ここでは、デジタル写真から茸状乳頭密度を測定するためのプロトコルを提示します。この方法は、ミラー&リーディ(1990)による茸状乳頭の元の記述の仕事に優先順位付けし、客観的な特性の測定基準を構築します。
デンバー乳頭議定書の目標は得点間の一貫性のスコアリングを確保するために、茸状乳頭(FP)の特性を定義し、優先順位を付けるために二分の鍵を使用することです。このプロトコルは、味細孔密度のプロキシとしてFPを使用して、味覚研究の最後の二十年から生じた必要性のオフに構築します。ラウンド、軽く染色し、大規模な、と上昇:FP密度は、歴史的にそれらの形態のミラー&リーディの1990特徴付けを用いて分析されています。本研究では、著者らは、FPの形態のより厳密な定義が概説するために必要なことをあらかじめご了承しました。アクションへの呼び出しにもかかわらず、フォローアップの文献にはミラー&リーディのオリジナル作品を引用し続け、ほとんどの研究で、不足しています。その結果、FP密度レポートは味覚感度のFPの役割に矛盾した結論に寄与することができる、小さなサンプルサイズと組み合わせて、非常に可変されているとしています。味覚ラボの遺伝学は、この明らかなinconを探検しましたカウント中sistencyとは、FPの報告資質のすべてではありませんが、得点には個別に異なるこれらの特性の重要性を優先したことを発見し、乳頭はいくつかを持っていたときには指導がなかったです。この主観性の結果は同じ舌画像の非常に可変FP数です。デンバー乳頭プロトコルをさらに定義し、ミラー&リーディによって出す特性の重要性を優先し、その二分の鍵を使用することにより、この結果を改善するために開発されました。提案手法では、味と栄養の研究の分野の研究者のためのFPを定量化するための標準的な方法を作成するのに役立つ可能性があります。
乳頭は舌の表面上に見えるのバンプです。茸(FP)、葉状、城壁で囲まれた、および糸状:乳頭の4つのタイプがあります。糸状乳頭は舌の表面に広がっているが、城壁で囲まれただけ舌の裏側に局在している、と葉状は側面にあります。これとは対照的に、FPは、舌の前方に向けて配置されています。彼らは糸状がいない間の味覚芽を含んでいる可能性を持っているので、FP、葉状および有郭乳頭は、味覚と考えられています。味蕾は、化学の味物質を検出し、脳内の味覚信号に刺激を伝達を担う細胞のクラスターです。唾液と食べ物の分子は、味分子はその後、味覚細胞を活性化する可能性を持っている味の孔と呼ばれる開口部を介して味蕾に入ります。
最初の舌の組織学的研究で観察されたように興味深いことに、味蕾密度に大きな個人差があり、18死体(ミラー、1988)から1。芽自体を味わう生活でビデオ顕微鏡を使用して、味の孔と茸状乳頭を識別するための方法を開発するためにミラー&リーディ(1990)を導いた適切な倍率、照明、染色技術を使用している場合しかし、味孔が表示され、舌の表面に表示されていません人間2。ラボの数は依然として写真とほとんど、あるいはまったくの倍率を使用して、元のビデオ顕微鏡法を変更しました。茸状乳頭は、より視覚化がはるかに容易になりますので、これらの後者の技術を使用して孔があり、ラボは味孔の代わりに、茸状乳頭をカウントになりました。そうすることで、それは茸状乳頭密度は、多くの茸状乳頭味の孔を含んでいるか、芽3を味わっていないにもかかわらず、味細孔密度のための合理的な代理指標であるとします。城壁で囲まれたと葉状乳頭よりFPより可視およびアクセス可能であるが、それらの画像取り込みが少ないTIだけでなく私は、ビデオ顕微鏡2,4の別の方法を介して味細孔分析よりも消費します。 1990年に、ミラー&リーディは気孔密度はさらに、この解剖学的関係に加えてBartoshuk ら 5に裏付けされたFPの密度3と相関すること味を見つけるために、この技術を使用し、ミラー&リーディも発見した上位8人味孔密度分布も評価ショ糖、塩化ナトリウム、及びプロピル(PROP)の半分の大幅より強い他の8人3がやったよりも。 Bartoshuk らによるその後の研究(1994)は42被験者5に、閾値上PROPの味強度と茸状乳頭密度、ならびに味孔密度との相関関係を観察しました。この便利な方法は、その舌の多くの乳頭を有する対象は、苦味物質のフェニルチオカルバミドを含む多くの味物質に強い反応を誘発することを報告して影響力の研究につながった(PTC)とPROP 6,7。
PTCとPROPは、しばしば人の味覚感度の表現型とそれらの遺伝子型との間に明確なリンクのために使用されるよく研究味物質です。集団研究は、遺伝子のホモ接合劣性ディプロを持っている人、TAS2R38は、遺伝子8-10の支配またはヘテロ変異体のキャリアよりもPROPする有意に低い感度を有することが示されています。この遺伝現象は最初のアーサー·L·フォックスは、PTC 11に「味失明」の発見を発表した1932年に報告されました。これらの苦味化合物を味わうことができる人々の間で、味の強度は耐え難いほど苦い6に少し不快からどこにでも変えることができると報告しました。 TAS2R38では説明できない分散を説明するために、理論は、それが舌の4にFPの密度に起因することができることを出すました。
味の研究が進むにつれて、金融商品取引法dはFPと苦味感受性の役割に関するこの理論の周りに2つの考え方に分割しました。多くの研究は、FPの密度がPROPの要因は、4,6,12,13の感度であることを、元の主張を裏付けているが、ロール10を複製することができないことを報告し、証拠はそれに反論することが判明している小さな、しかし重要な不測の事態がありました、 14,15,16。 Delwiche ら 。 (2001)の傾向が非常に可変であることを警告しました。 FP密度は被験者全体の苦味感受性の違いを一様ではないアカウントを行い、7を PROPするには、少なくとも中程度の感度を有する被験者についてのみ実証しました。 FPを定量化する方法についてはあまり厳密に定義されたミラー·リーディ方法の使用に加えて、フィッシャーによって行わビーバーダムの子孫研究15を除いて、 ら 。、上記の研究のほとんどは小さなサンプルがあったことに留意することが重要ですまた、上の矛盾の発見に寄与することができるサイズ味はFPの役割。
糸状乳頭は、色素を吸収して青色にしながら、FPはピンクのままであるため簡単に説明すると、ミラー&リーディの精液の方法論の論文(1990)において、著者らは、FPを定量化するために青い舌を染色しました。彼らは、「丸みを帯びたピンク色の構造は直径約0.5mm」2としてFPに分類しました。著者らはさらに、分析作業のために、このメソッドを使用する前に、FPの特性をより厳密に定義する必要があることを助言し、既に文献に記さばらつきが2」は、異なる対象集団、異なる方法、および異なる研究者に起因するかもしれない」と結論付け、その一方で研究では、FPが17,18、大2、ピンクやライター2、および上昇し4を染色ラウンドであることが一般に受け入れられている特性につながっています。額面通りにすると、これらの特性は非常に単純に表示されます。味覚ラボの遺伝学では、出会ったの使用(ラボまたはラボを持って)HODは予選で得点の個々の試みによって、複雑で存在していたいくつかの、全てではないが、特性の上記の特性の重要性を優先しました。これらの合併症は、はるかに大きい乳頭の真っ只中にピンクが登場小さな乳頭を含め、このように色の変化に基づいて分類を排除する青色色素を吸収し、全体の舌。代わりに丸の長方形の乳頭。異言は、同じ画像の広く多様なFP数を報告得点に貢献し、すべてのそれらの標高にばらつきを有していません。
分析におけるこれらの変化は、主観を特定一般的に受け入れられてFP特性に例外を特定し、最終的に正確かつ客観的にFPを定義し、得点のプロトコルを考案するために、文学を確認するために私達を導きました。
まず、FPの形状が丸みを帯びた、マッシュルーム状構造17,18として文献に記載されています。を除くしかし、注目すべきイオンも言及しました。ミラーは、用語「茸」はキノコ形されていない誤った名称と、その多くのFPであるが、サイズおよび形態18で広く変えることができることを強調しました。メリスら 。 (2013)は、一方向にFP径が他の方向19に比べて、少なくとも2つの標準偏差より長かったと考えられていたいくつかの乳頭"歪んだの、「記載しました。また、チェン&ロビンソンは、染色によりFPを示すときに、彼らは外見20にフラット突破から長尺の範囲であったことがわかりました。上記の例外を指摘し、FPの特性のラウンドであるとキノコ形は狭すぎる定義が表示されます。
第二に、FPの色が青色染料と舌を染色した後、7「青の背景にピンクの円」と記載されています。ライターを染色することは文献を通してFPの最も一貫した基準であったが、それはまだ均一な修飾子ではありませんでした。チェン& ;ロビンソンは、識別が困難と20不確実な作り、FPが常に軽く染色されなかったことを観察しました。それは、舌が異なる色素を吸収し、コントラストは、多くの舌には明らかであるが、他はすぐに青色色素21の痕跡を失うながら、いくつかは区別せずに完全に青になっていることを次に表示されます。
第3の特徴、FPの大きさは、0.5ミリメートルから0.97ミリメートルの範囲の6,18、論文の中でかなり一致しました。文献ではミラーは、舌の背側前方に乳頭の2つのサイズの範囲があったことを指摘しました。小径の乳頭のほとんどが糸状18であった、より大きな直径の乳頭は、主に茸状及び円錐乳頭ました。しかし、ビーバーダムの子孫研究21を除いて、大きさは構造が文献でFPがあるかどうかを判断するためには表示されませんでしたが、すでに「茸」に分類乳頭に供しました。
_content ">最後に、上昇はミラーが指摘しても、舌の縁の近くに、この基準を使用する際に糸状と茸状乳頭の間の区別が困難である特徴第FP 4として表示されている。彼は、標高に大きく変化FPの2つの例を与え、別の高さが0.1mm未満であったが、それでも明らかにこの観察はまた、フォローアップとShahbake らによって確認された。18の観察された2つの味孔を有していた。4 1は、高さが0.8ミリメートルでありますこれらの定義とその報告例外は味フィールドが長いFPおよびMiller&リーディから一般的に使用されるプロトコルの欠点を特徴付けるに矛盾を認識していることを示しています。実際、ミラー&リーディはさらにFP 2の機能を定義するフィールドをexhortedを。私たちはときに、PAP得点が異なる特性に異なる重みを与え、その重要性を優先したという仮説を立てましたillaeは、乳頭が形大きなキノコだったときのように、すべての基準を満たすことができなかったが、青色に染色します。これは、以前に発表された研究の研究者は、おそらく小さなサンプルサイズと組み合わされた場合、この方法の使用から来る様々な結果を説明することができるこれは、同じことをやったと推論されました。
GOTラボは、客観的な測定を使用して各特性を定義し、分析に優先かを示すために特性を優先し、ガイドラインを開発することによって、FP法では、このギャップを取り上げました。この方法は、デンバー乳頭プロトコル(DPP)、舌のデジタル写真から正確で再現数を確保するためにFPの明確かつ明瞭な特性を持つ二分の鍵です。 DPPは、このように、個々の解釈を除去し、FP濃度を分析するときに、より一貫性のある結果を確保し、以前に使用されミラー&リーディ方法を標準化するための提案された方法です。そうすることにより、DPPは、より自信を持ってDを使用することができます味はFPの役割をetermine。
被験者を撮影した舌画像は、この研究の真の主題である研究室の市民科学者(得点)で分析しました。市民科学者の研究室のコアは、16から80年代半ばに、年齢(歳)の範囲のコミュニティからのメンバーで構成されています。 2012年に博物館が委託総括評価報告書は、科学に強い関心を持つようにし、三分の二は、科学的な規律22の大学の学位を取得したと市民科学者が記載されています。候補市民科学者が現在口の中の言葉を介して動員され、成功した博物館でベテランのボランティアとのインタビュープロセスを完了する必要があり、彼らは上の位置に適用する機会を持つ前に、博物館の永久的な健康展、遠征健康に試用期間を受けますラボ。一度研究室に受け入れ、市民の科学者たちは、ヒト対象を登録する認定になるための12週間のトレーニングを受けます秒。この認定に続いて、彼らは研究室での様々な技術( 例えば、乳頭計数、DNA抽出)と追加の認証および定期的な品質管理対策を次のようにトレーニングモジュールを取ることができるが、これらの市民科学者が積極的にデータ分析に参加する機会を持っています。市民の科学者たちは自分の時間をボランティアや博物館への貢献のために補償されません。
DPPを使用して、画像内の分散は、独立した得点を横切ってカウントし、内·スコアラーの数は有意に減少しました。この方法は以下の主観ビデオ顕微鏡なし視覚FP濃度解析を行うが、それはこの方法が唯一のスコアFPことに留意すべきです。 DPPはFPとして分類構造は味孔を有しており、従って味覚乳頭であることを保証することはできませんもカウントは、この方法の選択図の性質は、それが一貫性と精度を介して信頼性を確立することである本物の味蕾密度20,23の反射であること。しかし、一貫性のある方向の結果にバイアスをかけることができます。 、より厳密にFPの形態を特徴づけると二分キーを作成することで、このstudy.Howeverの範囲を超えて延長する味蕾密度( 例えば 、ビデオ顕微鏡)の真の測定値を使用して、他の方法に対する精度をテストするには、この方法は、アドレス·ミラー& FPのより特徴づけ、そのフィールドにリーディの充電その形態及び定量2のコンセンサスを得るために行われる必要があります。さらに、彼らはこの特徴付けは、「被験者間の違いのいくつかを明確にし、研究者の間で2異なる結果のいくつかを説明しています。」かもしれないことを示した味とnutrition-におけるFPの役割に矛盾の多くの定量化の統一された方法を提供することにより、関連の研究は、整流されてもよいです。
二分キーは異なる画像キャプチャ技術のために調整されてもよいです。測定スケールのための既知の距離を簡単にサランラップやガラスは、画像キャプチャの舌の上に置かれた場合に割引することができ、各研究室と不況で使用される直径に設定することができます。 GOTラボでは、中性舌が乳頭の最良の定義ことが明らかになりました。これは、ロバをしたまぶしさを作成し、バックカメラに光を反射するようにサランラップやガラスの原因となった研究室での光の量にすることができますsment難しいです。いくつかの研究室では、彼らは、染料より挑戦カウントするように見つけると述べているが、GOTラボは舌の大部分の茸と糸状乳頭の間の理想的なコントラストを提供1:36の濃度に希釈した青色食用色素を発見しました。
FPの特性のための二分の鍵の作成は、一貫して舌の上の構造を分析し、その結果の報告に自信を持つように、画像取り込み、様々な方法を使用して、別の研究室の研究者を可能にします。最後に、二分のキーの使用は、構造体またはオブジェクトの品質が研究に研究から一貫性のない番号を提供している科学的方法論の他の分野での目的を有していてもよいです。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、国立衛生研究所と研究資源のための国立センターから2008年から2012年の間に科学教育パートナーシップ賞(SEPA)R25 RR025066によって部分的に資金を供給されました。ジョン·ヘイズ、スーコールドウェル、ポール·ブレスリン、カーラ·シューベルト:様々な実験室でのシナリオでDPPの使用に関する文献、我々の結果とフィードバックの思慮深い議論の味フィールド内の同僚に感謝します。自然と科学のデンバー美術館でのリーダーシップと遠征健康内の味覚ラボの遺伝学内の市民科学をサポートするスタッフにもありがとうございました。ベアアラゴン、マイク·アーチャー、蘇アタマン、マイケル·バグリー、A'netteベルトラン、ダイアナBoyles、ウェンディ隠密、サーシャドゥーリー:最後に、など、このプロトコルを開発し、使用して自分の時間と献身のために私たちのボランティア市民科学者のすべてにありがとうございました、パティドゥリーバー、ジェシカERN、ローラHarmacek、ショーン·ヒバート、ジョイスHutchens、マット·チュ、Letaキーン、ウィレムLeenhouts、ステファニ呂kjan、アシュリー·マシューズ、マイク·モーゼル、ステファニー·ミラー、ハリーモルガン·ロドリゲス、グリフィンScherma、アリッサSchickedanz、テリー·サイモン、ディラントーマス、ルディ·トーレス、タイラー·ウィルソン、ダイアンWoltkamp。
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