Aquí se presenta un protocolo para medir la densidad de la papila fungiformes de fotografias digitales. Este método se basa el establecimiento de prioridades y la métrica características objetivas en el trabajo descriptivo original en papilas fungiformes por Miller & Reedy (1990).
El objetivo del Protocolo papilas Denver es utilizar una clave dicotómica para definir y priorizar las características de papilas fungiformes (FP) para asegurarse de puntuación consistente entre goleadores. Este protocolo se basa apagado de una necesidad que ha surgido de las últimas dos décadas de investigación gusto usando FP como sustituto de la densidad de poros gusto. Densidad FP históricamente ha sido analizado utilizando Miller y Reedy de 1990 caracterizaciones de su morfología: redondo, manchado ligero, grande y elevada. En este trabajo, los autores advertidos de que las definiciones más estrictas de FP morfología necesaria a perfilarse. A pesar de este llamado a la acción, el seguimiento de la literatura ha sido escasa, con la mayoría de los estudios continuos para citar Miller & Reedy del trabajo original. En consecuencia, los informes de densidad FP han sido muy variables y, combinado con pequeños tamaños de muestra, puede contribuir a las conclusiones discrepantes sobre el papel de FP en el sentido del gusto. La Genética del Laboratorio Taste exploraron esta aparente inconconsistencia en el conteo y se encontró que goleadores fueron priorizando individualmente la importancia de estas características de forma diferente y no tenía ninguna orientación para cuando una papila tenía algunos, pero no todos, de las cualidades reportados de FP. El resultado de esta subjetividad es recuentos de PF altamente variables de la misma imagen lengua. El Protocolo papilas Denver ha sido desarrollado para remediar esta consecuencia mediante el uso de una clave dicotómica que más define y prioriza la importancia de las características presentadas por Miller & Reedy. El método propuesto podría ayudar a crear una forma estándar para cuantificar la FP para los investigadores en el campo del gusto y estudios nutricionales.
Las papilas son los golpes visibles en la superficie de la lengua. Hay cuatro tipos de papilas fungiformes: (FP), foliadas, caliciformes y filiformes. Mientras papilas filiformes se extienden sobre la superficie de la lengua, circumvallate se localizan sólo en la parte posterior de la lengua, y foliadas se encuentran en los lados. En contraste, FP están situados hacia la parte delantera de la lengua. FP, foliadas, y papilas caliciformes se consideran gustativa porque tienen el potencial de contener papilas gustativas filiformes, mientras no lo hagan. Las papilas gustativas son grupos de células responsables de la detección de estimulantes del gusto químicos y la transducción de los estímulos en una señal gustativa en el cerebro. Saliva y alimentos moléculas entran en las papilas gustativas a través de aberturas llamadas poros papilas gustativas donde las moléculas y luego tienen el potencial de activar células gustativas.
Curiosamente, hay grandes diferencias individuales en la densidad de la yema del gusto, como se observa por primera vez en un estudio histológico de las lenguasde 18 cadáveres (Miller, 1988) 1. Las papilas gustativas en sí no son visibles en la superficie de la lengua, sin embargo, los poros del gusto son visibles cuando se utilizan las técnicas adecuadas de ampliación, de iluminación y de tinción que llevaron Miller & Reedy (1990) para desarrollar un método para identificar los poros del gusto y papilas fungiformes utilizando videomicroscopía en la vida los seres humanos 2. Varios laboratorios han modificado su técnica videomicroscopía original, utilizando la fotografía fija y poco o ningún aumento. Sin embargo, desde papilas fungiformes son mucho más fáciles de visualizar que son poros utilizando estas últimas técnicas, laboratorios se volvieron a contar papilas fungiformes en lugar de poros gustativas. Al hacerlo, se asume que la densidad de papila fungiformes es una medida de proxy razonable para la densidad de poro gusto, a pesar de que las papilas fungiformes muchos no contienen poros de sabor o paladar 3; no sólo son FP más visible y accesible que circunvaladas y papilas foliadas, pero su captura de imagen es inferior time consume que el análisis de los poros gusto por el método alternativo de videomicroscopía 2,4. En 1990, Miller & Reedy utilizan esta técnica para encontrar ese sabor densidades de poro se correlacionan con densidades de PF 3 que fue corroborada en Bartoshuk et al. 5 Además de esta relación anatómica, Miller & Reedy también encontraron que los 8 individuos en la parte superior medio de la distribución de la densidad de poros gusto también una clasificación de sacarosa, NaCl, y el propiltiouracilo (PROP) como significativamente más intensa que lo hicieron las otras 8 personas 3. Trabajos posteriores por Bartoshuk et al. (1994) observó una correlación entre la intensidad de sabor PROP supraumbral y densidad papila fungiformes, así como la densidad de poros gusto, en 42 sujetos 5. Este método conveniente llevó a los estudios influyentes de información que los sujetos cuyas lenguas tienen muchas papilas provocan una reacción más fuerte a muchos estimulantes del gusto, incluyendo el estimulantes del gusto amargo feniltiocarbamida (PCT) y PROP 6,7.
PTC y PROP son estimulantes del gusto bien investigados frecuentemente utilizados debido a la clara relación entre fenotipo sensibilidad del gusto de una persona y su genotipo. Los estudios de población han demostrado que las personas que tienen la diplotype recesiva homocigota del gen, TAS2R38, tienen una sensibilidad significativamente menor para sostener que los portadores de la variante dominante o heterocigótico del gen 8-10. Este fenómeno hereditario se informó por primera vez en 1932, cuando Arthur L. Fox anunció su descubrimiento de la "ceguera gusto" a PTC 11. Entre las personas capaces de probar estos compuestos amargos, la intensidad del gusto informó pueden variar en cualquier lugar desde un poco desagradable para terriblemente amarga 6. Para tener en cuenta la varianza que no puede ser explicado por TAS2R38, la teoría fue propuesta que podría atribuirse a la densidad de FP en la lengua 4.
Como la investigación gusto avanzaba, el field se dividió en dos escuelas de pensamiento en torno a esta teoría sobre el papel de FP y sensibilidad sabor amargo. Aunque muchos estudios corroboran la afirmación original de que la densidad de FP es un factor en el PROP sensibilidades 4,6,12,13, ha habido una contingencia pequeña, pero importante, que se ha encontrado evidencia para refutarlo, reportando una incapacidad para replicar la función 10, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) advirtió que la tendencia es muy variable; Densidad FP hace cuenta no uniforme de las diferencias en la sensibilidad a la amargura a través de temas, y fue sólo demostrable para los sujetos con al menos una sensibilidad moderada a PROP 7. Además de la utilización de la Miller & Reedy método definido con menos rigor en la forma de cuantificar FP, es importante señalar que con excepción de la Offspring Beaver Dam Study 15 realizado por Fischer et al., La mayoría de los estudios anteriores tenían pequeña muestra tamaños que también pueden contribuir a resultados inconsistentes enel papel de la FP en el sabor.
En pocas palabras, en Miller & Reedy del documento sobre la metodología seminal (1990), los autores manchadas lenguas azules de cuantificar porque FP FP siguen siendo de color rosa, mientras que las papilas filiformes absorben el colorante y se vuelven azules. Se clasifican FP como "estructuras redondeadas de color rosa alrededor de 0,5 mm de diámetro" 2. Si bien los autores informaron que antes de utilizar este método para su posterior labor de análisis, las características de FP deberían estar más estrictamente definidos y concluyeron que la variación ya se ha señalado en la literatura "podría ser atribuible a diferentes poblaciones sometidas, diferentes métodos y diferentes investigadores" 2, su la investigación ha dado lugar a las características comúnmente aceptadas que el FP sean redondos 17,18, amplio 2, rosa o manchado ligero 2, 4 y elevado. A primera vista, estas características parecen muy sencillo. En la Genética del Laboratorio Taste (GOT Lab o laboratorio), el uso del conocidohod se complicó por los intentos individuales de artilleros en la clasificación y priorización de la importancia de las características anteriores, cuando algunas, pero no todas, de las características estaban presentes. Estas complicaciones incluyen pequeñas papilas que apareció rosa en medio de mucho mayor papilas; toda la lengua que absorbe el colorante azul eliminando así clasificación basada en la variación de color; papilas oblonga en vez de todo el año; y las lenguas que no tienen variación en elevación, todo lo cual contribuyó a goleadores de informes ampliamente variados conteos de PF de la misma imagen.
Estas variaciones en el análisis nos llevó a revisar la literatura con el fin de determinar la subjetividad, se determinarán las excepciones a las características de PF comúnmente aceptadas y finalmente elaborar un protocolo para definir y marcar con precisión y objetividad FP.
En primer lugar, FP forma se describe en la literatura como un redondeado, en forma de hongo estructura 17,18. Sin embargo, notable excepciónTambién se mencionaron los iones. Miller hizo hincapié en que el término "fungiformes" es un término equivocado y que muchos FP no están en forma de seta, pero puede variar ampliamente en tamaño y morfología de 18. Melis et al. (2013) también describe varios papilas que se considera "distorsionada", donde el diámetro FP en una dirección era por lo menos dos desviaciones estándar por más tiempo que en otra dirección 19. Por otra parte, Cheng & Robinson encontraron que al indicar FP mediante tinción, que oscilaron entre plana rematada a alargada en aspecto 20. Tomando nota de las excepciones mencionadas, la caracterización de un FP de ser redonda y aparece en forma de hongo una definición demasiado estrecha.
En segundo lugar, el color FP se describe como "círculos de color rosa contra un fondo azul" 7 después de la tinción de la lengua con colorante azul. Aunque las manchas más ligero era el criterio más coherente de FP en toda la literatura todavía no era un partido de clasificación uniforme. Cheng y ; Robinson observó que el FP no siempre se tiñeron levemente, por lo que la identificación difícil e incierta 20. Parece entonces que las lenguas absorben tinte diferente y mientras que el contraste es evidente en muchas lenguas, algunas se vuelven completamente azul sin distinción, mientras que otros pierden inmediatamente cualquier rastro de colorante azul 21.
La tercera característica, el tamaño de FP, era bastante consistentes entre los papeles, que van desde 0,5 mm a 0,97 mm 6,18. En la literatura Miller observó que había dos rangos de tamaño de papilas en la parte anterior dorsal de la lengua. Las papilas con diámetros más grandes eran principalmente fungiformes y papilas cónica, mientras que las papilas con un diámetro más pequeño eran en su mayoría filiforme 18. Sin embargo, con la excepción de la Offspring Beaver Dam Study 21, el tamaño no apareció para determinar si una estructura es un FP en la literatura, pero se proporcionan para papilas ya clasificada como "fungiformes".
_content "> Por último, la elevación aparece como el cuarto FP característica 4 aunque Miller señaló que la distinción entre filiformes y papilas fungiformes es difícil cuando se utiliza este criterio cerca del margen de la lengua. Dio dos ejemplos de FP que variaron en gran medida en la elevación, uno de ellos 0,8 mm de altura, mientras que otro fue de menos de 0,1 mm de altura, pero todavía tenía dos poros gustativas que se observaron con claridad 18. Esta observación también fue seguido y confirmado por Shahbake et al. 4Estas definiciones y sus excepciones reportados muestran que el campo gusto ha reconocido desde hace tiempo la falta de coherencia en la caracterización de FP y las deficiencias del protocolo de uso común de Miller & Reedy. De hecho, Miller & Reedy exhortaron el campo para definir con más detalle las características de FP 2. La hipótesis de que goleadores estaban dando un peso diferente a las características y priorizar su importancia de manera diferente cuando papillae no cumplió con todos los criterios, por ejemplo, cuando una papila era grande y con forma de hongo, pero manchada azul. Se razonó que los investigadores de los estudios publicados anteriormente probablemente hicieron lo mismo que, cuando se combina con pequeños tamaños de muestra, puede dar cuenta de la variedad de resultados procedentes del uso de este método.
El Gobierno de Taiwán Lab abordó este vacío en la metodología FP mediante el desarrollo de una guía que define cada característica utilizando mediciones objetivas y prioriza las características para indicar que tiene prioridad en el análisis. Este método es el Protocolo de Denver papilas (DPP), una clave dicotómica con características claras y distintas de FP para garantizar recuentos precisos y repetibles a partir de fotografías digitales de la lengua. DPP es un método propuesto para estandarizar el método de Miller & Reedy utilizado previamente, eliminando así la interpretación individual y garantizar resultados más consistentes en el análisis de la densidad de FP. Al hacerlo, DPP se puede utilizar para más confianza determine el papel de la FP en el sabor.
Las imágenes tomadas de la lengua de los temas fueron analizados por los científicos ciudadanos (goleadores) del laboratorio que son los verdaderos sujetos de este estudio. Núcleo del Laboratorio de ciudadanos científicos está compuesta por miembros de la comunidad con edades (años) de 16 a mediados de los años 80. Un informe de evaluación sumativa encargado por el Museo en 2012 describe ciudadanos científicos como tener un fuerte interés por la ciencia y con dos tercios de haber ganado un título universitario en una disciplina científica 22. Ciudadanos científicos Candidato son reclutados actualmente a través del boca a boca, debe completar con éxito un proceso de entrevistas con voluntarios veteranos en el Museo, y someterse a un período de prueba en la exposición permanente de salud del Museo, la Expedición de la Salud, antes de que tengan la oportunidad de aplicar para una posición en el laboratorio. Una vez aceptado en el laboratorio, los científicos ciudadanos se someten a un entrenamiento de 12 semanas para obtener la certificación para inscribirse sujeto humanos. A raíz de esta certificación, que son capaces de tomar los módulos de formación en diversas técnicas en el laboratorio (por ejemplo, recuento papilas, la extracción de ADN) y siguientes certificaciones adicionales y medidas regulares de control de calidad, estos científicos ciudadanos tienen la oportunidad de participar activamente en el análisis de datos. Ciudadanos científicos ofrecen voluntariamente su tiempo y no son compensados por sus contribuciones al Museo.
El uso de DPP, la varianza dentro de la imagen a través de cuenta goleadores independientes y cuenta de dentro-goleador disminuyó significativamente. Si bien este método hace que el análisis de densidad FP visual sin videomicroscopia menos subjetiva, debe tenerse en cuenta que este método sólo puntuaciones de FP. DPP no puede garantizar que las estructuras clasificadas como FP tienen poros de sabor y son, por tanto, las papilas gustativas ni que los recuentos son un reflejo de la densidad brote verdadero sabor 20,23 .La naturaleza de este método es que establece la confiabilidad a través de la consistencia y precisión; sin embargo, puede ser sesgando los resultados en una dirección coherente. Para probar la precisión con respecto a otros métodos utilizando una verdadera medida de la densidad de yema del gusto (por ejemplo, videomicroscopía) se extendería más allá del alcance de esta study.However, mediante la caracterización de la morfología de FP más estricta y la creación de una clave dicotómica, este método se dirige a Miller & cargo de Reedy al campo que más caracterización de FPque hay que hacer para tener un consenso sobre su morfología y cuantificación 2. Además, indicaron que esta caracterización puede "aclarar algunas de las diferencias entre los sujetos y explicar algunos de los resultados dispares entre los investigadores 2." Al proporcionar un método uniforme de cuantificación, muchas de las discrepancias sobre el papel de la FP en sabor y nutricionalmente investigación relacionada puede ser rectificado.
La clave dicotómica se puede ajustar para las diferentes técnicas de captura de imagen. La distancia conocida para la escala de medición se puede configurar fácilmente al diámetro utilizado en cada laboratorio y la recesión se puede descartar si envoltura o vidrio saran se colocaron sobre la lengua para la captura de imágenes. En el Laboratorio de GOT, se encontró que la lengua neutra proporciona la mejor definición de las papilas. Esto puede ser debido a la cantidad de luz en el laboratorio que causó envoltura o vidrio saran para reflejar la luz de nuevo en la cámara de la creación de una mirada que hizo asnoseva- difícil. Algunos laboratorios han dicho que encuentran el tinte más difícil de contar, pero el laboratorio GoT encontrado un colorante alimenticio azul diluido a una concentración de una y treinta y seis minutos siempre que el contraste ideal entre fungiformes papilas filiformes y en la mayoría de las lenguas.
La creación de una clave dicotómica para la caracterización FP permitirá a los investigadores en diferentes laboratorios, utilizando una variedad de métodos de captura de imagen, para analizar sistemáticamente las estructuras en la lengua y tener confianza en la comunicación de sus resultados. Por último, el uso de una clave dicotómica puede tener efectos en otras áreas de la metodología científica en donde las cualidades de estructuras u objetos están proporcionando los números inconsistentes de estudio a estudio.
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue financiado en parte por el Premio de Ciencias de la Educación Asociación (SEPA) R25 RR025066 entre 2008-2012 de los Institutos Nacionales de Salud y el Centro Nacional de Recursos para investigación. Gracias a los colegas en el campo gusto por la discusión seria de la literatura, los resultados y la retroalimentación sobre el uso de DPP en varios escenarios de laboratorio: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Gracias también al liderazgo en el Museo de Denver de Naturaleza y Ciencia y el personal de apoyo a la ciencia ciudadana dentro de la Genética del Laboratorio Taste dentro de la Expedición de la Salud. Por último, gracias a todos nuestros ciudadanos científicos voluntarios por su tiempo y dedicación al desarrollo y el uso de este protocolo, incluyendo: Oso de Aragón, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A'nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodríguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.
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