EAE Ratlarda Merkez Sinir Sistemi Mononükleer Hücreleri İzolasyon

Summary

Bu video sıçanlarda deneysel otoimmün ensefalomyelit ile merkezi sinir sistemi mononükleer hücreleri izole etmek için nasıl göstermektedir.

Abstract

Deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE, 1), ya da bir enfeksiyon, çocuk felci, Lyme neuroborreliosis, ya da nörosifiliz olarak MSS, bağışıklık yanıtı gibi merkezi sinir sistemi (MSS) yönelik bir otoimmün hastalık eğitim olsun, genellikle MSS-infiltre bağışıklık hücrelerini izole etmek için gerekli.

Bu video protokol EAE ile sıçan CNS (ÇUŞ) mononükleer hücreleri izole etmek için nasıl göstermektedir. Bu prosedürün ilk adımı MSS sulama kan damarlarının kan kalmasını sağlamak için tuzlu su çözeltisi ile kemirgen kardiyak perfüzyon gerektirir. Herhangi bir kan kontaminasyon yapay görünür MSS-infiltre ÇUŞ sayısı artacak ve bağışıklık sızmak görünür kompozisyonu değiştirebilir. Daha sonra, tek bir hücre süspansiyonu hazırlamak için sonraki dilaceration sıçan beyin ve omurilik nasıl çıkarılacağını göstermektedir. Bu süspansiyon ÇUŞ izole etmek için bir iki katmanlı Percoll degrade ayrılır. Yıkadıktan sonra, bu hücreler daha sonra gerekli tüm prosedür geçmesi hazırız.

Bu yordamı kullanarak izole edilen mononükleer hücreler canlı ve elektrofizyoloji, flow sitometri (FACS), ya da biyokimya için kullanılabilir. Tekniği steril koşullar altında yapılır (bir doku kültürü kaputu steril alet kullanarak) hücreleri de doku kültürü ortamında yetiştirilen olabilir. Belli bir hücre popülasyonu daha fazla manyetik ayırma işlemleri ya da bir FACS kullanılarak temizlenmiş olabilir.

Protocol

Derinden sıçanlarda uyutmak. % 70 etanol ile Sprey ve kan damarları hücreleri (sol ventrikül ile sağ kulakçıklar ve serpmek kesim) kaldırmak için 10 dakika süreyle PBS ile kardiyak perfüzyon. Buz gibi soğuk PBS içeren 50 ml'lik bir tüp içinde beyin ve omurilik ve yer çıkarın. Buz gibi soğuk PBS 10 ml içeren bir 10 cm petri yerleştirilen 70 mm hücre süzgeç beyin ve omurilik kesin. 1 ml steril bir şırınga pistonu g…

Discussion

Bu prosedür, canlı hayvanlar ile ilgili tüm prosedürler, kurumun hayvan kullanımı ve bakımı komitesi tarafından onaylanmış olması gerekir. Biz bir veteriner hekim veya bir veteriner teknisyeni, hayvan öncesi ve işlem sırasında verilen anestezi yeterli bir düzeyde sağlamak için ilk kalp perfüzyonları yaparken mevcut olması ve hayvanların gereksiz yere acı veya sıkıntı tabi olmadığını tavsiye ederiz.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
PBS, 1x, sterile	Reagent	Gibco / Invitrogen	14190-250
Cell strainer, 70 um	Tool	Fisher	08-771-2
Percoll	Reagent	Sigma	P1644