EAE와 쥐의 중추 신경계에서 Mononuclear 세포의 분리
Summary
이 비디오에서는 실험자가 면역 질환 encephalomyelitis와 쥐의 중추 신경계에서 mononuclear 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다.
Abstract
이러한 실험 면역 encephalomyelitis (EAE, 1), 또는 급성 회백수염, 라임 neuroborreliosis 또는 neurosyphilis로 CNS의 감염에 대한 면역 반응으로 중추 신경계 (CNS)에 감독 면역 질환을 공부하든, 그것은 자주 CNS – 침투 면역 세포를 분리하는 데 필요한.
이 비디오 프로토콜에서 우리는 EAE와 암흑의 CNS에서 mononuclear 세포 (MNCs) 분리하는 방법을 보여줍니다. 이 절차의 첫 단계는 피를 CNS 물을 대는 혈관에 남아하지 않도록 생리 식염수와 설치류의 심장 재관류가 필요합니다. 모든 혈액 오염 인공적으로 명백한 CNS – 침투 MNCs의 수를 증가하고 침투해 면역의 명백한 구성을 변경할 수도 있습니다. 그렇다면 우리는 단일 세포 현탁액을 준비하는 후속 dilaceration에 대한 쥐의 두뇌 및 척수를 제거하는 방법을 보여줍니다. 이 정지는 MNCs을 분리하기 위해 두 계층 Percoll 기울기에 구분합니다. 세척 후,이 세포가 모든 필요한 절차를 거쳐 준비가 된 것입니다.
이 프로 시저를 사용하여 격리 Mononuclear 세포가 가능한하고 전기 생리학, 유동세포계측법 (외과), 또는 생화학 사용할 수 있습니다. 기술은 멸균 조건하에 수행되는 경우 (조직 문화 후드에 살균 장비를 사용) 세포도 조직 문화 매체 재배하실 수 있습니다. 주어진 세포 인구는 더욱 자기 분리 절차 또는 외과 중 하나를 사용하여 정화하실 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 절차는, 살아있는 동물과 관련된 모든 절차로, 귀하의 기관의 동물 사용 및 관리위원회의 승인을 받아야합니다. 우리는 전에와 절차를 수행하는 동안 동물에 주어집니다 마취의 충분한 수준을 보장하기 위해 최초의 심장병 perfusions을 수행할 때 수의사 또는 동물 기술자가 존재하는 것이, 그리고 동물들이 불필요 통증이나 고통을 받아야하지 않는 것이 좋습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS, 1x, sterile | Reagent | Gibco / Invitrogen | 14190-250 | |
| Cell strainer, 70 um | Tool | Fisher | 08-771-2 | |
| Percoll | Reagent | Sigma | P1644 |
References
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and clinical scoring of chronic-relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Visualized Experiments. 5, .
