이 원고는 설치류의 후각 시스템을 조사하는 프로토콜을 설명합니다. 후각 습관화/습관 제거 테스트를 통해 조사관은 마우스가 반복적으로 제시된 냄새에 습관화되어 있는지, 그리고 새로운 냄새가 나왔을 때 마우스가 습관 해제를 보이는지 여부를 결정할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
이 비디오는 마우스에서 정상적으로 작동하는 후각 시스템의 존재를 확인하는 기술을 보여줍니다. 이 테스트는 마우스가 비사회적 냄새와 사회적 냄새를 구별할 수 있는지, 마우스가 반복적으로 나타나는 냄새에 익숙한지, 그리고 새로운 냄새를 받았을 때 습관 형성을 보이는지 여부를 결정하는 데 도움이 됩니다. 많은 사회적 행동 테스트가 친숙하거나 새로운 쥐에 대한 실험 동물의 반응을 측정하기 때문에 동물이 사회적 냄새를 감지하고 구별할 수 있음을 확립함으로써 거짓 양성을 피할 수 있습니다. 새로운 환경을 조성하기 위해 냄새를 사용하거나 연상 자극으로 후각 신호를 사용하는 공포 조건화와 같은 학습 테스트에서도 유사한 고려 사항이 있습니다. 후각 시스템의 결핍은 상황을 구별하는 능력과 공포 조건화 중에 후각 신호와 연관을 형성하는 능력을 손상시킬 수 있습니다.
냄새 서식/습관 제거 테스트에서 마우스는 여러 가지 냄새를 반복적으로 나타냅니다. 각 냄새는 2분 동안 세 번 표시됩니다. 조사자는 냄새 쪽으로 향하는 냄새 맡는 시간을 후각 반응성의 측정으로 기록합니다. 일반적인 쥐는 반복적인 증상(습관화)을 통해 냄새에 대한 반응이 감소하는 것을 보입니다. 그런 다음 실험자는 새로운 냄새에 대한 냄새를 증가시키는 새로운 냄새를 제시합니다 (습관화 제거). 새로운 냄새를 반복적으로 제시 한 후 동물은 다시 습관화를 보입니다. 이 프로토콜은 물, 두 가지 이상의 비사회적 냄새 및 두 가지 사회적 냄새의 제시를 포함합니다. 이 검사는 실험적 혼란을 줄이는 것 외에도 새로운 knockout, knock-in 및 conditional knockout 마우스 라인의 후각 시스템 기능에 대한 정보를 제공할 수 있습니다.
서론
마우스는 다른 개인을 인식하는, 음식을 찾는 새로운 환경을 탐색하기위한 후각에 의존하고, 성적 행동 1-3. 그것은 연구자가 실험 동물 음식, 사회적 상호 작용, 또는 마우스의 응답을 유도하기위한 어떤 냄새를 포함하는 행동 테스트를 투여하기 전에 냄새가 작동하는 감각을 가지고 있는지 여부를 설정하는 것이 중요하다. 후각 상실증 또는 무능력 행동 패러다임 다양한 가양 음화 초래할 수있는 다른 냄새 구별하기 때문에 행동 검사의 다른 유형이 수행되기 전에 검출하고 악취를 구별하는 마우스의 능력은 확립되어야한다.
후각 습관화 / dishabituation 시험 제 1980 4에 기재 하였다. 시험은 박사에 의해 마우스에서 사용되도록되어왔다. 뮤 양 및 재클린 크롤리 5. 이 조사는 ESTA 할 수있는 간단하고 저렴한 검사입니다마우스를 감지하고 냄새를 구별 할 수 blish. 후각 테스트뿐만 아니라,이 테스트는 조사자 마우스의 일반적인 동작을 관찰하고 초기 테스트 요법으로 수행 할 수있게한다. 질적 마우스의 운동에 대한 관찰, 불안의 징후, 활동 수준, 음식 냄새 대 사회 냄새에 반응 테스트를 수행 할 수있는 새로운 영역을 신호 수 있습니다.
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프로토콜
다음 실험에 사용 된 성인 남성 쥐가 생성되어 어두운 14 시간 조명 및 10 시간 (20시부터 6시까지 시간) 낮의주기, 22 ° C의 주변 온도에서 베일러 대학에서 보관 하였다. 마우스는 음식과 물에 대한 광고 무제한 액세스 권한을 부여했다. 마우스에 대한 모든 절차는 베일러 대학 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 된 실험실 동물의 관리 및 사용과 동물의 프로토콜에 대한 건강 가이드의 국립 연구소에 부합했다. 마우스는 늦은 아침 / 오후 일찍 시험 하였다. 연구자 아래의 모든 절차는 냄새를 제거하고 오염을 방지하기 위해 장갑을 착용해야합니다.
비 사회적 냄새 1. 준비
- 신선한 비 사회적 냄새를 테스트의 매일을 준비합니다.
주 : 조사는 냄새를 준비하기 위해 장갑을 사용해야합니다.- 물 각각 10 ㎖로 3 원심 분리기 튜브를 입력합니다.
- 15 ml의 & #에 바나나 추출물의 피펫 100 μL(160), 원뿔 튜브와 1 초 15 ML 원뿔 튜브에 아몬드 추출물 100 ㎕ : 100 희석.
참고 : 제 15 ML 튜브는 물을 포함 할 것이다.
사회 냄새 2. 준비
- 발생합니다 아침 시험....
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결과
기술 된 프로토콜에 따라, 결과는 열 성인 (출생 후 하루 90-120) 남성 C57BL / 6J 마우스와 팔 남성 FVB 혼합 배경 변형 (출생 후 하루 50 ~ 70)를 사용하여 기록 하였다. 테스트는 여러 날에 걸쳐 하나의 연구자에 의해 수행되었다. 그래프의 각 점은 냄새를 조사 소요되는 평균 시간을 나타냅니다.
물에 침지 면봉이 처음에 도입되는 경우에는,이 마우스는 새로운 물체 (: 처음 세 데이터 포인트도 1)를 조사하고 많은 시간을 소비한다. 각각의 연속적인 표현으로, 더 적은 시간이 습관화를 나타내는, 면봉을 조사 소요된다. 새로운 냄새가 도입 될 때, 시간이 업틱 생쥐 새로운 냄새와 이전 (: 아몬드 데이터 포인트도 1)를 구별 할 수 있음을 나타내는, 면봉을 조사 보냈다있다. 또, 각각의 연속 프리젠 테이션, 적은 시간이 냄새를 조사 소요된다. 마우스는 상당한 D를 표시.......
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토론
이 문서에서 제공되는 결과는 마우스에 최적입니다. 마우스는 새로운 냄새에 강한 반응을 보여, 신속하게 길들. 이 방법의 주요 단계 중 하나는 악취의 제조이다. 조사는 오염을 방지하기 위해 서로 냄새를 분리하기 위해 상당한주의를 기울 필요가있다. 또 다른 중요한 측면은 면봉의 표현이다. 마우스가 팁을 조사 할 수 있지만, 끝에 찢어지지 않도록 조사는면 팁의 최적의 위치 문제를 해결해야합니다. 시험의 중요한 구성 요소는 악취의 선택이다. 우리는 세 가지가 아닌 사회적 냄새를 제시하지만 추가 냄새를 포함 어렵지 않을 것입니다. 한 가지주의해야 할 점은 서로 눈에 띄게 다른 냄새를 선택하는 것입니다. 비슷한 냄새가 순차적으로 제시하는 경우 하나는 "바닥 효과"를 관찰 할 수 있습니다. 또한, 마우스는 너무 많은 소설 냄새가되게 할 때 그들의 반응을 줄이기 위해 시작할 수 있습니다. 수사관을 포함하고자하는 경우뉴 부가 냄새는 그 / 그녀는 시험을 추가로 일을 포함 할 수 있습니다. 그것은 각각의 마우스를 테스트하기 위.......
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 Baylor University Research Council 보조금과 Epilepsy Foundation의 연구 보조금으로 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 마우스 케이지 | Allentown | 표준 마우스 케이지 | |
| 와이어 뚜껑 | Allentown | BCU 마우스 WBL 2500 | |
| 침구 | Harlan | 7090 Sani-Chips | |
| 면봉 | VWR | 89031-270 | 6 "나무 손잡이 |
| 바나나 추출물 | McCormick | ||
| 아몬드 추출물 | McCormick | ||
| 실험실 테이프 | VWR | 89098-062 | |
| 스톱워치 | VWR | 62374-000 | |
| 니트릴 장갑 | VWR | 82026 | |
| 타이밍 장치 | VWR | 61161-350 | |
| 15 ml 원뿔형 튜브 | VWR | 89003-294 | |
| 2 L 비커 | 파이렉스 | 1003 | |
| 파라필름 | 파라필름 | PM-992 | 4" x 250' |
| 캡이있는 1L 병 | VWR | 89000-240 |
참고문헌
- Doty, R. L. Odor-guided behavior in mammals. Experientia. 42, 257-271 (1986).
- Restrepo, D., Arellano, J., Oliva, A. M., Schaefer, M. L., Lin, W. Emerging views on the distinct but related roles of the main and accessory olfactory systems in respon....
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재인쇄 및 허가
