Summary

一个简单的设备,迅速准备小鼠肠的全坐骑

Published: October 27, 2015
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Summary

The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.

Abstract

制备小鼠小肠和结肠用于随后的分析或定量的全样载可能是耗时和困难的。我们描述了使用简单的设备的切割和“辊”鼠标肠迅速制备的优良和均匀的质量整装制剂到可以用手来实现。该设备包括一个基座,保存4不锈钢棒和顶部,其作用一切割导向。杆分别插入到小肠[分成三分]和结肠的腔。杆和样品然后放置在一片滤纸或卡到保持狭槽在该装置的底部。该设备的顶部接着被定位并用作切割引导。在顶片的中心的两个成角度的部分被用于引导刀或手术刀切肠子纵向上的杆的顶部。一旦肠部分被切断,顶端被移除,卡,TISSUE和棒从设备上轻轻地取出并放在了替补席上。杆分别然后轻轻压延侧身变平,并坚持的肠段到下伏一片滤纸或卡。最终制剂随后可以检查或固定和存储用于以后的分析。该制剂是无价的正常或转基因小鼠模型肠变化的研究。这些制剂已经用于炎症(结肠炎),损伤,癌前期病变的效应的研究和定量(隐窝病灶(ACF)与粘蛋白和贫化灶(的MDF))和息肉或肿瘤。

Introduction

鼠标和转基因小鼠1-3是对各种病症尤其是癌症和其对炎症在胃肠道的关系的研究中的宝贵的模型。这通常需要小肠和/或结肠的整个支架的制备方法。

整个支架的制备可以用精密对偏移剪刀的进行,但它可以采取每小鼠 4约20分钟。这不是很实用的比较研究,这需要一个显著量的小鼠(例如10每组受统计分析)。此外,时间的长短取增加组织降解的风险。缓解这一问题的尝试导致了各种切削制剂助剂的审判。第一是基于一系列金属板,带切割园,但在板遮蔽组织和切割因此,难以控制。

一个传统领升六面铅笔终于提供了灵感的切割装置,因为我们可以再看到一半的铅笔形状将如何使一个手术刀( 图1)具有很好的指导。这就产生了一个设计为具有四个切削导轨 5的帧。这个装置的有效性是戏剧性在图4中的制剂表现出的剪刀制备和设备制备之间的差异。

原始设备的顶部被从几片金属的,但后来的构造,和当前的模型被加工出来一块实心硬铝组成。该基地加工出最高质量的高密度树脂。

该装置已被证明是对小鼠肠的全样载的制备大量使用,因为它大大加快和提高了制剂,其中有一个广泛的应用的质量和一致性。

Protocol

在各种实验程序和人性化的安乐死是由主办机构伦理委员会,并通过适当的监管机构的批准。安乐死通过CO 2窒息颈椎脱位正常实现。 1.设备机的装置的基座,从出高密度乙酰树脂的固体块,如本手稿描述的主要部分。在每个端部创建3毫米高升高条带,且部分机器这些2.5毫米园采取杆(参见图2和图3)。 建立从2.4毫米直径的不锈钢棒用四舍五?…

Representative Results

息肉是容易下,用冷光源立体显微镜,以确定到另一边照射所述组织(图4)。它是有用的,当一个息肉,以便得分可以再商量,不同运营商就可以达成一致,观察到标记卡的铅笔痕迹。组织还可以批量染色[用亚甲蓝]识别隐窝病灶8或粘蛋白贫化灶(的MDF)9照明从上方或通过反式照明(图5)。 病变的位置也可以计分的位置的基础8…

Discussion

该器件极大地加快了进程,使两家运营商可以充分尸检鼠标内6分钟。这将包括目视检查是否有明显肉眼病变,体重和固定的主要器官。它还将允许运营商冲洗,吸干,称重胃,盲肠,小肠和结肠,并准备在整个坐骑。该组织扁平化,可以非常迅速修复,从而避免降级的文物。

一的装置(除了速度)的主要优点是,该装置可产生生产远质量更好的准备,然后使随后的分析和定?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.

Materials

Delrin Ryan Plastics, Earls Barton, UK N/A High-density acetal resin similar material would suffice
Duralumin plate Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK N/A Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available 
Finished device(s) ready for use Contact Dr Goodlad  r.goodlad@imperial.ac.uk N/A Contact  r.goodlad@imperial.ac.uk  for supply details

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Cite This Article
Yoneda, M., Molinolo, A. A., Ward, J. M., Kimura, S., Goodlad, R. A. A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (104), e53042, doi:10.3791/53042 (2015).

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