고상 수지 기반의 방법론을 통해 비대칭 페로센 유래 바이오 복합체 시스템 용 합성 방법론

요약

페로센의 비대칭 종의 합성은 용액 기술을 사용하여 어렵습니다. 이 보고서는 고체상 합성을 통해 수행된 용이하고 깨끗한 반응을 사용하여 페로센-비오틴 생체접합체를 생성하기 위해 수행된 방법에 중점을 둡니다. 티올레이트 부분의 혼입은 금 표면에 고정화(immobilization)를 위한 능력을 부여하기 위해 보여진다.

초록

조기 발견이 가장 질환의 성공적인 치료의 핵심이며, 많은 종류의 암의 진단 및 치료에 특히 필수적이다. 사용되는 가장 일반적인 기술은 자기 공명 영상 (MRI), 양전자 방출 지형도 (PET), 및 계산 된 지형 (CT)과 같은 양상을 이미징 및 질병의 물리적 구조를 이해하는데 최적이지만 회만 매 4로 할 수 있습니다 조영제 및 전체 비용의 사용으로 인해 육주. 마음, 치료 프로토콜을 혁명 것, 질병 및 / 또는 임상의 사무실에서 치료 효능의 무대를 평가하고 적절한시기에 이렇게 바이오 센서 등의 기술, "관리의 포인트"의 개발. ^{1과에두고} 생물학적으로 중요한 분자 ^(2)의 검출에 페로센 기반 바이오 센서를 탐색하는 수단은, 본원에 기재된 방법은 페로센 비오틴 바이오 컨쥬 게이트를 제조하기 위해 개발되었다. 이 보고서는 금 표면에 고정화 될 수 비오틴 - 페로센 시스테인 시스템에 초점을 맞출 것이다.

서론

바이오 센서는 선택적 분석 플랫폼으로 생체 분자 인식 기술을 채용하고 특이성, 속도 및 저가에 이용되는 소형 장치이다. 생체 분자의 검출을위한 전기 화학 바이오 센서는 그들의 단순성, 비용 효율성, 그리고 고감도로이 필드의 선두에있다. 이러한 센서의 ^1,3- 일반적인 해부학 관심 생물학적 마커에 특이적인 인식 분자 구비 전극 인 . 분자 인식하여 바이오 마커의 결합 단순한 측정에 의해 검출 될 수 전위 또는 전류의 로컬 변경을 초래한다. 효소에서 ^4-8 항체, ^9-12 전체 세포, 13-16 수용체, ^{17 ~ 20} 펩타이드 ^21-23과 DNA ⁽²⁴⁾ 크게 더 큰 생물 분자에 초점을 맞추고있다 범위 수있는 인식 부분을 날짜합니다. ^{25 ~ 28} 연구를 이 분야에서의 노력은 면역 센서 갔지에 주로 집중하고면역 글로불린은 산화 환원 활성 코어 고정화 (예 페로센 등) 및 관심있는 항체를 검출하는 데 사용되는 재. 이러한 연구는 항원 / 항체의 사용에서 발생하는 합병증에 따른 불량으로 인한 정밀도와 시간 소비 임상 적용에서 제외되었습니다. ^1,3 성장주의는 생명의 작은 분자의 검출 (이하 1kg / 몰)에 초점을 맞추고있다 음식과 국가 안보....

프로토콜

비오틴-FC 시스테인의 합성 1. (1)

1. 고체상 방법은 1 수지 바인딩 생성한다.
   1. 융해 된 주사기에 비오틴로드 수지 (250 ㎎, 0.145 밀리몰)을 놓고 디메틸 포름 아미드 (5 ml)에 그리기와 20 분 동안 실험실 통에 주사기를 흔들어 수지를 팽창. 솔루션을 추방하고 한 번 더 붓기 디메틸 포름 아미드를 반복합니다.
   2. 10-15 분간 진탕 하였다 주사기에 디메틸 포름 아미드 20 % 피 페리 딘 4-6를 가하여의 Fmoc- 보호기를 제거한다. 피 페리 딘 다른 4-6 ml의 탈 보호 과정을 반복한다. ~, 디클로로 메탄 (3X)를 5 ㎖ 각 메탄올 (1 : 1), 3X : 메탄올 : 디클로로 메탄 (1) 디메틸 포름 아미드 3 배의 순서, 3X 디메틸 포름 아미드 수지를 세척 하였다. 가열시 블루의 존재에 의해 성공적으로 탈 보호를 확인하기 위해 구슬의 작은 샘플링 (~ 10)에 닌히 드린 시험 (+)를 수행합니다.
   3. 1'-의 Fmoc- 아미노 페로센 -1- 카르 복실 산을 함유하는 용액을 섞어(203.3 ㎎, 0.4350 밀리몰), 1- 히드 록시 벤조 트리아 졸 수화물 (58.8 ㎎, 0.413 밀리몰), 디 이소 프로필 카르 보디이 미드 (0.0673 ㎖, 0.435 밀리몰....

결과

(1)의 수지 결합 된 형태는도 2에 도시되어있다. 페로센 성분의 공유 결합은 철분 흡수 반대로 연속 세정하고 영구적 인 착체를 함유하는 고정화 된 철 나타내는 수지 비드에 오렌지 색조를 일으킨다 수지 입자의 PEG 성분. 하나의 수지 - 유리 형태는 수지 비드에 색상이 동일하다. 수지 구슬에서 화합물의 제거 후, ​​방법에 의한 순도와 수율 (68 %)는 일반적인 해결 방법보다 훨씬 우수하다. C ₍₂₆₎ 이론치 (발견) H ₍₃₆₎ 펜 ₆ O ₄ S ₂ 4TFA : 제품의 원소 분석 (1) TFA 염으로서 분리 된 것으로 나타났다 C, 38.07 (38.90)를; H, 3.76 (4.20); N, 7.83 (7.70). 전형적인 반응으로부터 얻어진 수율 (105.1 ㎎, 68 %)의 원소 분석 결과를 기반으.......

토론

비대칭 페로센 유도체의 합성은 용액에 도전하고있다. 예를 들어, 용액은 목적하는 생성물 (20 % 이하)의 낮은 수율로 한 결과를 생성하기 위해 시도한다. 마찬가지로, 1'- 아미노 페로센 카복실산 (산세 Fmoc 등) 및 결합 된 수지를 이용하는 비오틴 반응 Baristic 등에 의해보고 된 중합 생성물과 일치 불용성 생성물 결과. 최소한의 제품. ^(47)이 더 페로 복잡 및 그 유도체는 빛 민감하고 아미노산 이성체 솔루션에 이량하는 경향이 있다는 것입니다. 이러한 문제는 다양한 반응과 순찰 도전합니다. 그러나이 반응 제는 펩티드 합성에 의해 개발 된 메리 필드 고상 방법을 사용하여 회피 될 수있다. 페로 펩타이드 시스템의 합성은 여러 그룹으로 관심을 얻고있다 비대칭 펩타이드 페로 시스템의 라이브러리하게되었다. ^46,48-52 작업비오틴 - 페로센 시스테인을 함유하는 제 비대칭 페로센 바이오 접합체의 합성은 본원에 기.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
비오틴 Novatag 수지	NovaBiochem	8550510001
TORVIQ 10ml Luer Lock Fritted Syringe	Fisher	NC9299151
piperidine	Acros	P/3520/PB05
닌히드린 테스트	Sigma-Aldrich	60017-1ea
1'-Fmoc-amino-ferrocene-1-carboxylic acid	Omm Scientific	특별 주문
N,N′ -Diisopropylcarbodiimide	Sigma-Aldrich	D125407-5G
Fmoc-Cys(Trt)-OH	Novabiochem	8520080025
trifluoroacetic acid	Sigma-Aldrich	T5408
1,2-ethanedithiol	Sigma-Aldrich	2930
triisopropyl silane	Sigma-Aldrich	233781
Eppendorf tubes (20 ml)	모든 소스
메탄올	된 모든 소스		사용을 위해 100 ml 미디어 병에 보관 및 사용
	모든 소스		사용을 위해 100 ml 미디어 병에 보관
메틸 포름 아미드	모든 소스		사용하기 전에 분자체로 말리십시오 & 100ml 미디어 병에 보관하여 모든
소스를			원심

사용 전 분자체로 건조 디클로로 메탄 쉬운 전에 분자체로 건조 된 쉬운 디분리기 쉽게 사용할 수 있습니다.