구개 개발의 연구는 구개열, 엄청난 의료 부담을 부과하고 외관을 손상하는 지속 남길 수 있습니다 출생 결함의 발생에 의해 좌우된다. 우리는 여기서 구개 개발 및 융합에 관련된 다른 신호 경로를 연구하기 위해 사용될 수있다 배양 구개 선반 기술을 보여준다.
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이 논문에서
요약
초록
구순 구개열은 모든 출생 결함의 가장 흔한 중입니다. 중간 선 상피 솔기를 형성하기 위해 부착 상피로 덮여 중간 엽 선반에서 보조 구개 형태 (MES). 이론은 MES 세포 융합 미각 (1)을, 중간 엽 전이 (EMT), 세포 사멸 및 마이그레이션 상피를 수행하는 것이 좋습니다. MES의 전체 붕괴는 중간 엽 세포를 둘러싼 구개 합류의 마지막 필수 단계입니다. 우리는 구개 장기 배양 방법을 제공한다. 체외 프로토콜 개발이 융합 동안 생물학적 및 분자 프로세스의 연구를 할 수 있습니다. 이 기술의 응용 프로그램은 외인성 화학 약품에 대한 평가 응답, 규제 및 성장 요인과 특정 단백질의 효과를 포함, 수많은 있습니다. 구개 기관 배양 물이 생체 내 연구에서 사용 불가능 개발의 다른 단계에서의 조작을 포함하여 다수의 이점을 갖는다.
서론
구강 안면 쪼개진 조각은 가장 지배적 인 두개 안면 기형이다. 또한, 고려 모든 가능한 두개 안면 결함을 가지고,이 신생아 2에서 두 번째로 가장 흔한 선천성 기형이다. 구개 파열은 약 1 미국 (US) 매년마다 700 출생에서 발생, 구개열의 발생 빈도는 갈라진 달에 입맛 또는 3 일 당 쪼개진 조각 15 아이들과 함께 탄생 475 어린이와 동일하다. 어린이의 약 1 %가 매년 전시를 전세계 두개 안면 dysmorphology 어떤 형태의 탄생.
입천장과 입술의 갈라진 틈이 이상이 환자의 평생의 의미와 매우 비싸고 복잡한 절차가 필요합니다. 구강 갈라진 각 환자에 대한 예상 비용은 약 $ 100,000 4입니다. 구순 구개열 환자의 치료는, 두개 안면 외과, 이비인후과, 유전 학자, 마취를 포함하여 의사의 팀이 필요합니다음성 언어 병리학 자, 영양사, 치열 교정, 보철, 심리학자, 신경 외과 및 안과.
palatogenesis에서 보조 구개는 처음에 수직으로 성장하고 혀의 배부 위에 구개 선반 높이를 받아야 쌍의 outgrowths로 발생한다. 해발 고도에 따라, 한 쌍의 구개 선반 (인간의 마우스에서 E14.5 -E15에서와 ....
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프로토콜
설명하는 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 및 사용위원회의 사전 승인을 포함한 척추 동물의 사용에 대한 지침과 규정에 따라 수행해야합니다.
해부 악기와 문화 미디어 1. 준비
- 예비 세탁 모든 악기는 3 %의 과산화수소와 20 분 동안 121 ℃에서 다음 오토 클레이브로 절개하여 사용할 수있다. 후드에서 진공 흡입으로 0.22 μm의 기공 크기의 필터를 사용하여 항생제와 항진균제 솔루션 BGJb 미디어를 필터링합니다.
문화 장비 2. 준비
- 70 % 알코올 스프레이, 작은 삼각형의 구개 기관을 지원하는 폴리 카보네이트 멤브레인 필터를 잘라하고 건조 할 수 있습니다. 기관 배양 접시 위에 깨끗하고 살균 등변 삼각형 모양의 와이어 그리드 (20mm)를 배치하여 센터 - 글쎄 장기 배양 접시 (60x15 mm)를 준비합니다. 그 다음 B의 1 ㎖로 잘 채우기GJB 미디어 문화 미디어. 참고 : 용지가 입맛을 잠수없이 그리드의 수준에 도달하기에 충분해야한다. 실험에 .Depending 그리드의 상단에있는 멤브레인 필터, 아래 반짝이는면, (그리드 당 3 ~ 4 막)을 배치, 치료 (단백질, 항체 또는 억제제) 미디어에 추가 할 수 있습니다 ....
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결과
기술이 연구 experiments.The 다음의 다른 종류에 적용될 수는 구개 융합에 체외 니코틴 기형 효과를 시험하기 위해 설계되었다. 마우스의 두 균주는이 실험에 이용 된, CD1 및 C57.Palatal 조직 니코틴 헤미 0.06 및 6 mM의 농도로 처리 하였다. 그것은 구개 융합 패턴 및 타이밍이 서로 다른 두 균주에서 다르다는 것을 관찰 하였다. CD1 쥐에서, 대조군 구개 가구는 시간 의존적 방식으로 융합을 계속했다. 그러나, 특히 6MM 니코틴 농도 (그림 4A)에서 처리 된 그룹 니코틴 지연 융합. CD1 마우스 입맛의 조직학 섹션 제어 시편에 72 시간 후에 총 융합 하였다. 니코틴의 낮은 복용량에서 구개 선반은 준수하지만 상피 세포는 배양 3 일 후에 남아있다. 니코틴의 고용량에서 배양 구개 선반 배양 72 시간 후 연락을하지 않았다.
, 대조군에서 구개 선반은 시간 .......
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토론
이 문서의 프로토콜은 배아 일 13.5에서 배아에서 구개 선반을 해부하는 방법을 제공한다. 마우스 배아 구개 가구는 37 ° C에서 95 % O 2, 5 % CO 2 분위기하에 무 혈청 배지에서 배양 하였다. 성공적인 구개 해부는 문화의 완료에 안락사 쥐의 배아 시간의 절차를 수행하는 동안 각 단계에서 여러 요인에 결정적으로 의존한다. 구개 융합을 좌우하는 가장 중요한 요소 중 하나는 기관 배양을 시작하는 데 걸리는 시간이다; 배아는 배아 일 13.5 보조 구개 선반은 수평으로에있을 필요가 있지만, (그림 1)을 융합하기 시작하지 않았습니다.
절차를 수행하는 동안 또 다른 중요한 점은 난황에서 배아의 exteriorization입니다. 이 단계는 얼굴 구조에 대한 손상을 방지하기 위해 세심한주의를 요구한다. 배아 SAC로부터 제거되면, 헤드로부터 제거페트리 접시에 넣고 몸을 양쪽에서 광섬유 조명 실체 현미경.......
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공개 사항
저자는 경쟁하는 금전적 이해관계를 가지고 있지 않습니다.
감사의 글
저자는 어떠한 감사의 말도 가지고 있지 않습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| BGJb | Invitrogen | ||
| 페니실린/스트렙토마이신 | Lonza Inc. | 17-602E | 100X |
| 페트리 접시 | VWR | 25384-088 | 100 x15 mm |
| 센터-웰 오르간 문화 접시 | 팔콘 | #353037 | 60 x15 mm |
| 와이어 삼각형 그리드 | 스테인레스 스틸 와이어 메쉬로 맞춤 제작되어 오르간 문화 접시에 잘 맞습니다. | ||
| 폴리카보네이트 필터 | GE& Water and Process Technologies | K04BP04700 | Black 0.4 마이크론, 47 mm |
| 실체 현미경 | ZEISS Stemi SR | ||
| Culture hood | NUAIRE Laminar Flow | ||
| Microdissecting forceps | Dumont Medical | #5 | |
| 미세 해부 가위 | Kent Scientific Corporation | INS14003-G | Vannas 가위, 스트레이트, 길이 8cm, 0.1mm 팁, 5mm 블레이드, 독일산 |
| 미세 해부 가위 | Kent Scientific Corporation | INS500086 | Vannas 가위, 스트레이트, 길이 8.5cm, 0.025mm x 0.015mm 팁, 7mm 블레이드 |
| 해부 가위 | Kent Scientific Corporation | INS14127-G | 곡선형 스프링 가위, 길이 10.5cm, 8mm 블레이드, 독일산 |
| 수술용 큐레테(숟가락 주걱) | Hu-friedy | CM 2/4 | |
| 프로텍터 실험실 후드 | Labconco | ||
| 인큐베이터 | Thermo Scientific | Farma | |
| Series11 워터 재킷 | |||
| CO2 인큐베이터 | |||
| PBS | 지코 | 10010-023 | 1배 |
| 광섬유 광원 | Fiber-light Dolan-Jenner | PL-750 | |
| 임베딩 카세트 | Statlab | EC301 | |
| 김 와이프 | VWR | 470173-504 |
참고문헌
- Nawshad, A. Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question. Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).
- Strong, E. B., Buckmiller, L. M.
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