Un dispositivo semplice da preparare rapidamente intere Monti della Intestino mouse
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Preparazione supporti interi dell'intestino tenue e del colon del mouse per la successiva analisi o la quantificazione può essere lunga e difficile. Descriviamo l'uso di un dispositivo semplice da tagliare e intestini 'roll' del mouse per preparare rapidamente intere preparazioni montaggio di qualità superiore ed uniforme a quello che può essere ottenuto manualmente. Il dispositivo comprende una base che contiene 4 barre in acciaio inox e una parte superiore, che funge da guida per il taglio. Le aste sono inseriti nel lume dell'intestino tenue [diviso in terzi] e il colon. Le aste ed i campioni vengono poi poste su un pezzo di carta da filtro o carta nelle scanalature di tenuta nella base del dispositivo. La parte superiore del dispositivo viene quindi posizionato e funge da guida per il taglio. Le due sezioni ad angolo al centro del pezzo superiore sono utilizzati per guidare un coltello o bisturi e tagliare gli intestini longitudinalmente sulla parte superiore delle aste. Una volta che le sezioni intestinali sono stati tagliati, la parte superiore viene rimosso e la carta, tissue e aste delicatamente rimosso dal dispositivo e posto in panchina. Le aste sono poi delicatamente arrotolate lateralmente per appiattire e incollare i segmenti intestinali sul pezzo di carta da filtro sottostante o carta. La preparazione finale può essere esaminato o fisso e memorizzati per una successiva analisi. I preparativi sono preziosi per lo studio dei cambiamenti intestinali nei modelli normali o geneticamente modificati mouse. I preparativi sono stati utilizzati per lo studio e la quantificazione degli effetti di infiammazione (colite), danni, lesioni pre-cancerose (aberranti crypt foci (ACFS) e Mucin impoverito focolai (MDF)) e polipi o tumori.
Introduction
Il mouse e il topo geneticamente modificato 1-3 sono un modello prezioso per lo studio di diverse patologie soprattutto tumorali e il suo rapporto infiammazione nel tratto gastrointestinale. Questo spesso richiede la preparazione di supporti interi del piccolo intestino e / o del colon.
La preparazione di supporti integrali può essere fatto con un paio di forbici precisione di offset ma può richiedere circa 20 minuti per topo 4. Questo non è molto pratico per studi comparativi, che richiedono una notevole quantità di topi (dire 10 per gruppo in analisi statistica). Inoltre, il tempo necessario aumenta il rischio di degradazione dei tessuti. Un tentativo di alleviare questo problema ha portato alla sperimentazione di vari aiuti di preparazione taglio. Il primo era basato su una serie di piastre metalliche, con alberi di taglio, ma i piatti oscurata il tessuto e il taglio era così difficile da controllare.
Un conventional matita sei facce finalmente fornito l'ispirazione per il dispositivo di taglio, come abbiamo potuto poi vedere come una forma di mezza matita sarebbe una buona guida per un bisturi (Figura 1). Ciò ha provocato un disegno per un telaio con quattro guide di taglio 5. L'efficacia di questo dispositivo era drammatica come le preparazioni in Figura 4 mostrano la differenza tra la preparazione e la preparazione forbice dispositivo.
Le cime dei dispositivi originali è stato costruito da diversi pezzi di metallo, ma quelli successivi, e il modello attuale è stata lavorata da un solido pezzo di duralluminio. La base è stata lavorata su qualità resina ad alta densità.
Il dispositivo ha dimostrato di essere di grande utilità per la preparazione di supporti interi di topo dell'intestino in quanto accelera notevolmente e migliora la qualità e la consistenza delle preparazioni, che hanno una vasta gamma di applicazioni.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il dispositivo accelera notevolmente il processo in modo che due operatori possono autopsia completamente un mouse all'interno 6 min. Ciò includerà un controllo visivo per lesioni macroscopiche evidenti e la pesatura e alla fissazione degli organi principali. Essa consentirà inoltre agli operatori di lavare, asciugare e pesare lo stomaco, intestino cieco, intestino tenue e del colon e preparare l'intero monti. Il tessuto appiattita può essere fissato molto rapidamente e così evitare artefatti degradazione. …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
- Goodlad, R. A., Alison, M. R. Cancer Handbook. , 243-262 (2007).
- Ward, J. M., Treuting, P. M. Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models. Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).
- Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease. Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).
- Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice. Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).
- Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine. Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).
- Alferez, D., Goodlad, R. A. To best measure cell proliferation in samples from the intestine. Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).
- Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology. Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).
- Park, H. S., et al. Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently. Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).
- Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis. Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
- Goodlad, R. A., et al. Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer. Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).
- Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development. Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).
