צנתור לטווח ארוך של טרונק לימפה במעי וגביית הלימפה חזירים ילודים

Summary

We present a surgical procedure to catheterize the intestinal lymph trunk in neonatal pigs to collect large quantities of lipid metabolism components from efferent lymph.

Abstract

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal (central) efferent lymph. Importantly, the collection of central lymph from the intestine enables researchers to study both the mechanisms and lipid constitutes associated with lipid metabolism, intestinal inflammation and cancer metastasis, as well as cells involved in immune function and immunosurveillance. A ventral mid-line surgical approach permits excellent surgical exposure to the cranial abdomen and relatively easy access to the intestinal lymph trunk vessel that lies near the pancreas and the right ventral segment of the portal vein underneath the visceral aspect of the right liver lobe. The vessel is meticulously dissected and released from the surrounding fascia and then dilated with sutures allowing for insertion and subsequent securing of the catheter into the vessel. The catheter is exteriorized and approximately 1 L/24 hr of lymph is collected over a 7 day period. While this technique enables the collection of large quantities of central lymph over an extended period of time, the success depends on careful surgical dissection, tissue handling and close attention to proper surgical technique. This is particularly important with surgeries in young animals as the lymph vessels can easily tear, potentially leading to surgical and experimental failure. The video demonstrates an excellent surgical technique for the collection of intestinal lymph.

Introduction

מערכת הלימפה היא שטח אלתר של פיזיולוגיה. במודלים פרה של צנתור הלימפה להתרחש מיני בעלי חיים שונה ^1-8 ומשמשים והפרמצבטיקה ומכוני מחקר לחקור מנגנוני המעורבים שומנים ^8-12 סמים מטבוליזם ^13-15, גרורות סרטן ¹⁶ עם טיפול ניסיוני ^17, ו ^-18 תפקוד מערכת החיסון ^-26. מחקר זה בוחן את שימוש צנתור מטען לימפה במעי במודל חזיר בית למדוד רכיבים של מטבוליזם שומנים בדם. מטבוליזם Lipoprotein מעורב בייצור הפרשת chylomicrons, כמו גם משינויים בשיעורי שומנים הקשורים חלבון כולל. אלה הם שיקולים חשובים כמו שיש הבדלים גדולים במטבוליזם שומנים בין במודלים של מכרסמים נפוצים ובני אדם וככזה, במודלי חזירים לאסוף לימפה במעי יכולים לספק מידע דומה יותר ללימוד שומנים ליtabolism באנשים ^27-31.

מספר טכניקות כירורגיות משמשות כדי לאסוף את לימפה במעי במינים של בעלי חיים גדולים: גישת כתף גולגולתי (כלומר, צנתור צינור חזה) ^5, גישת אגף העליון לרוחב ^32-34, וכן קו אמצע גחון או גישת paramedian ^22,35. וידאו זה מתאר בפירוט את ההליך הניתוח חזירים בגישה כירורגית קו אמצע גחון עבור הצנתור של המטען לימפה במעי. היתרי טכניקה כירורגית זהירות שיטה זו של צנתור הלימפה לאסוף כמויות גדולות של הלימפה מרכיביו לאורך תקופות ממושכות של זמן.

טכניקה זו פותחת מספר עצום של יישומים לתחומים רבים לבחון פונקציות פיסיולוגיות שונות. יישומים יכולים לכלול, אך אינם מוגבלים, ליפופרוטאין גוף וחילוף חומרי שומנים, immunosurveillance, בראשית גידול וגרור, תפקוד מעיים, ואת developmאף אוזן גרון והתקדמות של מחלה דלקתית של המעי.

Protocol

כל הנהלים על חיות ניסוי המתוארות הוא סרטון ואת כתב היד אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש ועקב אחר ההנחיות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית של טיפול בבעלי החיים. 1. הרדמה כירורגית והכנת כירורגים של החזירים הילודים <ol s…

Representative Results

צנתור הלימפה של המטען הלימפה מעיים של חזיר בילוד מאפשר איסוף של כ 1 L / 24 שעות של הלימפה מרכזית על תקופה של 7 ימים. הלימפה שנאסף בניסויים זה הכיל רכיבים של מטבוליזם שומנים בדם, כלומר חלבון הלימפה הכולל, ליפופרוטאין ApoB48, טריגליצרידים, חלבון כולל, וכול?…

Discussion

איסוף לימפה במעי הוא שיטה מצוינת לחקור מנגנוני המעורבים שומנים ^8-12 ו מטבוליזם התרופה ^13-15, סרטן גרורות ^16,17, סחר תא ותפקוד מערכת חיסון ^18-26, במודלים של בעלי חיים שונים הניסיונות. ואכן, את היכולת לקצור כמויות גדולות של מי היקפי (מביא) ומרכז (efferent וכלי ?…

Materials

Miller laryngoscope blade	Welch Allyn	68044	182 mm length
Surgivet advisor: Vital signs monitor	Surgivet	V9203
Rectal temperature probe	Surgivet	V3417
Mono-polar electrosurgery generator	Valley Lab
Metzenbaum scissors	Fine Science	14518-18
Tuffier retractor	Stevens	162-11-676
Mosquito forceps	Stevens	162-7-10
Kelly forceps-curved (14cm)	Stevens	162-7-38
Allis tissue forceps	Stevens	162-7-38
Forceps dressing-eye (10.2cm)	Stevens	162-18-780
Forceps dressing-Adison (12.1cm)	Stevens	162-17-2510
Needle Drivers	Stevens	162-V98-42
Iris scissors	Fine science	14058-11
Circulating water pump	Jorvet	J-783X
Maxitherm-Vinyl blanket	Jorvet	J-784C
Q tip applicators	Fisher Scientific	22-037-960
Catheterization  tubing (4.06 OD X 2.31 ID)	Braintree Scientific Inc.	MRE-160	Micro-Renethane implantation tubing
2-0 silk suture	Ethicon	LA556
2-0 polyglactin suture	Ethicon	J443H	2-0 vicryl
Large animal jacket	Lomir Biomedical Inc.	SSJ2YC
Polypropylene wash bottles	Fisher Scientific	03-409-22C	500 ml
Penicillin-Streptomycin	Sigma Aldrich	D4333
EDTA	Sigma Aldrich	60-00-4
Amphotericin B	Sigma Aldrich	A2411
Azaperone	Elanco Animal Health		Stresnil
Dexmedetomidine hydrochloride	Zoetis	6295	Dexdomitor
Isoflurane	Abbott Animal  Health	05260-5	IsoFlo
Ketamine hydrochloride	Zoetis	2626	Ketaset
Bupenorphine hydrochloride	Champion Alstoe Animal Health		DIN:02347510
6 mm Endotracheal tube	Jorvet	J-165d
10% Lidocaine spray	AstraZeneca		DIN:02003767
4 % Chlorhexidine surgical scrub	Partnar Animal Health	PCH-011	Diluted: 2.0% solution
3M Surgical steri- drape	3M Health Care	1040
SDS page gel	Invitrogen	EA0375BOX	3-8 % tris acetate
Polyvinylidene fluoride membrane	Millipore	IPVH00010	0.45 μm pore size
ApoB antibody	EMD Millipore	AB742	1:4000 dilution
Donkey anti-goat IgG-HRP	Santa Cruz Biotechnology	Sc-2304
ECL Prime Western Blotting Reagent	GE Healthcare LifeSciences	RPN2232
Triglyceride Kit	Wako Pure Chemicals	998-40391/994-40491
Total Cholesterol Kit	Wako Pure Chemicals	439-17501
Total Protein	Pierce	23225	Bicinchoninic Acid Assay