Summary

Простой и Компьютерный обонятельных тестирование для мышей

Published: June 15, 2015
doi:

Summary

We present a simple and unbiased olfactory test in mice. With this protocol olfactory discrimination, preference, avoidance and sensitivity to a novel odor as compared to water can be assessed in single behavioral sessions. This method is indicated for a single experimenter and analysis is based on computer-assisted video processing.

Abstract

Обоняние высоко консервативен среди видов и необходим для воспроизводства и выживания.

У человека, обоняние также является одним из органов чувств, что пострадавших при старении и сильным предиктором нейродегенеративных заболеваний. Таким образом, обоняние тестирование используется в качестве неинвазивного метода диагностики для выявления неврологического дефицита на ранних стадиях. Для того, чтобы понять механизмы, лежащие в основе обонятельной чувствительности к сети, обонятельные исследования на грызунах набирает обороты в последнее десятилетие.

Здесь мы представляем очень простой, эффективный и времени воспроизводимого метода обоняния тестирования врожденного восприятия запаха и чувствительности у мышей без необходимости какого-либо предварительного пищи или воды ограничений. Испытания проводятся в знакомой среде на мышах, требуют только ароматы и 2 минутные сеансы воздействия одоранта. Анализ проводится, ретроспективном, используя компьютерные помощь команды на ImageJ а может быть, поэтому, Осуществляется с начала до конца, от одного исследователя.

Этот протокол не требует какого-либо специального оборудования или установки и указывается для любой лаборатории, заинтересованной в тестировании обонятельный восприятие и чувствительность.

Introduction

Обоняние является одним из наиболее развитых и важных сенсорных функций у млекопитающих. Любое ухудшение в обонятельной деятельности может повлиять на потребление продуктов питания, социальное поведение и, в худшем случае, даже выживание. У человека, обонятельные ухудшение зависит 1 возраст и считается сильным предиктором неврологических расстройств 2 – 6. Идентификация тест обонятельные разработана в Университете штата Пенсильвания в настоящее время представляет собой один из наиболее часто используемых, неинвазивных и количественной, диагностических тестов, которые могут оценить ранние неврологические дефициты 7 и предсказать с большой долей вероятности прогрессирования деменции 8,9.

Доступность обонятельной системы и известность обоняния грызунов, вызвало интенсивное направление исследований адресации механизмы, лежащие в основе обонятельные функции 10. Ранее мы показали, что потеря функции Recept сигнализацииили Notch1 влияет обонятельный избежать 11. В этом протоколе мы используем мышей, лишенных лиганд сигнализации, Jagged1, в нейронах или глии изучать обонятельные характеристики.

Врожденный обоняние определяется тремя параметрами, как восприятия, различения запахов и обонятельных чувствительности 4. Обонятельная испытания на грызунах может быть осуществлено различными способами, и некоторые поведенческие исследования используют olfactometers, которые обеспечивают запах животному при определенных концентраций паров и в точном времени 12 – 14. Тем не менее, эти приборы дорого и могут быть доступны только в специализированных учреждениях. В нашей работе, мы предоставляем простой, быстрый и воспроизводимый обонятельный протокол тестирования, который осуществляется с помощью летучих ароматов. Тесты описано мера восприятия к аттрактанта или репеллента запаха и оценить дискриминации между запахом и воды 11,15,16. Используя ту же настройку, же можно также измерить чувствительность к запах при различных концентрациях 16,17. Ретроспективном помощью компьютера обработки видео, вдохновленный работой Пейдж и коллег 18, обеспечивает объективные результаты без необходимости экспериментального ослепления и позволяет для одного человека, чтобы осуществить весь эксперимент.

Этот протокол предназначен для обеспечения отправной точкой для изучения обонятельной поведение у мышей.

Protocol

Все процедуры на животных в соответствии с Директивой ЕС 2010/63 / ЕС о защите животных, используемых для научных целей и утверждаются местным комитетом по уходу за животными (Кантон Фрибур, Швейцария) по. 1. Подготовка животных Экспериментальные животные Выполни?…

Representative Results

Тест измеряет восприятие влечение к арахисовое масло и избежания до 2 МБ кислоты. Три группы мышей протестированы и время, проведенное в "запах периметру" количественно по сравнению с водой. В тесте предпочтений, контрольная группа отображает значительное предпочтение запаха по с…

Discussion

Тесты, предложенные в этом протоколе позволяют оценить различные аспекты врожденного обонятельной поведения у мышей: восприятие запахов, дискриминации между запахов в сравнении с водой и чувствительность к запахам. Этот протокол может быть применен к любой запах в соответствии с пре?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work is funded by the Swiss National Foundation (31_138429) and Synapsis Foundation for the support of research on Alzheimer’s disease.

Materials

Mouse cage Italplast (Italy) 1144B 36 cm length x 20.5 cm width x 13.5 cm height
Chipped wood bedding Abedd (Austria) LTE E-001 3 cm high
Peanut butter Migros (Swizterland) NA 1:10
2-Methylbutyric Sigma Aldrich (Switzerland) W269514 Pure
Female Urine from fertile females of same mouse strain NA NA Dilution series
Camera Olympus (US) Camedia C-8080 MOV files
Quicktime for Java (Windows) Apple (USA) NA video plugin for visualizing MOV files
Image J for Windows NIH (USA) NA Video Processing/Analysis

References

  1. Doty, R. L., Kamath, V. The influences of age on olfaction: a review. Cognitive Science. 5, 20 (2014).
  2. Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases. Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).
  3. Moberg, P. J., et al. Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review. Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).
  4. Kovács, T. Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders. Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).
  5. Barrios, F. A., et al. Olfaction and neurodegeneration in HD. Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).
  6. Doty, R. L. Olfaction in Parkinson’s disease and related disorders. Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).
  7. Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function. Physiology & Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).
  8. Devanand, D. p., et al. Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer’s Disease at Follow-Up. American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).
  9. Conti, M. Z., et al. Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer’s Disease. Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).
  10. Keller, A., Vosshall, L. B. Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception. Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).
  11. Brai, E., et al. Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour. European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).
  12. Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice. Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).
  13. Alonso, M., et al. Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb. The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).
  14. Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice. Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).
  15. Kobayakawa, K., et al. Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb. Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).
  16. Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse. Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).
  17. Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice. 신경과학. 118 (1), 263-270 (2003).
  18. Page, D. T., et al. Computerized assessment of social approach behavior in mouse. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48 (2009).
  19. Nyfeler, Y., et al. Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal. Embo J. 24 (19), 3504-3515 (2005).
  20. Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. Properties and mechanisms of olfactory learning and memory. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).
  21. Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day. 신경과학. 247, 234-241 (2013).
  22. Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804 (2014).

Play Video

Cite This Article
Brai, E., Alberi, L. Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice. J. Vis. Exp. (100), e52944, doi:10.3791/52944 (2015).

View Video