Un dispositif simple d'élaborer rapidement entiers Monts de l'intestin de souris
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Préparation montures entières de l'intestin grêle et le côlon de la souris pour l'analyse ou la quantification ultérieure peut être longue et difficile. Nous décrivons l'utilisation d'un dispositif simple de couper et les intestins 'roll' de la souris pour préparer rapidement les préparatifs entiers de montage de qualité supérieure et uniforme à ce qui peut être réalisé à la main. Le dispositif comprend une base qui contient 4 tiges en acier inoxydable et une partie supérieure, qui sert de guide de coupe. Les tiges sont insérés dans le lumen de l'intestin grêle [divisé en tiers] et le côlon. Les tiges et les échantillons sont ensuite placés sur un morceau de papier ou de carton filtre dans les fentes de retenue dans la base de l'appareil. La partie supérieure du dispositif est alors positionné et sert de guide de coupe. Les deux sections inclinées dans le centre de la pièce supérieure sont utilisés pour guider un couteau ou un scalpel et les intestins coupés longitudinalement sur la partie supérieure des tiges. Une fois les sections intestinales ont été coupés, le supérieur est retiré et la carte, tissue et les tiges délicatement retiré de l'appareil et placé sur le banc. Les tiges sont ensuite roulées délicatement sur le côté pour aplatir et coller les segments intestinaux sur la pièce sous-jacente de papier ou de carton filtre. La préparation finale peut ensuite être examinée et fixée ou stockée pour une analyse ultérieure. Les préparatifs sont très précieux pour l'étude des changements dans les modèles intestinales normales ou génétiquement modifiées souris. Les préparations ont été utilisées pour l'étude et la quantification des effets de l'inflammation (colite), des dommages, des lésions pré-cancéreuses (foyers de cryptes aberrantes (ACF) et mucine foyers (MDF) appauvri) et des polypes ou des tumeurs.
Introduction
La souris et la souris génétiquement modifiée 1-3 sont un modèle inestimable pour l'étude de diverses pathologies cancéreuses en particulier et de sa relation à l'inflammation dans le tractus gastro-intestinal. Cela nécessite souvent la préparation de supports entiers de l'intestin grêle et / ou du côlon.
La préparation des montures entières peut être fait avec une paire de ciseaux de décalage de précision, mais il peut prendre environ 20 minutes par souris 4. Ce ne sont pas très pratique pour des études comparatives, qui nécessitent une quantité importante de souris (disons 10 par groupe soumis à une analyse statistique). En outre, la longueur de temps nécessaire augmente le risque de dégradation tissulaire. Une tentative pour atténuer ce problème a conduit à l'essai de diverses aides à la préparation de coupe. Le premier a été basé sur une série de plaques de métal, avec des bosquets de coupe, mais les plaques occulté les tissus et la coupe était donc difficile à contrôler.
Un conventional crayon à six faces finalement fourni l'inspiration pour le dispositif de coupe, comme nous pourrions alors voir comment une forme de demi-crayon ferait un bon guide pour un scalpel (Figure 1). Cela a abouti à la conception d'un cadre avec quatre guides de coupe 5. L'efficacité de ce dispositif a été spectaculaire que les préparatifs de la figure 4 démontrent la différence entre la préparation de ciseaux et de la préparation de l'appareil.
Les sommets des dispositifs original a été construit à partir de plusieurs morceaux de métal, mais ceux plus tard, et le modèle actuel a été usiné sur un morceau solide de duralumin. La base a été usinée en résine haute densité plus haute qualité.
Le dispositif est avéré être d'une grande utilité pour la préparation de supports entiers de intestin de la souris car il accélère grandement et améliore la qualité et la cohérence des préparatifs, qui ont un large éventail d'applications.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le dispositif accélère grandement le processus de sorte que deux opérateurs peuvent autopsie complète d'une souris dans 6 min. Cela inclura un contrôle visuel pour les lésions macroscopiques évidentes et de pesage et fixant les principaux organes. Il permettra également aux opérateurs de rincer, Blot et pèsent l'estomac, le caecum, l'intestin grêle et du côlon et de préparer l'ensemble des supports. Le tissu aplati peut être fixé très rapidement et ainsi éviter des artefacts de dégradat…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
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