A simple and general method for the synthesis of cyclic peptides using microwave irradiation is outlined. This procedure enables the synthesis of backbone cyclic peptides with a collection of different conformations while retaining the side chains and the pharmacophoric moieties., and therefore, allows to screen for the bioactive conformation.
אינטראקציות חלבון-חלבון (PPIs) מעורבות באופן אינטימי כמעט בכל התהליכים הביולוגיים וצמודות למחלות רבות אנושיות. לכן, יש מאמץ גדול כדי למקד PPIs במחקר בסיסי ובתעשיית התרופות. ממשקי חלבונים הם בדרך כלל גדולים, שטוחים, ולעתים קרובות חוסר כיסים, מסבך את הגילוי של מולקולות קטנות המתמקדות באתרים כאלה. יש גישות אלטרנטיביות מיקוד באמצעות נוגדני מגבלות בשל זמינות ביולוגית ירודה אוראלית, תא-חדירות נמוכות, וחוסר יעילות ייצור.
יש שימוש בפפטידים למקד ממשקי PPI מספר יתרונות. יש לי פפטידים גמישות קונפורמציה גבוהה יותר, הסלקטיביות מוגברת, והם בדרך כלל זולים. עם זאת, יש לי פפטידים מגבלות משלהם, כולל יציבות עניה וקרום תא חוסר יעילות חצייה. כדי להתגבר על מגבלות אלה, ניתן לבצע cyclization פפטיד. Cyclization הודגם לשפר סלקטיביות פפטיד, יציבות מטבולית, וזמינות ביולוגית. עם זאת, ניבוי קונפורמציה ביו של פפטיד מחזורי הוא לא טריוויאלי. כדי להתגבר על האתגר הזה, גישה אטרקטיבית אחד אותו למסך ספרייה ממוקדת למסך שבו יש את כל פפטידים מחזורי עמוד השדרה באותו רצף ראשוני, אך שונות בפרמטרים המשפיעים על קונפורמציה, כגון גודל טבעת ומיקום.
אנו מתארים פרוטוקול מפורט לסינתזה של פפטידים ספרייה מחזוריים עמוד השדרה מיקוד PPIs טפיל הספציפי. שימוש בגישה עיצוב רציונלים, שפיתחנו פפטידים הנגזרים מקולט eishmania L חלבון הפיגום לC-קינאז מופעל (חוסר). חוקרים שערנו כי רצפים בחוסר הנשמרים בטפילים, אבל לא בhomolog מארח היונקים, עשויים לייצג אתרי אינטראקציה לחלבונים שהם קריטיים ליכולת הקיום של הטפילים. פפטידים מחזוריים היו מסונתזים באמצעות קרינת מיקרוגל כדי להפחית את זמני תגובה ולהגדיליְעִילוּת. פיתוח ספרייה של פפטידים מחזוריים עמוד השדרה בגדלים שונים טבעת מאפשר מסך שיטתי לקונפורמציה הפעילה הביולוגית ביותר. שיטה זו מספקת דרך כללית, מהירה, וקלילה לסנתז פפטידים מחזוריים.
אינטראקציות חלבון-חלבון (PPIs) לשחק תפקיד מרכזי ברוב התהליכים ביולוגיים, מהעברת אותות תאיות לתא המוות 1. לפיכך, מיקוד PPIs הוא בעל חשיבות עליונה למחקר בסיסי ויישומים טיפוליים. יכול להיות מוסדר על ידי PPIs נוגדנים ספציפיים ויציבים, אבל נוגדנים הם יקרים וקשים לייצר ויש זמינות ביולוגית ירודה. לחלופין, יכול להיות ממוקד PPIs על ידי מולקולות קטנות. מולקולות קטנות קלות יותר לסנתז וזולים בהשוואה לנוגדנים; עם זאת, הם יחסית פחות גמישים ולהתאים טובים יותר לחללים קטנים יותר לממשקי חלבון-חלבון גדול 2,3. מחקרים שונים הראו כי פפטידים, שהם פשוט יותר וזולים יותר מאשר נוגדנים וגמישים יותר ממולקולות קטנות, יכולים להיקשר ממשקי חלבון ולהסדיר PPIs 4,5. שוק פפטיד הטיפולי העולמי מוערך כרבע מליארד דולרים בשינה 2013, והוא גדל annua 10.5%lly 6. יתר על כן, יש יותר מ -50 פפטידים משווקים, סביב 270 פפטידים בשלבים שונים של ניסויים קליניים, ופפטידים כ -400 בשלבים פרה-קליניים מתקדמים 7. למרות פפטידים רבים נמצאים בשימוש כתרופות, פפטידים עדיין מהווים מספר אתגרים המגבילים את היישום הנרחב שלהם, כולל זמינות ביולוגית ירודה ויציבות, חוסר יעילות בקרום תא מעבר, וגמישות קונפורמציה 8,9. חלופה אחת להתגבר על החסרונות אלה היא להחיל שינויים שונים כגון (חומצת אמינו וD-N-אלקילציה) מקומיות והגלובלי (cyclization) אילוצים 8,10-12. שינויים אלה להתרחש גם באופן טבעי. לדוגמא, ציקלוספורין, פפטיד הטבעי מחזורי לדיכוי מערכת חיסון, מכיל חומצת אמינו בודדת D-ועובר שינויי N-אלקילציה 13,14.
שינוי של חומצות אמינו טבעיות כדי לגרום לאילוצים מקומיים, כגון D- וN-אלקילציה, לעתים קרובות משפיע על פפטיד9; של פעילות ביולוגית. עם זאת, cyclization, שבו הרצף של עניין יכול להישאר אותו הדבר, יש יותר סיכוי לשמור על פעילות ביולוגית. Cyclization היא דרך אטרקטיבית מאוד להגביל את מרחב קונפורמציה פפטיד על ידי הפחתת שיווי המשקל בין תצורות שונות. בדרך כלל זה מגביר את הפעילות והסלקטיביות ביולוגיות על ידי הגבלת פפטיד לקונפורמציה הפעילה שמתווכת רק פונקציה אחת. Cyclization גם משפר את יציבות פפטיד על ידי שמירה על פפטיד בקונפורמציה שפחות מוכרת על ידי אנזימים משפילים. ואכן, פפטידים מחזוריים הוצגו השתפרו יציבות מטבולית, זמינות ביולוגית, וסלקטיביות בהשוואה לעמיתיהם ליניארי שלהם 15-17.
עם זאת, cyclization יכולה להיות חרב פיפיות שכן במקרים מסוימים ההגבלה עלולה למנוע פפטידים מהשגת קונפורמציה ביו. כדי להתגבר על מכשול זה, ספרייה ממוקדת שבו יש את כל פפטידים אותו sequenc העיקרייכול להיות מסונתז pharmacophores דואר וכתוצאה מכך קבוע. פפטידים בספרייה שונים בפרמטרים המשפיעים על המבנה שלהם, כגון גודל טבעת ומיקום, על מנת להקרין לאחר מכן לקונפורמציה ביו ביותר 9,18.
יכולים להיות מסונתזים פפטידים הן בפתרון ועל ידי גישת סינתזת פפטיד מוצק שלב (SPPS), שנמצא כעת גישת סינתזת פפטיד הנפוצה יותר ויידון נוסף. SPPS הוא תהליך שבו שינויים כימיים מבוצעים על תמיכה מוצקה באמצעות מקשר להכין מגוון רחב של תרכובות סינתטיות 19. SPPS מאפשר פפטידים הרכבה על ידי צימוד רצוף של חומצות אמינו באופן הדרגתי מC-הסופית, שמצורף לתמיכה מוצקה, לN-הסופית. הצד-השרשרות של חומצות N-α-אמינו חייבים להיות רעול פנים עם הגנה על קבוצות שהם יציבים בתנאי תגובת שימוש במהלך התארכות פפטיד כדי להבטיח את התוספת של חומצת אמינו אחת לרח 'EP. בשלב האחרון, פפטיד הוא שוחרר מהשרף והצד-שרשרת הגנה על קבוצות יוסרו במקביל. בעוד פפטיד הוא להיות מסונתז, ניתן להסיר את כל חומרים כימיים המסיסים ממטריצת תמיכת פפטיד המוצק על ידי סינון ונשטפו בסוף כל שלב צימוד. עם מערכת כזו, עודף גדול של חומרים כימיים בריכוז גבוה יכול לנהוג תגובות צימוד להשלמה וניתן לבצע את כל שלבי הסינתזה באותו הכלי ללא כל העברה של חומר 20.
למרות שיש כמה מגבלות SPPS כגון הייצור של תגובות לא שלמות, תגובות לוואי, חומרים כימיים טמאים, כמו גם קשיי ניטור התגובה 21, את היתרונות של SPPS עשו את זה "תקן הזהב" לסינתזת פפטיד. יתרונות אלה כוללים את האפשרות לשלב חומצות אמינו שאינם טבעיות, אוטומציה, טיהור קלה, הפסדים פיזיים ממוזערים, ושימוש בחומרים כימיים עודפים, וכתוצאה מכךתשואות גבוהות. SPPS הוכח להיות שימושי מאוד בסינתזה של רצפים קשים 21,22, שינויי ניאון 23, וספריות פפטיד 24,25. SPPS הוא גם מאוד שימושי עבור מכלולים מרובה שרשרת אחרות כגון oligonucleotides 26,27, אוליגוסכרידים 28,29, וחומצות גרעין פפטיד 30,31. מעניין לציין, שבמקרים מסוימים, SPPS הוצג להיות יתרון עבור סינתזת מולקולות קטנות שנעשות באופן מסורתי בפתרון 32,33. SPPS משמש הוא בקנה מידה קטנה למחקר והוראה 34,35, כמו גם בקנה מידה גדולה בתעשייה 36-38.
שתי אסטרטגיות סינתזה המשמשות בעיקר במתודולוגיה SPPS לסינתזה של פפטידים הן butyloxycarbonyl (בוק) ו9-fluorenylmethoxycarbonyl (FMOC). האסטרטגיה המקורית הציגה לSPPS הייתה בוק, אשר דורש תנאי חומצה חזקים כדי להסיר צד שרשרת הגנה על קבוצות ולדבוק פפטיד מresin. סינתזת פפטיד מבוססת FMOC, לעומת זאת, מנצלת תנאי בסיס מתונים והיא אלטרנטיבה מתונה יותר לפרוטוקול בוק חומצה יציב 39. אסטרטגית FMOC מנצלת הגנת צד שרשרת המאונכות t-בוטיל (TBU) שהוסרה בשלב האחרון של הסינתזה תוך ביקוע פפטיד מהשרף בתנאי חומצה.
העיקרון הכללי לסינתזת פפטיד על תמיכה מוצקה מוצג באיור 1. חומצת אמינו הראשונית, רעול פנים על ידי קבוצת הגנה זמנית על N-α-הסופית, נטענת על השרף מC-סופית. קבוצת הגנת חצי קבועה כדי להסוות את שרשרת הצד משמשת גם במידת צורך (איור 1, שלב 1). הסינתזה של פפטיד היעד מורכבת מC-הסופית לN-הסופית על ידי מחזורים חוזרים ונשנים של deprotection של קבוצת הגנת N-α-הזמנית (איור 1, שלב 2) וצימוד של חומצת אמינו המוגנת הבאה (איור 1 </str אונג>, שלב 3). לאחר חומצת אמינו האחרונה נטענת (איור 1, שלב 4), פפטיד הוא ביקע מתמיכת השרף וקבוצות הגנת חצי הקבועה מוסרים (איור 1, שלב 5).
באיור 1. תכנית כללית של סינתזת פפטיד השלב מוצקה. חומצת אמינו המוגנת-N-α מעוגנת באמצעות קבוצת carboxyl באמצעות מקשר לשרף (שלב 1). הפפטיד הרצוי מורכב באופן ליניארי מC-הסופית לN-הסופית על ידי מחזורים חוזרים ונשנים של deprotection של הקבוצה הזמנית הגנה (TPG) מN-α (שלב 2) וצימוד חומצת אמינו (שלב 3). לאחר להשיג הסינתזה (שלב 4), קבוצות חצי קבועות הגנה (SPG) הם deprotected במהלך מחשוף פפטיד (שלב 5).תקבל = "_ blank"> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
לאחר ההרכבה של שרשרת הפפטיד המלאה, cyclization יכול להיות מושגת על ידי מספר חלופות: (א) ראש אל זנב cyclization – זו דרך נוחה אבל מוגבל שכן הוא מספק רק אפשרות אחת לcyclization (איור 2 א), cyclization (ב) באמצעות חומצות אמינו מהרצף של עניין המכילות קבוצות פונקציונליות ביו – עם זאת, השימוש בחומצות אמינו אלה עשויים להשפיע על הפעילות הביולוגית (איור 2), וcyclization (C) על ידי הוספת חומצות אמינו (אבני בניין או אחר) מבלי להפריע הרצף ביו. היכרות עם מולקולות אלה היא נפוצה שכן היא מאפשרת ייצור של ספריות ממוקדות מבלי לשנות את הרצף של עניין (איור 2 ג).
Figure 2. אסטרטגיות cyclization פפטיד האלטרנטיבי ראש () לcyclization זנב, דרך קשר פפטידי בין C-הסופית וN-הסופית.; cyclization (ב ') בין קבוצות הפונקציונליות כגון אג"ח דיסולפיד בין שאריות ציסטאין (1), או קשר בין אמיד הרשתות בצד של ליזין לאספרטית / חומצה גלוטמית (2), או רשת צד לn- או C-סופית (3 -4); cyclization (C) על ידי הוספת חומצות אמינו נוספות או נגזרי חומצת אמינו או מולקולות קטנות, לדוגמא לפני (R0) ואחרי (R7) הרצף ביו. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
סינתזה משתמשת קרינת מיקרוגל לחמם תגובות, ובכך מאיץ כימי אורגנית בסיוע מיקרוגל תמורות 40,41. כימיה מיקרוגל מבוססת על היכולת של המגיב / הממס לספוגמיקרוגל אנרגיה ולהמיר אותו לחום 42. לפני הטכנולוגיה הפכה נפוצה, חסרונות עיקריים היו הצורך להתגבר, כוללים יכולת השליטה והשחזור של פרוטוקולי סינתזה וחוסר מערכות זמינות עבור פקדי טמפרטורה ולחץ נאותים 43,44. הדו"ח הראשון של סינתזת פפטיד בסיוע מיקרוגל נעשה שימוש במיקרוגל מטבח לסנתז כמה פפטידים קצרים (7-10 חומצות אמינו) עם שיפור משמעותי של יעילות הצימוד וטוהר 45. יתר על כן, אנרגיית מיקרוגל הוצגה כדי להקטין הצטברות שרשרת, להפחית תגובות צד, להגביל racemization, ולשפר את שיעורי צימוד, שהם קריטיים לכל רצפים קשים וארוכים 46-53.
כיום השימוש בקרינת מיקרוגל לסינתזה של פפטידים או תרכובות הקשורות בתמיכה מוצקה הוא נרחבת, כולל סינתזה () במים במקום ממס אורגני 54; (ב) סינתזה של פפטידים עםשינויים נפוצים לאחר translational, כגון glycopeptides 55-58 או phosphopeptides 59-61, סינתזה שקשה בדרך כלל עקב יעילות הצימוד הנמוכה של נגזרי חומצת אמינו הפריעו sterically; (ג) סינתזה של פפטידים עם שינוי בעמוד השדרה, כגון azapeptides, אשר יכול להיווצר על ידי ההחלפה של C (α) של שאריות חומצת אמינו עם אטום חנקן 62, או peptoids, הצד שמחובר לשרשרת חנקן אמיד ולא אטום Cα 63,64; סינתזה של פפטידים מחזוריים 65-71 (ד); סינתזה ו( ה) של ספריות קומבינטורית 51,72. במקרים רבים, החוקרים דיווחו יעילות גבוהה יותר וצמצום זמן סינתזה באמצעות קרינת מיקרוגל בהשוואה לפרוטוקול המקובל.
באמצעות עיצוב רציונאלי 73-75, שפיתחנו פפטידים אנטי-טפילים שנגזרו מהקולט של eishmania L הפיגום FOr מופעל C-קינאז (חוסר). חוסר ממלא תפקיד חשוב בשלב המוקדם של זיהום שושנת יריחו 76. טפילים להביע רמות נמוכות יותר של חוסר להיכשל טפילים אפילו עכברים שנפרץ חיסון 77 כמו חוסר מעורב בתהליכי טפיל איתות חיוניים וסינתזת חלבון 78. לכן, חוסר הוא חלבון מפתח פיגום 79 ויעד תרופה יקר. התמקדות ברצפים בחוסר הנשמרים בטפילים, אך לא במעמד homolog היונקים המארח, זיהינו פפטיד חומצת אמינו 8 (RNGQCQRK) שירד שושנת יריחו sp. כדאיות בתרבות.
כאן, אנו מתארים פרוטוקול לסינתזה של פפטידים עמוד השדרה מחזורית הנגזרים מרצף חלבון חוסר שתואר לעיל. פפטידים היו מסונתזים על תמיכה מוצקה באמצעות חימום במיקרוגל על ידי המתודולוגיה SPPS עם פרוטוקול FMOC / TBU. פפטידים היו מצומדת לפפטיד 47-57 מוביל (YGRKKRRQRRR) TAT באמצעות אג"ח אמיד כחלק מSPPS. תחבורה של מגוון רחב של מטענים לתאים מבוססות TAT הייתה בשימוש כבר למעלה מ -15 שנים ומסירת המטען לאברונים subcellular אושרה 80. ארבעה linkers שונה, succinic ואנהידריד glutaric כמו גם adipic והחומצה pimelic, שימש לביצוע cyclization ליצור linkers חומצה קרבוקסילית של שניים עד חמישה פחמנים. Cyclization נעשה שימוש באנרגית מיקרוגל, והצעדים deprotection מחשוף וצד-שרשרת הסופיים נעשו באופן ידני ללא אנרגיית מיקרוגל. השימוש בסינתיסייזר מיקרוגל אוטומטי שיפר את טוהר המוצר, הגדיל את תשואת המוצר, וצמצם את משך הזמן של הסינתזה. פרוטוקול כללי זה יכול להיות מיושם למחקרים אחרים שעושים שימוש בפפטידים להבין מנגנון מולקולרי חשוב במבחנת in vivo ולפתח תרופות פוטנציאליות למחלות בבני אדם.
הסינתזה של ספרייה ממוקדת של פפטידים מחזוריים עמוד השדרה נגזרים מחלבון חוסר הטפיל שושנת יריחו באמצעות סינתיסייזר מיקרוגל אוטומטי לחלוטין מתוארת. ספרייה ממוקדת של פפטידים מחזוריים פותחה עם pharmacophores שימור וlinkers השונים. תוספת של linkers השונים כגון אנהידריד glutaric, אנהי…
The authors have nothing to disclose.
אנו מודים לורן ואן Wassenhove, Sunhee הוואנג, ודריה מושלי-רוזן לדיונים מועילים. העבודה נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות NIH מענק RC4 TW008781-01 C-רעיון (ניצוץ) לNQ היו הממנים לא היה תפקיד בעיצוב מחקר, איסוף נתונים וניתוח, החלטה לפרסם, או הכנה של כתב היד.
REAGENTS | |||
Solid support, Rink Amide AM resin ML | CBL | BR-1330 | loading: 0.49 mmol/g |
Fmoc-Ala-OH | Advanced Chemtech | FA2100 | |
Fmoc-Arg(Pbf)-OH | Advanced Chemtech | FR2136 | |
Fmoc-Asn(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FN2152 | |
Fmoc-Asp(OBut)-OH | Advanced Chemtech | FD2192 | |
Fmoc-Cys(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FC2214 | |
Fmoc-Gln(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FQ2251 | |
Fmoc-Glu(OtBu)-OH | Advanced Chemtech | FE2237 | |
Fmoc-Gly-OH | Advanced Chemtech | FG2275 | |
Fmoc-His(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FH2316 | |
Fmoc-Ile-OH | Advanced Chemtech | FI2326 | |
Fmoc-Leu-OH | Advanced Chemtech | FL2350 | |
Fmoc-Lys(Boc)-OH | Advanced Chemtech | FK2390 | |
Fmoc-Met-OH | Advanced Chemtech | FM2400 | |
Fmoc-Phe-OH | Advanced Chemtech | FF2425 | |
Fmoc-Pro-OH | Advanced Chemtech | FP2450 | |
Fmoc-Ser-(tBu)-OH | Advanced Chemtech | FS2476 | |
Fmoc-Thr(tBu)-OH | Advanced Chemtech | FT2518 | |
Fmoc-Trp(Boc)-OH | Advanced Chemtech | FW2527 | |
Fmoc-Tyr(But)-OH | Advanced Chemtech | FY2563 | |
Fmoc-Val-OH | Advanced Chemtech | FV2575 | |
1-Methyl-2-pyrrolidinone (NMP) | Sigma | 328634 | Caution Toxic/Highly flammable/Irritant. |
N,N-Dimethylformamide (DMF) | Alfa Aesar | 43465 | Caution Toxic |
Use high quality DMF to eliminate side reactions such as Fmoc removal as a result of the dimethylamine traces from DMF decomposition. | |||
Dichloromethane (DCM) | Sigma | D65100 | Caution Harmful |
Dibromomethane (DBM) | Sigma | D41868 | Caution Harmful |
Trifluoroacetic acid (TFA) | Sigma | T62200 | Caution Corrosive/Toxic |
Trifluoroacetic acid, HPLC grade (TFA) | Sigma | 91707 | Caution Corrosive/Toxic |
Diethylether | Sigma | 31690 | Caution Highly flammable/Harmful |
Triisopropylsilane (TIS) | Sigma | 233781 | Caution Irritant/Flammable |
Water, HPLC grade | Sigma | 270733 | |
Acetonitroile, HPLC grade (ACN) | Fisher Scientific | A998-4 | Caution Flammable/Irritant/Harmful |
N,N-Diisopropylethylamine (DIEA) | Sigma | 3440 | Caution Corrosive/Highly flammable |
Piperidine | Sigma | W290807 | Caution Toxic/Highly flammable |
Pyridine | Sigma | 270970 | Caution Highly flammable/Harmful |
Ethanol (EtOH) | Sigma | 459844 | Caution Highly flammable/Irritant |
1-Hydroxybenzotriazole hydrate (HOBt) | Sigma | 157260 | Caution Highly flammable/Irritant/Harmful |
O-(Benzotriazol-1-yl)-N,N,N′,N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) | Sigma | 12804 | Caution Irritant/Harmful |
Benzotriazole-1-ly-oxy-tris-pyrrolidinophosphonium hexafluorphosphate (PyBOP) | Advanced Chemtech | RC8602 | Caution Irritant |
Ninhydrin | Sigma | 454044 | Caution Harmful |
Phenol | Sigma | P3653 | Caution Corrosive/Toxic |
Potassium cyanide (KCN) | Sigma | 11813 | Caution Very Toxic |
Potassium hydroxide (KOH) | Sigma | 221473 | Caution Toxic |
N,N’- | Sigma | 38370 | Caution Flammable/ Toxic |
Diisopropylcarbodiimide (DIC) | |||
4-Dimethylaminopyridine (DMAP) | Sigma | 522805 | Caution Toxic/Irritant |
Glutaric anhydride | Sigma | G3806 | Caution Flammable/Irritant/Harmful |
Succinic anhydride | Sigma | 239690 | Caution Irritant/Harmful |
Adipic acid | Sigma | A26357 | Caution Toxic/Irritant |
Pimelic acid | Sigma | P45001 | Caution Toxic/Irritant |
Chloranil | Sigma | 23290 | Caution Toxic/Irritant |
Acetaldehyde | Sigma | 402788 | Caution Flammable/ Toxic |
EQUIPMENT | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Centrifuge | Beckman Coulter | Allegra 6R centrifuge | |
Lyophilizer | Labconco | freezone 4.5 | |
Vacuum pump | Franklin Electric | model 1101101416 with 3/4 HP | Alcatel pump with Franklin Motor |
Polypropylene cartridge 12 ml | Applied Separation | 2419 | |
Cap plug for 12 ml polypropylene cartridge | Applied Separation | 8157 | |
Polypropylene cartridge 3 ml | Applied Separation | 2413 | |
Cap plug for 3 ml polypropylene cartridge | Applied Separation | 8054 | |
Stop cocks PTFE | Applied Separation | 2406 | |
Tubes flat, 50 ml | VWR | 21008-240 | |
Extraction manifold, 20 pos, 16 x 100 mm tubes | Waters | WAT200609 | |
Shaker, BD adams™ nutator mixer | Fisher scientific | 22363152 | |
Nalgene HDPE narrow mouth IP2 bottles, 125 ml | Fisher scientific | 03-312-8 | |
Erlenmeyer flask | Fisher Scientific | FB-501, 500 ml | |
Heating block | Thermolyne | 1760 dri bath | |
Disposable borosilicate glass tubes with plain end | Fisher Scientific | 14-961-25 | |
Micropipettes and tips Finnpipette | Thermo | 20–200 and 100–1,000 μl | |
HPLC vials – micro vl pp 400 µl PK100 | VWR | 69400-124 | |
HPLC vial- Blue Snap-It Cap | VWR | 66030-600 | |
Analytical HPLC column | Peeke Scientific | U1-5C18Q-JJ | ultro 120 5 µm C18Q, 4.6 mm ID 150 mm |
Prep HPLC column, XBridge | Waters | OBD C18 5 µm column | 19 mm × 150 mm |
Mass spectrometer | Applied Biosystems | Voyager DE-RP |