Basit Aygıt Hızla Fare Bağırsak Tüm Mounts Hazırlanır
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Bir sonraki analiz veya ölçülmesi için farenin ince bağırsak ve kolon tüm bağlar hazırlanması zaman alıcı ve zor olabilir. Biz hızla elle elde edilebilir olanı üstün ve aynı kalitede bütün montaj hazırlıkları hazırlamak için kesmek için basit bir cihazın kullanımını ve 'roll' fare bağırsakları açıklar. Cihaz 4 paslanmaz çelik çubuklar ve bir kesme kılavuzu hareket eden bir üst tutan bir taban ihtiva eder. Çubuklar, ince bağırsakta [üçe ayrılır] ve kolon lümeni içine yerleştirilir. Çubuklar ve numuneler daha sonra, cihazın tabanından tutma yuvalarına filtre kağıdı ya da bir marka kartı üzerine yerleştirilir. Cihazın üst sonra konumlandırılmış ve kesim kılavuzu olarak hizmet vermektedir. Üst kısmın merkezinde iki açılı bölümler bir bıçak ya da bistüri rehberlik etmek için kullanılan ve çubukların üstünde uzunlamasına bağırsak kesilir. Bağırsak bölümleri kesilmiş, sonra, en çıkarılır ve kart, TissUE ve çubuklar yavaşça cihazından çıkartılmış ve tezgah üzerine yerleştirilir. Çubuklar yavaşça dümdüz ve filtre kağıdı veya kartın yatan parça üzerine bağırsak segmentleri sopa yanlara alınır. Son preparat, daha sonra tetkik veya sabit ve sonraki analiz için saklanır. Preparatlar normal veya genetiği değiştirilmiş fare modelleri bağırsak değişikliklerin incelenmesi için paha biçilmezdir. Preparasyonlar iltihabı (kolit), hasar, kanser öncesi lezyonlara etkileri çalışmasında ve miktar tayini için kullanılmıştır (aberant kript odağı (ACFs) ve odaklar (MDFs) tüketilmiş musin) ve polipler veya tümörler.
Introduction
Fare ve genetiği değiştirilmiş fare 1-3 değişik patolojiler özellikle kanser ve gastrointestinal sistemde inflamasyona ilişkisi çalışma için paha biçilmez bir modeldir. Bu genellikle ince bağırsakta ve / veya kolon bütün bağlar hazırlık gerektirir.
Bütün bağlar hazırlanması ofset makas hassas çifti ile yapılabilir ancak fare 4 başına yaklaşık 20 dakika sürebilir. Bu farelerin önemli miktarda gerektirir karşılaştırmalı çalışmalar, çok pratik değildir (istatistiksel analize grup konu başına 10 demek). Buna ek olarak, geçen süre doku bozulması riskini arttırır. Bu sorunu hafifletmek için bir girişimde çeşitli kesim hazırlık yardımlarının deneme yol açtı. İlk kesim bahçeleri ile, metal plakalar, bir dizi dayalı, ancak plakalar doku gizlenmiş ve kesme kontrol etmek ve böylece zor oldu.
Bir Bayağıbiz sonra yarım kalem şekli bir neşter (Şekil 1) için iyi bir rehber yapmak nasıl görebiliyordu l altı taraflı kalem nihayet, kesme cihazı için ilham kaynağı oldu. Bu dört kesim kılavuzları 5 ile bir çerçeve için bir tasarım sonuçlandı. Şekil 4'te hazırlıkları makas hazırlama ve cihaz hazırlığı arasındaki farkı göstermek olarak bu cihazın etkinliği dramatik oldu.
Orijinal cihazların üstleri metal birkaç parçaya, ancak daha sonra olanlardan inşa edilmiştir ve güncel model Duralüminyum sağlam bir parça dışarı işlenmiş oldu. Baz yüksek kalite yüksek yoğunluklu reçine dışarı işlenmiş oldu.
Cihaz büyük ölçüde hızlandırır ve geniş bir uygulama yelpazesi var hazırlıklar, kalite ve tutarlılığını artırır fare bağırsak bütün bağlar hazırlanması için büyük bir kullanım olduğunu kanıtlamıştır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Iki operatör tam 6 dakika içinde fare otopsi böylece cihaz ölçüde sürecini hızlandırır. Bu bariz brüt lezyonlar ve tartma ve büyük organların sabitlemek için bir görsel kontrol içerecektir. Ayrıca operatörler, durulama kurulayın ve mide, çekum, ince bağırsak ve kolon tartmak ve tüm bağlar hazırlamak için izin verecektir. Basık doku çok hızlı bir şekilde sabit ve dolayısıyla bozulma eserler önlemek olabilir.
(Dışında hızı) cihazın önemli avantajların…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
References
- Goodlad, R. A., Alison, M. R. Cancer Handbook. , 243-262 (2007).
- Ward, J. M., Treuting, P. M. Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models. Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).
- Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M. Training mouse pathologists: ten years of workshops on the Pathology of Mouse Models of Human Disease. Toxicol Pathol. 40, 823-825 (2012).
- Wasan, H. S., Novelli, M., Bee, J., Bodmer, W. F. Dietary fat influences on polyp phenotype in multiple intestinal neoplasia mice. Proc Natl Acade Sci USA. 94, 3308-3313 (1997).
- Rudling, R., Hassan, A. B., Kitau, J., Mandir, N., Goodlad, R. A. A simple device to rapidly prepare whole mounts of murine intestine. Cell Prolif. 39, 415-420 (2006).
- Alferez, D., Goodlad, R. A. To best measure cell proliferation in samples from the intestine. Cell Prolif. 40, 231-240 (2007).
- Park, H. S., Goodlad, R. A., Wright, N. A. The incidence of aberrant crypt foci and colonic carcinoma in dimethylhydrazine-treated rats varies in a site-specific manner and depends on tumor histology. Cancer Res. 57, 4507-4510 (1997).
- Park, H. S., et al. Effects of epidermal growth factor and dimethylhydrazine on crypt size, cell proliferation, and crypt fission in the rat colon. Cell proliferation and crypt fission are controlled independently. Am J Pathol. 151, 843-852 (1997).
- Femia, A. P., Dolara, P., Caderni, G. Mucin-depleted foci (MDF) in the colon of rats treated with azoxymethane (AOM) are useful biomarkers for colon carcinogenesis. Carcinogenesis. 25, 277-281 (2004).
- Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice–part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
- Goodlad, R. A., et al. Inhibiting vascular endothelial growth factor receptor-2 signaling reduces tumor burden in the ApcMin/+ mouse model of early intestinal cancer. Carcinogenesis. 27, 2133-2139 (2006).
- Mandir, N., Englyst, H., Goodlad, R. A. Resistant carbohydrates stimulate cell proliferation and crypt fission in wild-type mice and in the Apc(Min/+) mouse model of intestinal cancer, association with enhanced polyp development. Br J Nutr. 100, 711-721 (2008).
