Um dispositivo simples de preparar rapidamente inteiras Mounts do mouse Intestino
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Preparar as peças inteiras do rato intestino delgado e cólon para análise subsequente ou quantificação pode ser demorado e difícil. Descreve-se a utilização de um dispositivo simples para cortar e intestinos "rolo" de rato para preparar rapidamente preparações integrais de montagem de qualidade superior e uniforme para o que pode ser conseguido com a mão. O dispositivo compreende uma base que contém de 4 hastes de aço inoxidável e uma parte superior, que actua como um guia de corte. As hastes são inseridas no lúmen do intestino delgado [dividida em terços] e do cólon. As varetas e as amostras são, em seguida, colocada sobre um pedaço de papel de filtro ou o cartão dentro das ranhuras de detenção na base do dispositivo. A parte superior do dispositivo é então posicionado e serve como uma guia de corte. As duas secções inclinadas do centro da peça superior são utilizadas para orientar uma faca ou bisturi, e cortar o intestino longitudinalmente no topo das hastes. Uma vez que as secções intestinais foram cortados, o topo é removido e o cartão, tissue hastes e cuidadosamente retirado do dispositivo e colocado na bancada. As hastes são então suavemente rolou de lado para nivelar e manter os segmentos intestinais para o pedaço de papel de filtro subjacente ou cartão. A preparação final pode então ser examinado ou fixo e armazenado para análise posterior. As preparações são de valor inestimável para o estudo das alterações intestinais em modelos normais ou geneticamente modificados do mouse. As preparações foram usadas para o estudo e a quantificação dos efeitos da inflamação (colite), danos, lesões pré-cancerosas (focos de criptas aberrantes (ACFs) e mucina empobrecido focos (MDF)) e pólipos ou tumores.
Introduction
O rato eo camundongo geneticamente modificado 1-3 são um modelo de valor inestimável para o estudo de diversas patologias, especialmente câncer e sua relação com a inflamação no trato gastrointestinal. Isso muitas vezes requer a preparação de peças inteiras de intestino delgado e / ou cólon.
A preparação de peças inteiras pode ser feito com um par de tesouras de deslocamento de precisão, mas pode demorar cerca de 20 minutos por ratinho 4. Isto não é muito prático para estudos comparativos, as quais requerem uma quantidade significativa de ratinhos (10 por grupo dizer sujeitas a análise estatística). Além disso, o comprimento de tempo necessário aumenta o risco de degradação do tecido. Uma tentativa de aliviar este problema levou ao julgamento de vários auxílios de preparação de corte. O primeiro foi baseado numa série de placas de metal, com os bosques de corte, mas as placas obscurecido o tecido e, portanto, o corte era difícil de controlar.
A conventional lápis de seis lados, finalmente, forneceu a inspiração para o dispositivo de corte, como pudemos ver então como uma forma de meia lápis faria um bom guia para um bisturi (Figura 1). Isto resultou em um projeto para um quadro com quatro guias de corte 5. A eficácia deste dispositivo foi dramático como as preparações na Figura 4 demonstram a diferença entre a preparação e a preparação de tesoura dispositivo.
Os topos dos dispositivos originais foi construída a partir de várias peças de metal, mas os posteriores, eo modelo atual foi usinado a partir de uma sólida peça de duralumínio. A base foi usinado de resina de alta densidade mais alta qualidade.
O dispositivo tem provado ser de grande utilidade para a preparação de peças inteiras de rato intestino, uma vez que acelera significativamente e melhora a qualidade e consistência das preparações, que têm uma ampla gama de aplicações.
Protocol
Representative Results
Discussion
O dispositivo acelera muito o processo para que dois operadores podem autópsia totalmente um rato dentro de 6 min. Isso vai incluir uma verificação visual para as lesões graves e evidentes de pesagem e fixa os principais órgãos. Ele também irá permitir que os operadores de lavar, limpar e pesar o estômago, ceco, intestino delgado e cólon e preparar as peças inteiras. O tecido pode ser achatada fixa muito rapidamente e, assim, evitar artefactos de degradação.
Uma das principais v…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
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