Un dispositivo sencillo de preparar rápidamente enteros Montes del Intestino Ratón
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Preparación de los montajes enteros del intestino delgado y el colon de ratón para el análisis o cuantificación posterior puede ser lento y difícil. Se describe el uso de un dispositivo fácil de cortar y los intestinos 'roll' ratón para preparar rápidamente los preparativos completos de montaje de calidad superior y uniforme a lo que se puede lograr con la mano. El dispositivo comprende una base que tiene 4 varillas de acero inoxidable y una parte superior, que actúa una guía de corte. Las varillas se insertan en el lumen del intestino delgado [dividido en tercios] y el colon. Las barras y las muestras se colocan entonces sobre un trozo de papel de filtro o de la tarjeta en las ranuras de retención en la base del dispositivo. La parte superior del dispositivo se coloca a continuación y sirve como una guía de corte. Las dos secciones en ángulo en el centro de la pieza superior se utilizan para guiar un cuchillo o bisturí y cortar los intestinos longitudinalmente en la parte superior de las barras. Una vez que las secciones intestinales han sido cortadas, la parte superior se elimina y la tarjeta, TISSue y varillas retira suavemente desde el dispositivo y se coloca en el banco. Las barras son entonces rodó suavemente hacia los lados para aplanar y se adhieren los segmentos intestinales en la pieza fundamental de un papel de filtro o de la tarjeta. La preparación final puede entonces ser examinado o fija y se almacena para su posterior análisis. Los preparativos son de gran valor para el estudio de los cambios intestinales en los modelos normales o modificados genéticamente ratón. Las preparaciones se han utilizado para el estudio y cuantificación de los efectos de la inflamación (colitis), daños, lesiones pre-cancerosas (focos de criptas aberrantes (FCA) y mucina focos (MDF) empobrecido) y los pólipos o tumores.
Introduction
El ratón y el ratón modificado genéticamente 1-3 son un modelo de gran valor para el estudio de diversas patologías, especialmente de cáncer y su relación con la inflamación en el tracto gastrointestinal. Esto a menudo requiere la preparación de preparaciones completas del intestino delgado y / o colon.
La preparación de los montajes enteros se puede hacer con un par de tijeras de precisión de desplazamiento, pero puede tomar alrededor de 20 minutos por ratón 4. Esto no es muy práctico para estudios comparativos, que requieren una cantidad significativa de los ratones (10 por grupo decir sujetas a análisis estadístico). Además, la longitud de tiempo que se tarda aumenta el riesgo de la degradación del tejido. Un intento de aliviar este problema llevó al juicio de varias ayudas de preparación de corte. El primero se basa en una serie de placas de metal, con arboledas de corte, pero las placas oscurecido el tejido y el corte fue por lo tanto difícil de controlar.
Un conventional lápiz de seis lados, finalmente sirvió de inspiración para el dispositivo de corte, ya que entonces podríamos ver como una forma de media lápiz haría una buena guía para un bisturí (Figura 1). Esto dio lugar a un diseño para un marco con cuatro guías de corte 5. La eficacia de este dispositivo era dramático como las preparaciones en la Figura 4 demuestran la diferencia entre la preparación de tijera y la preparación dispositivo.
Las copas de los dispositivos originales se construyen a partir de varias piezas de metal, pero los posteriores, y el modelo actual se mecanizan de una pieza sólida de duraluminio. La base se mecanizó en resina de alta densidad más alta calidad.
El dispositivo ha demostrado ser de gran utilidad para la preparación de los montajes enteros de intestino del ratón, ya que acelera en gran medida y mejora la calidad y la consistencia de los preparados, que tienen una amplia gama de aplicaciones.
Protocol
Representative Results
Discussion
El dispositivo acelera en gran medida el proceso para que dos operadores pueden autopsia plenamente un ratón dentro de 6 min. Esto incluirá una comprobación visual para las lesiones macroscópicas evidentes y el pesaje y la fijación de los órganos principales. También permitirá a los operadores para enjuagar, secar y pesar el estómago, intestino ciego, intestino delgado y el colon y se preparan todo el monturas. El tejido aplanado puede fijarse muy rápidamente y por lo tanto evitar los artefactos de degradació…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
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