The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
이후 분석 또는 정량 마우스 소장과 대장의 전체 마운트를 준비하는 것은 시간이 많이 걸리고 어려울 수 있습니다. 우리는 신속하게 손에 의해 달성 될 수있는 그에게 우수하고 균일 한 품질의 전체 마운트 준비를 준비하는 절단 할 수있는 간단한 장치의 사용과 '롤'마우스의 장에 대해 설명합니다. 장치는 4 스테인리스 봉 및 절단 가이드 역할 가기를 보유 염기를 포함한다. 로드는 소장 [분으로 분할] 및 결장의 루멘에 삽입된다. 로드 및 샘플을 다음의 장치를베이스에 유지 슬롯 여과지 또는 카드의 부분 위에 배치된다. 소자의 상단은 위치 및 절단 가이드로서 기능한다. 상부 부분의 중앙에 두 개의 각진 부분이 칼이나 외과 용 메스를 안내하는데 사용 봉의 상부에 종 방향으로 장을 절단한다. 장내 부분이 절단 된 후에, 상부는 제거되고, 카드, 담배 마는UE와로드 부드럽게 장치에서 제거하고 벤치에 배치합니다. 로드는 부드럽게 평평 및 필터 종이 또는 카드의 기본 조각에 장 세그먼트를 막대기 옆으로 롤백됩니다. 최종 제제는 조사 또는 고정하고 나중에 분석을 위해 저장 될 수있다. 준비는 정상 또는 유전자 변형 마우스 모델에서 장 변화의 연구를위한 귀중한 있습니다. 준비는 염증 (대장염), 손상, 전암 병변의 효과에 대한 연구 및 정량화를 위해 사용되어왔다 (비정상적인 토굴 초점 (하는 ACF)과 초점 (MDF에서) 고갈 점액) 및 용종 또는 종양.
Introduction
마우스와 유전자 변형 마우스 1-3 다양한 병리 특히 암과 위장관의 염증과의 관계 연구를위한 귀중한 모델입니다. 이것은 종종 소장 및 / 또는 대장의 전체 마운트의 준비가 필요합니다.
전체 마운트의 제조는 오프셋 위 정밀 쌍으로 수행 될 수 있지만, 마우스를 4 내지 약 20 분 걸릴 수있다. 이 마우스의 상당한 양을 필요로 비교 연구, 매우 실용적되지 않습니다 (통계 분석에 그룹 주제 당 10 말). 또한, 촬영 시간의 길이는 조직의 열화의 위험을 증가시킨다. 이 문제를 완화하려는 시도는 다양한 절단 준비 에이즈의 재판을했다. 첫째는 절단 로브와, 금속판의 시리즈에 기초하지만, 판 조직을 가려 및 절단을 제어하는 것이 곤란 하였다.
통상도우리는 다음 반 연필 모양 메스 (그림 1)에 대한 좋은 가이드를 만들 것입니다 방법을 볼 수 있기 때문에 L 여섯 양면 연필 마지막으로, 절단 장치에 대한 영감을 제공했다. 이 4 개의 절단 가이드 5 프레임의 설계 결과. 도 4의 제제는 가위 제조 및 제조 장치의 차이점을 설명으로이 장치의 효과는 극적이었다.
원래 장치의 상단 금속의 여러 조각, 나중에 사람들로 구성되었으며, 현재의 모델은 두랄루민의 단단한 조각에서 가공했다. 염기는 고품질 고밀도 수지에서 가공 하였다.
장치는 크게 속도 및 넓은 범위의 애플리케이션들을 갖는다는 제제의 품질 및 일관성을 향상으로 마우스의 소장 전체 마운트의 제조에 아주 유용하게 사용될 입증되었다.
Protocol
다양한 실험 절차 및 인도적인 안락사는 호스트 기관 윤리위원회의 적절한 규제 기관에 의해 승인됩니다. 안락사는 일반적으로 자궁 경부 전위 다음 이산화탄소 질식을 사용하여 달성된다. 1. 장치 머신이 논문에 기재된 바와 같이 고밀도 아세틸 수지의 고체 블록의 밖으로부터의베이스 장치의 주요부. 양쪽 끝 부분에있는 봉을하려면 다음 2.5 mm의 숲에서 3mm 높은 상승 스트…
Representative Results
폴립 (그림 4) 조직을 조명 옆으로 차가운 광원과 실체 현미경 하에서 쉽게 식별 할 수 있습니다. 그것은 용종이 득점 나중에 논의 될 수 있으며, 다른 사업자들이 합의에 도달 할 수 있도록 관찰 할 때 연필 표시가있는 카드를 표시하는 데 도움이됩니다. 조직은 [메틸렌 블루로] 확인하는 염색 대량 될 수 비정상적인 토굴의 초점 8 이상 또는 트랜스 조명에 의해에서 조명에 의?…
Discussion
두 사업자가 완전히 6 분내 마우스를 해부 할 수 있도록 장치는 크게 프로세스 속도. 이것은 분명 심한 병변과 무게와 주요 장기를 고정하기위한 육안 검사가 포함됩니다. 또한 운영자, 린스 오점과 위, 맹장, 소장 및 대장의 무게를 전체 마운트를 준비 할 수 있습니다. 평평 조직은 매우 빠르게 고정 따라서 저하 아티팩트를 방지 할 수 있습니다.
(분리 속도에서) 장치의 주요 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
Delrin
Ryan Plastics, Earls Barton, UK
N/A
High-density acetal resin similar material would suffice
Duralumin plate
Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK
N/A
Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available
Finished device(s) ready for use
Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk
N/A
Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details
Yoneda, M., Molinolo, A. A., Ward, J. M., Kimura, S., Goodlad, R. A. A Simple Device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (104), e53042, doi:10.3791/53042 (2015).