Простое устройство быстро подготовить тотальных мыши кишечника
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Подготовка тотальных мыши тонкой и толстой кишки для последующего анализа или количественного может быть трудоемким и сложным. Мы описываем использование простого устройства, чтобы сократить и кишечник ролл "мыши быстро подготовить вся гора препараты с превосходной и однородного качества к тому, что может быть достигнуто вручную. Устройство содержит основание, который содержит 4 стержни из нержавеющей стали и верх, который действует режущий направляющую. Стержни вставляются в просвет тонкой кишки [разделенного на три части] и толстой кишки. Стержни и образцы помещают над кусочек фильтровальной бумаги или картона в удерживающие прорези в основании устройства. В верхней части устройства затем устанавливают и служит режущей направл ющей. Два угловые участки в центре верхней части в качестве руководства нож или скальпель, и сократить кишечник продольно на верхней части стержней. После того, как кишечные участки были сокращены, верхний удаляется, и карта, Tissие и стержни осторожно удаляют из устройства и размещается на скамейке. Стержни затем осторожно откатился в сторону, чтобы сгладить и придерживаться кишечных сегментов на основной части фильтровальной бумаги или карты. Конечный препарат может затем быть рассмотрены или фиксированной и сохраняются для последующего анализа. Препараты незаменимы для изучения изменений в кишечной нормальных или генетически модифицированных мышах. Препараты были использованы для изучения и количественной оценки последствий воспаления (колит), повреждения, предраковых поражений (аберрантная склепа очаги (ACFS) и муцин истощены очаги (кросса)) и полипы или опухоли.
Introduction
Мышь и генетически модифицированные мыши 1-3 являются бесценным моделью для изучения различных патологий, особенно рака и его отношения к воспалению желудочно-кишечного тракта. Это часто требует подготовки тотальных тонкой кишки и / или толстой кишки.
Подготовка тотальных может быть сделано с точностью пары офсетных ножницами, но это может занять около 20 минут на мышь 4. Это не очень практично для сравнительных исследований, которые требуют значительного количества мышей (скажем, 10 на группу при условии статистического анализа). Кроме того, продолжительность времени принимать увеличивает риск деградации тканей. Попытка решить эту проблему привели к суду различных средств подготовки резки. Первый был основан на серии металлических пластин, с режущими рощ, но пластины скрыты ткани и резки, таким образом, трудно контролировать.
Conventionaл шестисторонних карандаш, наконец, источником вдохновения для режущего устройства, как мы могли бы увидеть, как форма половина карандаш бы хороший гид для скальпеля (рис 1). Это привело к конструкции для кадра с четырьмя направляющими режущих 5. Эффективность этого устройства драматично, как препараты на рисунке 4 показывают разницу между подготовкой ножницами и подготовки устройства.
Верхушки оригинальных устройств была построена из нескольких кусков металла, но более поздние, и нынешняя модель была механической из цельного куска дюралюминия. База была механической из высочайшего качества с высокой плотностью смолы.
Устройство оказалось весьма полезным для подготовки тотальных мышиного кишечника, как это значительно ускоряет и улучшает качество и согласованность препаратов, которые имеют широкий спектр применения.
Protocol
Representative Results
Discussion
Устройство значительно ускоряет процесс, так что два оператора могут в полной мере вскрытие мыши в 6 мин. Это будет включать в себя визуальную проверку по понятным грубых поражений и взвешивания и фиксации основные органы. Это также позволит операторам промыть, промокнуть и взвесить же…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
- Goodlad, R. A., Alison, M. R. Cancer Handbook. , 243-262 (2007).
- Ward, J. M., Treuting, P. M. Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models. Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).
- Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease. Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).
- Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice. Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).
- Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine. Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).
- Alferez, D., Goodlad, R. A. To best measure cell proliferation in samples from the intestine. Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).
- Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology. Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).
- Park, H. S., et al. Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently. Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).
- Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis. Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
- Goodlad, R. A., et al. Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer. Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).
- Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development. Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).
