विरोधी ट्यूमर गुण के साथ अलगाव और न्यूट्रोफिल की विशेषता
Summary
Neutrophils play an important role not only in host defense against invading microorganisms, but are also involved in the immune surveillance of tumor cells. Here, we describe techniques related to the isolation of neutrophils with anti-tumor properties and methods for monitoring anti-tumor neutrophil function in vitro and in vivo.
Abstract
न्यूट्रोफिल, मानव संचलन में सभी सफेद रक्त कोशिकाओं की सबसे प्रचुर मात्रा में, हमलावर सूक्ष्मजीवों के खिलाफ मेजबान रक्षा करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। इसके अलावा, न्यूट्रोफिल ट्यूमर कोशिकाओं के प्रतिरक्षा निगरानी में एक केंद्रीय भूमिका निभाते हैं। वे या तो हाइड्रोजन पेरोक्साइड या एंटीबॉडी निर्भर सेल की मध्यस्थता cytotoxicity (ADCC) के माध्यम से जुड़े एक सेल संपर्क निर्भर तंत्र के माध्यम से ट्यूमर कोशिका मृत्यु ट्यूमर कोशिकाओं को समझते हैं और प्रेरित करने की क्षमता है। विरोधी ट्यूमर गतिविधि के साथ न्यूट्रोफिल कैंसर के रोगियों के लिए और ट्यूमर असर चूहों के परिधीय रक्त से अलग किया जा सकता है। ये न्यूट्रोफिल कोई महत्वपूर्ण ट्यूमर साइटोटोक्सिक गतिविधि बताते हैं कि स्वस्थ विषयों या भोले चूहों के न्यूट्रोफिल से अलग करने के ट्यूमर entrained न्यूट्रोफिल (दस) कहा जाता है। अन्य श्वेत रक्त कोशिकाओं के साथ तुलना में, न्यूट्रोफिल एक घनत्व ढाल के अधीन जब यह संभव एक> 98% शुद्ध न्यूट्रोफिल आबादी प्राप्त करने के लिए कर रही विभिन्न उछाल दिखा। हालांकि, इसके अलावा मेंसामान्य उच्च घनत्व न्यूट्रोफिल आबादी (HDN) के लिए, कैंसर रोगियों में, ट्यूमर असर चूहों में है, साथ ही जीर्ण सूजन की शर्तों के तहत, विशिष्ट कम घनत्व न्यूट्रोफिल आबादी (LDN) संचलन में दिखाई देते हैं। LDN मोनोन्यूक्लियर अंश के साथ सह-शुद्ध और सकारात्मक या नकारात्मक चयन रणनीतियों का उपयोग कर मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं से अलग किया जा सकता है। पृथक न्यूट्रोफिल की शुद्धता प्रवाह cytometry द्वारा निर्धारित किया जाता है एक बार, वे इन विट्रो के लिए और इन विवो कार्यात्मक assays में इस्तेमाल किया जा सकता है। हम neutrophils के विरोधी ट्यूमर गतिविधि की निगरानी के लिए उनकी क्षमता विस्थापित करने के लिए और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के उत्पादन के लिए, साथ ही उनके phagocytic क्षमता पूर्व vivo निगरानी तकनीक का वर्णन है। हम आगे vivo में ट्रैकिंग के लिए न्यूट्रोफिल लेबल करने के लिए तकनीक का वर्णन है, और इन विवो में उनके विरोधी मेटास्टैटिक क्षमता का निर्धारण करने के लिए। इन सभी तकनीकों को प्राप्त करने और विरोधी ट्यूमर के साथ न्यूट्रोफिल चिह्नित करने के लिए कैसे को समझने के लिए आवश्यक हैंसमारोह।
Introduction
न्यूट्रोफिल शुरू में हमलावर सूक्ष्मजीवों के खिलाफ पहली पंक्ति बचाव के रूप में सेवा करते हैं, जो सहज प्रतिरक्षा कोशिकाओं के रूप में विशेषता थे। आज यह न्यूट्रोफिल अधिक कार्य दूरगामी है कि जाना जाता है, विदेशी एंटीजन 1,2 के खिलाफ अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया बढ़ते hematopoiesis 3, एंजियोजिनेसिस 4 को विनियमित करने और 5 घाव भरने में शामिल किया जा रहा है। इसके अलावा, न्यूट्रोफिल उनके समर्थक और विरोधी ट्यूमर गतिविधियों 6,7 के आधार पर ट्यूमर के विकास और मेटास्टेटिक प्रगति को प्रभावित कर सकता है। न्यूट्रोफिल एक बहुरूपी खंडों नाभिक की विशेषता है (इसलिए polymorphonuclear (PMN) ल्यूकोसाइट्स कहा जाता है) और कम से कम तीन कणिकाओं के विशिष्ट उपवर्ग के साथ-साथ स्रावी पुटिकाओं 8 (चित्रा 1 ए-सी) के होते हैं।
न्यूट्रोफिल उच्च phagocytic क्षमता और माइक्रोबियल उन्मूलन के लिए महत्वपूर्ण उच्च एनएडीपीएच ओक्सीडेस गतिविधि के अधिकारी है, और कम से लिए महत्वपूर्ण chemokines की एक विस्तृत श्रृंखला का स्रावअतिरिक्त न्यूट्रोफिल और सूजन 8,9 की साइट के लिए अन्य प्रतिरक्षा कोशिकाओं के कर्षण। न्यूट्रोफिल टोल की तरह रिसेप्टर्स (TLRs) सहित सतह रिसेप्टर्स की एक बड़ी राशि की अभिव्यक्ति की विशेषता है, सी टाइप Lectin रिसेप्टर्स (CLRS), रिसेप्टर 3 (CD11b / CD18) और अन्य आसंजन अणु (जैसे, एल selectin के पूरक LFA-1, VLA-4 और एंटीजन-सेल से संबंधित आसंजन अणु 3 (CEACAM3 / CD66b)), केमोकाइन रिसेप्टर्स (जैसे, CXCR1, CXCR2, CCR1, CCR2), chemoattractant रिसेप्टर्स (जैसे, PAFR, LTB 4 आर और C5aR) , साइटोकाइन रिसेप्टर्स (उदाहरण के लिए, जी CSFR, आईएल 1R, आईएल 4R, आईएल 12R, आईएल 18R, TNFR), रिसेप्टर्स (जैसे, FPR1-3) पेप्टाइड formyl, और एफसी रिसेप्टर्स (जैसे, CD16 (FcγRIII मानव न्यूट्रोफिल CD11b, CD15, CD16 और CD66b ल्युकोसैट मार्कर का उपयोग पहचान कर रहे हैं, जबकि), CD32 (FcγRII), और CD64 (FcγRI) 10। चूहों में, न्यूट्रोफिल आमतौर पर, CD11b + Ly6G + के रूप में पहचाने जाते हैं। यह भी आम तौर पर ऊतकों में न्यूट्रोफिल का पता लगाने के लिए दाना प्रोटीन myeloperoxidase (MPO) और न्युट्रोफिल इलास्टेज (पूर्वोत्तर) के लिए दाग स्वीकार कर लिया है।
यह neutrophils के विविध कार्यों को एक ही सेल द्वारा या अलग सेल उप आबादी से मध्यस्थता कर रहे हैं कि क्या अभी भी स्पष्ट नहीं है। जमते डेटा समर्थक भड़काऊ उत्तेजनाओं और माइक्रोएन्वायरमेंट 11,12 से प्रभावित नमनीयता के एक उच्च डिग्री दर्शाती है कि एक heterogenic न्यूट्रोफिल आबादी की उपस्थिति के लिए सुझाव देते हैं। Fridlender एट अल। 13 निहायत समर्थक ट्यूमर गुणों के साथ विरोधी ट्यूमर गुण और एन 2 के साथ एन 1 करार दिया दो प्रमुख उप आबादी में कैंसर में न्यूट्रोफिल बांट दिया है। कैंसर में है, साथ ही जीर्ण सूजन में, टी सेल प्रतिक्रिया 14 को दबाने कि granulocytic माइलॉयड व्युत्पन्न का शमन कोशिकाओं (जी MDSCs) से बना एक अतिरिक्त उप जनसंख्या है। जी MDSCs एक CD11b + Ly6C द्वारा विशेषता अपरिपक्व माइलॉयड कोशिकाओं माना जाता हैचूहों 15 में कम Ly6G हाय फेनोटाइप, मानव 16 में एक CD15 / + CD16 कम फेनोटाइप करते हुए। जी MDSCs, सामान्य परिसंचारी न्यूट्रोफिल की तुलना में साइटोकिन्स और chemokines की, जबकि निचले स्तर arginase और myeloperoxidase के उच्च स्तर को व्यक्त करते हैं। वे कम phagocytic और प्रवासी हैं, लेकिन आरओएस 15,17,18 के उच्च स्तर का उत्पादन। वर्तमान पत्र में हम विरोधी ट्यूमर गुणों के साथ neutrophils के अलगाव और लक्षण वर्णन के लिए कुछ बुनियादी तरीके का वर्णन करेंगे।
न्यूट्रोफिल मानव संचलन में सभी सफेद रक्त कोशिकाओं की सबसे बड़ी आबादी का गठन करते हुए (45 – 70%, 1,800 – 6,000 / μl) -, 300 – 500 / μl 15%, चूहों में, सामान्य परिस्थितियों में, वे 10 (बल्कि विरल हैं )। सूजन पर और कभी-कभी जीर्ण सूजन 7 के एक राज्य का प्रतिनिधित्व करता है जो कैंसर, में तेजी से न्यूट्रोफिल गिनती बढ़ जाती है। न्यूट्रोफिल multipotent आम माइलॉयड अग्रदूत (सीएमपी) सीई से विकसितmyeloblasts के चरणों (एमबी), promyelocytes (प्रधानमंत्री), myelocytes (एमसी), metamyelocytes (मिमी) और बैंड कोशिकाओं (ईसा पूर्व) गुजर रहा एक भेदभाव प्रक्रिया के माध्यम से अस्थि मज्जा में LLS, 8। वे परिसंचरण 8 के लिए जारी किया जाता है जो पहले के 7 दिनों – परिपक्व, बाद mitotic न्यूट्रोफिल 4 के लिए अस्थि मज्जा के भीतर रह सकती है। भड़काऊ शर्तों के तहत लंबे समय तक किया जा सकता है, जो 12 बजे, – रक्त में न्युट्रोफिल कारोबार 6 की एक औसत आधा जीवन के साथ आम तौर पर तेजी है। Unstimulated न्यूट्रोफिल phorbol एस्टर phorbol 12 करने के लिए उन्हें उजागर करके विरोधी tumorigenic गतिविधि, chemokines आईएल 8 (CXCL2), CCL2, CCL5 और CXCL5 6,19 या कृत्रिम रूप से करने के लिए भोले न्यूट्रोफिल उजागर द्वारा प्राप्त किया जा सकता है कि एक सुविधा है, सीमित है -myristate 13-एसीटेट (पीएमए) 6।
न्यूट्रोफिल की कम संख्या के साथ मिलकर रक्त न्यूट्रोफिल से कम आधा जीवन (~ 3 – 5 10 5 एक्स) एक भोले 6 के 1 मिलीलीटर रक्त से प्राप्त किया – 8 सप्ताह पुरानी माउस, इसे बनाया हैमुश्किल में इन विट्रो में माउस न्यूट्रोफिल परिसंचारी के समारोह में पता लगाने के लिए। इस कठिनाई को दूर करने के लिए, अन्य स्रोतों इस्तेमाल किया गया है। उदाहरण के लिए, न्यूट्रोफिल की बड़ी संख्या (thioglycollate शोरबा या Zymosan ए की intraperitoneal इंजेक्शन के बाद, उदाहरण के लिए) अस्थि मज्जा 20 या बाँझ सूजन की प्रेरण निम्नलिखित पेरिटोनियम से प्राप्त किया जा सकता है। यह पेरिटोनियल गुहा से प्राप्त न्यूट्रोफिल किसी भी विरोधी tumorigenic गतिविधि (अप्रकाशित अवलोकन) लागू नहीं है कि ध्यान दिया जाना चाहिए।
। 40 लाख रक्त न्यूट्रोफिल आसानी से 1 मिलीलीटर रक्त से अलग किया जा सकता है – Granot एट अल 6 BALB / ग चूहों 20 कि इस तरह के ट्यूमर प्रगति 6 (2A चित्रा) के साथ aggravates जो neutrophilia, विकसित माउस 4T1 स्तन कार्सिनोमा सेल लाइन के साथ orthotopically टीका कि मनाया 3 – 4 हफ्तों के बाद ट्यूमर टीका। ये न्यूट्रोफिल विरोधी ट्यूमर गतिविधियों का अधिग्रहण किया है, और तदनुसार COI किया गया हैआदेश में नेड ट्यूमर entrained न्यूट्रोफिल (दस), भोले न्यूट्रोफिल 6 (चित्रा 2 बी) से अलग करने के लिए। उच्च घनत्व न्यूट्रोफिल (HDN, चित्रा 1 ए) अत्यधिक विरोधी tumorigenic हैं, कैंसर के संदर्भ में उत्पन्न कम घनत्व न्यूट्रोफिल (LDN, चित्रा 1 बी) 21 नहीं कर रहे हैं। इसके अलावा, ट्यूमर असर चूहों की अस्थि मज्जा और तिल्ली से उच्च घनत्व न्यूट्रोफिल विरोधी ट्यूमर गतिविधि (अप्रकाशित डेटा) है। यह न्यूट्रोफिल की बढ़ती मात्रा के साथ, ट्यूमर प्रगति के साथ तिल्ली धीरे-धीरे बढ़े (तिल्ली का बढ़ना) हो जाता है कि ध्यान दिया जाना चाहिए।
यह दस भी सहज (MMTV-PyMT और MMTV-Wnt1 स्तन ट्यूमर और कश्मीर रास संचालित फेफड़ों के ट्यूमर) सहित दोनों कैंसर के अन्य मॉडलों में उत्पन्न और एटी-3 (MMTV-PyMT) और E0771 स्तन कार्सिनोमा (इंजेक्ट कर रहे हैं कि ध्यान दिया जाना चाहिए कोशिकाओं, एलएलसी लुईस फेफड़ों कार्सिनोमा कोशिकाओं और B16-F10 मेलेनोमा कोशिकाओं)। इन Tum में न्यूट्रोफिल लामबंदी की हालांकि, इस हद तक3 सप्ताह के बाद 1 मिलीलीटर रक्त में 10 एक्स 10 6 न्यूट्रोफिल – या मॉडल 5 तक पहुंच गया, 4T1-टीका चूहों की तुलना में कहीं कम है।
Protocol
Representative Results
Discussion
न्यूट्रोफिल सभी सफेद रक्त कोशिकाओं के सबसे प्रचुर मात्रा में हैं और संक्रमण और सूजन के मामलों में पहले responders हैं। जैसे, वे बाहरी संकेतों को अत्यधिक संवेदनशील होते हैं और आसानी से सक्रिय कर रहे हैं। इसके…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ZG इसराइल विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 41/11) की मैं-मुख्य कार्यक्रम से अनुदान द्वारा समर्थित है, Abisch-Frenkel फाउंडेशन, Rosetrees ट्रस्ट, इसराइल कैंसर रिसर्च फाउंडेशन (ICRF – अनुसंधान कैरियर विकास पुरस्कार) और चिंता फाउंडेशन। ZGF इसराइल कैंसर रिसर्च फाउंडेशन (ICRF – अनुसंधान कैरियर विकास पुरस्कार) से अनुदान द्वारा समर्थित है, स्वास्थ्य के इसराइल मंत्रालय और इसराइल फेफड़े एसोसिएशन के मुख्य वैज्ञानिक।
Materials
| CELL LINES | |||
| Mouse 4T1 breast carcinoma cells | ADCC | CRL-2539 | Growth medium: DMEM + 10 % heat-inactivated FBS |
| PLASTIC WARES AND EQUIPMENTS | |||
| 24-well Tissue Culture Plate | Falcon | 353047 | Sterile |
| 100 mm Tissue Culture Plate | Corning | 430167 | Sterile |
| 25 cm2 Tissue Culture Flask | Nunc | 156340 | Sterile |
| 90 mm Bacterial Grade Culture Dish | Miniplast, Ein Shemer, Israel | 20090-01-017 | Sterile |
| 15 ml Sterile Conical Centrifuge Tube | Miniplast, Ein Shemer, Israel | 835015-40-111 | Sterile |
| 50 ml Sterile Conical Centrifuge Tube | Miniplast, Ein Shemer, Israel | 835050-21-111 | Sterile |
| Falcon 12×75 mm Round-Bottom Polystyrene Tube | Becton Dickinson | 352058 | Sterile |
| Millicell 24 Migration Plate with a pore size of 5μm | Merck Millipore | PSMT010R1 | Sterile |
| White 96-Flat-Bottom Well Plate | Costar | 3917 | Sterile |
| Cell Strainer (40 mm) | BD Falcon | 352340 | Sterile |
| 20G 1.5" Needle | BD Microlance 3 | 301300 | Sterile |
| 23G 1" Needle | BD Microlance 4 | 300800 | Sterile |
| 25Gx5/8" Needle | BD Microlance 5 | 300600 | Sterile |
| 0.3 ml Syringe with a 30Gx8mm Needle | BD Micro-Fine Plus Demi | 320829 | Sterile |
| 9 mm Clips | BD, AutoClip | 427631 | Sterile |
| EasySep Magnet | STEMCELL Technologies | 18000 | |
| MACS LS Separation Column | Miltenyi Biotech | 130-042-201 | Sterile |
| MidiMACS Separator Magnet | Miltenyi Biotech | 130-042-302 | |
| MACS MultiStand | Miltenyi Biotech | 130-042-303 | |
| Microscope Glass Slide | Menzel-Gläser Superfrost Plus Thermo | J1800AMNZ | |
| Orbital Shaker | Sky line, ELMI | S-3.02.10L | |
| Plate Reader | TECAN | InfiniteF200Pro | |
| POWDER | |||
| Bovine serum albumin (BSA), fraction V | Sigma | A7906 | |
| Bromodeoxyuridine (BrdU) | BD Pharmingen | 550891 | Sterile |
| CFSE (5-(and 6-)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester) | Molecular Probes | C1157 | |
| Dextran T500 | Sigma | 31392 | |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3149 | |
| Sodium azide (NaN3) | Sigma | S8032 | Highly toxic, handle with care |
| Thioglycollate powder | Difco | 225650 | |
| Zymosan A | Sigma | Z4250 | |
| MEDIA AND SUPPLEMENTS | |||
| Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) | Sigma | D5796 | Sterile |
| Opti-MEM® I reduced serum medium | Life Technologies | 31985062 | Sterile |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI)-1640 medium | Sigma | R8758 | Sterile |
| Foetal bovine serum (FBS), heat-inactivated | Sigma | F9665 | Sterile |
| L-Glutamine | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-020-1A | Sterile |
| Sodium pyruvate | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-042-1B | Sterile |
| Penicillin Streptomycin x1000 solution | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-031-5 | Sterile |
| Phosphate buffered saline (PBS) without Mg2+ and Ca2+ | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 02-023-1 | Sterile |
| PBSx10 without Ca2+ and Mg2+ | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 02-023-5A | Sterile |
| HPLC grade water | J.T. Baker | 4218-03 | Autoclave |
| SOLUTIONS | |||
| ACK – Ammonium-Chloride-Potassium | Life Technologies | A10492-01 | |
| Bromodeoxyuridine (BrdU) solution (10 mg/ml) in PBS | Dissolve 10 mg of BrdU in 1 ml PBS and sterile filter. | ||
| CFSE, 5 mM in DMSO | Dissolve 2.8 mg of CFSE in 1 ml DMSO. Divide into 10 ml aliquots in sterile 200 ml tubes and store in the dark at -20oC. | ||
| Eosin Y solution | Sigma | HT110-2-32 | |
| Hanks' balanced salt solution | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 02-016-1A | Sterile |
| Heparin, 20 mg/ml in PBS | Dissolve 100 mg Heparin in 5 ml sterile PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| Histopaque-1119 | Sigma | 11191 | Sterile filter through a 0.2 mm filter. |
| Histopaque-1077 | Sigma | 10771 | Sterile filter through a 0.2 mm filter. |
| Luciferase cell culture lysis buffer x5 | Promega | E153A | Dilute 1:5 in sterile water just before use. |
| Luciferase assay solution | Promega | E1501 | Contains luciferase assay substrate powder (E151A) and luciferase assay buffer (E152A) |
| Mayer's Hematoxylin solution | Sigma | MHS-32 | |
| PBS+0.5% BSA | Dissolve 2.5g BSA in 500 ml PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| PBS+1% BSA | Dissolve 1g BSA in 100 ml PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| 5x PBS with 2.5% BSA | Dissolve 12.5g BSA in a mixture of 250 ml sterile HPLC-grade water and 250 ml PBSx10, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| PBS containing 0.5% BSA and 2 mM EDTA | Dissolve 250 mg BSA in 50 ml sterile PBS and add 200 ml of 0.5M EDTA pH 8.0, sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| FACS buffer (PBS containing 0.5% BSA, 2 mM EDTA and 0.02% NaN3) | Dissolve 250 mg BSA in 50 ml sterile PBS and add 200 ml of 0.5M EDTA pH 8.0 and 500 ml of 2% NaN3, sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| Saline (0.9% NaCl) | Dissolve 9 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave | ||
| 0.2% NaCl solution | Dissolve 2 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave | ||
| 1.6% NaCl solution | Dissolve 16 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave | ||
| 2 % Sodium azide | Dissolve 1g sodium azide in 50 ml sterile ddw, keep at 4oC. Highly toxic. | ||
| 3% Thioglycollate solution | Dissolve 3 g of thioglycollate powder in 100 ml ddw. Boil until solution becomes yellow and autoclave. | ||
| Trypan blue solution (0.4%) | Sigma | T8154 | Dilute 1:10 in PBS to get a 0.04% solution. |
| Trypsin solution B | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-046-1 | Sterile |
| 1 mg/ml Zymosan A | Resuspend 1 mg Zymosan A in 1 ml sterile PBS in an Eppendorf tube. Vortex vigorously and incubate the tube at 37 oC for 30 min. Do not autoclave. Prepare the solution freshly before use. | ||
| KITS | |||
| EasySep PE selection kit | STEMCELL Technologies | 18557 | |
| EasySep PE selection cocktail | STEMCELL Technologies | 18151 | |
| the EasySep magnetic nanoparticles | STEMCELL Technologies | 18150 | |
| Anti-Ly6G mouse MicroBead Kit | Miltenyi Biotec | 130-092-332 | |
| EasySep Mouse Neutrophil Enrichment Kit | STEMCELL Technologies | 19762 | |
| EasySep Human Neutrophil Enrichment Kit | STEMCELL Technologies | 19257 | |
| FITC BrdU flow kit | BD Pharmingen | 559619 | |
| MACS Neutrophil isolation kit | Miltenyi Biotec | 130-097-658 | |
| Phagocytosis Assay Kit | Cayman Chemical Company | 500290 | |
| ANTIBODIES | |||
| FcR blocking antibody | Biolegend | 101302 | |
| Purified rat anti-Ly6G antibody | BD Pharmingen | 551459 | Clone 1A8 |
| PE-conjugated rat anti-mouse Ly6G antibody | Biolegend | 127608 | Clone 1A8 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse Ly6G | BD Pharmingen | 551460 | Clone 1A8 |
| PerCP-Cy5.5 rat anti-mouse Ly6G | TONBO Biosciences | 65-1276 | Clone 1A8 |
| violetFluor 450-conjugated rat anti-mouse Ly6G | TONBO Biosciences | 75-1276 | Clone 1A8 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse CD11b | BD Pharmingen | 553310 | Clone M1/70 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse Ly-6G and Ly-6C (GR-1) | BD Pharmingen | 553127 | Clone RB6-8C5 |
| PE-conjugated rat anti-mouse CD45 | BD Pharmingen | 553081 | Clone 30-F11 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse F4/80 | Abcam | ab60343 | Clone BM8 |
| FITC-conjugated mouse anti-human CD66b | Biolegend | 305103 | Clone G10F5 |
| Purified rat isotype control antibody (IgG2a, k) | BD Pharmingen | 553927 | Clone R35-95 |
| LEAF purified Armenian hamster anti-mouse CD3e antibody | BioLegend | 100314 | Clone 145-2C11 |
References
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