズムを理解することは、正確で再現性のあるモデルを必要とする。ここでは詳細E16.5（瘢痕）とE18.5（瘢痕化）マウス胚の背で胎児の瘢痕創傷治癒の再現可能なモデル。さらに、このモデルの小さな変化は、胎児の創傷及び皮膚8,9の遺伝子発現解析など、さらなる研究の数を実行するために利用することができる。正確なタイミング妊娠がこの胎児の瘢痕創傷治癒モデルの成功した要約のために重要であることを考えると、私たちは過剰排卵時限妊娠についても詳細私たちのプロトコル。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここで紹介するの外科的プロトコルは、最初に私たちの研究室10が2006年に出版さ胎児マウスの瘢痕治癒の切除モデルについて説明します。切除創傷11の他の確立されたモデルに加えて、胎児マウス瘢痕治癒の切開モデルが同様に存在する12,13。サル、子羊、ウサギ、オポッサム、ラットで胎児の瘢痕創傷治癒の調査は、14〜17を報告されている。しかし、マウス…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、（HPL）は、NIH助成金R01 GM087609、（MTL）は（HPL）のアンソニー·シュウ、NIHのグラントU01のHL099776に敬意を表しイングリッド·レイとビル·シュウからの贈り物、Hagey研究のための助成金によって部分的にサポートされていました小児再生医療と（MTLとHPLへ）オーク財団。 GGWはスタンフォード大学医学部、スタンフォード医学者研修プログラム、及びNIGMS訓練助成金GM07365によってサポートされていました。 MSHはCIRM臨床フェロー研修グラントTG2-01159によってサポートされていました。 WXHはサーノフ循環器財団からの資金によってサポートされていました。
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| 7-O MONOSOF Suture | eSuture | SN-1647G | |
| Surgical Forceps | Kent Scientific | INS650916 | |
| Micro-scissors | Kent Scientific | INS600127 | |
| Autoclip 9mm | Texas Scientific Instruments | 205060 | |
| Insulin Syringe | Thermo Fisher Scientific | 22-272-382 | |
| Black Pigment | AIMS | 242 | |
| BD Safety-Lok 3ml Syringe | BD Biosciences | 309596 | |
| Phosphate Buffered Saline | Life Technologies | 10010-049 | |
| OPMI-MD Surgical Microscope | Carl Zeiss Surgical Inc | ||
| Pregnant Mares Serum (PMS) | Millipore | 367222 | |
| Human Chorionic Gonadotropin (HCG) | Sigma-Aldrich | CG10 | |
| Povidone Iodine Prep Solution | Dynarex | 1415 | |
| Nair (depilatory cream) | Church and Dwight Co. | 22600267058 |
References
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