A simple and general method for the synthesis of cyclic peptides using microwave irradiation is outlined. This procedure enables the synthesis of backbone cyclic peptides with a collection of different conformations while retaining the side chains and the pharmacophoric moieties., and therefore, allows to screen for the bioactive conformation.
Protein-protein etkileşimleri (PPIs) hemen hemen tüm biyolojik süreçlerin neden olduklarına ve birçok insan hastalıkları ile bağlantılıdır. Bu nedenle, temel araştırma ve ilaç sektöründe PPIs hedef büyük bir çaba var. Protein-protein arayüzleri düz, genellikle büyük ve genellikle bu tür siteleri hedeflemek küçük moleküllerin keşfi zorlaştıran, cepler yoksundur. Antikorlar kullanılarak alternatif hedefleme yaklaşımları kötü oral biyoyararlanım, düşük hücre geçirgenliği ve üretim verimsizliği nedeniyle sınırlamaları vardır.
PPI arayüzleri hedef peptidleri kullanma birçok avantajı vardır. Peptitler daha şekilsel esnekliğe, artan seçiciliğe sahip ve genellikle daha ucuzdur. Ancak, peptidler yoksul istikrar ve verimsizlik geçen hücre zarları da dahil olmak üzere, kendi sınırlamaları vardır. Bu tür kısıtlamaların üstesinden gelebilmek için, peptit siklizasyon yapılabilir. Siklizasyon peptid seçimliliği arttırmak için ortaya konmuşturMetabolik stabilitesi ve biyo. Bununla birlikte, bir siklik peptid konformasyonunu biyoaktif tahmin önemsiz değildir. Bu sorunun üstesinden gelebilmek için, bir çekici bir yaklaşım tüm omurga siklik peptitler aynı birincil sekansına sahiptir, ancak bu tür bir halka boyutu ve konumu olarak yapısını etkileyen parametrelerin, farklı olan ekrana odaklanmış bir kütüphanenin taranması için.
Spesifik parazit PPIs hedefleme omurgası siklik peptidlerin bir kütüphane sentezi için detaylı bir protokol açıklar. Rasyonel bir tasarım yaklaşımı kullanarak, aktive C-kinaz (EKSİKLİĞİ) için iskele protein L eishmania reseptörü türetilen peptidler geliştirdi. Biz ancak memeli konak homolog olarak, parazitler korunan LACK diziler, parazitlerin canlılığı açısından kritik olan proteinler için etkileşim siteleri temsil edebilir varsaydık. Halkalı peptidler reaksiyon sürelerini azaltmak ve artırmak için mikrodalga ışıması kullanılarak sentezlendiverimlilik. Farklı halka boyutları ile omurgası halkalı peptidler bir kütüphane geliştirilmesi en Biyolojik aktif konformasyon için sistematik bir ekran kolaylaştırır. Bu yöntem, döngüsel peptitler sentezlemek için bir genel, hızlı ve kolay bir yol sağlar.
Protein-protein etkileşimleri (PPIs), hücre içi sinyal iletimine hücre ölümüne 1, en çok biyolojik süreçlerde önemli bir rol oynamaktadır. Bu nedenle, PPIs hedefleyen temel araştırma ve tedavi uygulamaları temel bir öneme sahiptir. PPI'lar özel ve stabil antikor ile düzenlenir, ancak antikorlar üretmek ve zayıf biyoyararlanıma sahip pahalı ve zordur edilebilir. Alternatif olarak, PPIs küçük moleküller ile hedeflenebilir. Küçük moleküller, antikorlar ile karşılaştırıldığında sentezlenmesi daha kolay ve ucuzdur; ancak, görece daha az esnek ve geniş protein-protein arayüzleri 2,3 daha küçük boşluklara daha iyi uyum. Çeşitli çalışmalar, basit ve ucuz bir antikor daha küçük moleküllere göre daha esnek olan peptidler, protein arabirimleri bağlanan ve PPIs 4,5 düzenleyebildiğini göstermiştir. Küresel tedavi peptid pazarı 2013 yılında 15000000000 dolar civarında değer ve% 10,5 annua büyüyorLly 6. Ayrıca, 50'den fazla pazarlanan peptidler, klinik test farklı aşamalarında yaklaşık 270 peptidler ve gelişmiş klinik öncesi safhalarında 7 yaklaşık 400 peptidler vardır. Çok sayıda peptidler ilaç olarak kullanılmaktadır rağmen, peptidler hala zayıf biyoyararlanım ve istikrar, geçiş hücre zarlarında verimsizlik ve yapısal esneklik 8,9 dahil olmak üzere yaygın bir uygulama sınırlayan birçok zorluklar oluşturmaktadır. Bu dezavantajların üstesinden gelmek için bir seçenek, örneğin, yerel (D-amino asit ve N-alkilasyon) ve küresel (siklizasyon) sınırlamaların 8,10-12 gibi farklı modifikasyonlar uygulamaktır. Bu modifikasyonlar, aynı zamanda doğal olarak meydana gelir. Örneğin, siklosporin A, bir bağışıklık bastırıcı doğal siklik peptit, tek bir D-amino asit içerir ve N-alkilasyon modifikasyonlar 13,14 geçer.
Doğal amino asitlerin değiştirilmesi, genellikle peptid etkiler, örneğin D- ve N-alkilasyon gibi lokal kısıtlamaları indükleme9'un s biyolojik etkinliği. Bununla birlikte, ilgi konusu sekans aynı kalır hangi siklizasyon, biyolojik aktiviteyi korumak için daha olasıdır. Siklizasyon farklı konformasyonları arasındaki dengeyi azaltarak peptid yapısal alanı kısıtlamak için son derece cazip bir yoldur. Genellikle tek bir işlevine aracı olan aktif yapının peptidi kısıtlayarak, biyolojik aktivite ve seçicilik arttırır. Siklizasyon ayrıca daha az bozucu enzimler tarafından tanınan bir konformasyonda peptid tutarak, peptid stabilitesini artırır. Gerçekten de, siklik peptitler, linear karşıt parçalarına göre 15-17 metabolik dayanıklılık, biyoyararlanımını ve seçicilik geliştirilmiş gösterildi.
Ancak, siklizasyon bazı durumlarda kısıtlama biyoaktif bir yapıyı elde peptidler engelleyebilir çünkü iki ucu keskin kılıç olabilir. Bu engel aşmak için, odaklanmış bir kütüphane olduğu tüm peptidler aynı birincil sequenc vare ve sonuç olarak sabit bir farmakoforlar sentezlenebilir. Kütüphanede peptidler için, daha sonra biyolojik olarak aktif en konformasyon 9,18 taranması için, ki böyle halka boyutu ve konumu olarak yapısını etkileyen parametrelerin, farklıdır.
Peptitler çözelti içinde ve şimdi daha yaygın peptid sentez yaklaşımı ve daha ayrıntılı olarak ele alınacaktır, bir katı-faz peptid sentezi (SPPS) yaklaşımı, her iki sentezlenebilir. SPPS kimyasal transformasyonlar sentetik bileşikler 19 geniş bir yelpazede hazırlamak için bir bağlayıcı yoluyla katı bir destek üzerinde gerçekleştirildiği bir işlemdir. SPPS N-terminine bir katı desteğe bağlı olan C-terminaline, bir aşamalı bir şekilde amino asitlerin birbirini takip eden eşleştirme işlemi ile montaj peptidler sağlar. N-α-amino asit yan zincirler st için bir amino asidin ilave edilmesini sağlamak için peptid uzama sırasında kullanılan reaksiyon koşullarında kararlı olan koruyucu gruplar ile maskelenmiş olması gerekirep. Son aşamada, peptid reçineden serbest bırakılır ve koruyucu gruplar yan zincir eş zamanlı olarak giderilir. Peptid sentez edilirken, her karbodiimit süzme ile peptid-katı destek matrisinden çıkarıldı ve her bir bağlantı adımının sonunda yıkanmasını edilebilir. Bu tür bir sistem ile, yüksek bir konsantrasyonda reaktifler, büyük miktarda tamamlanması için birleştirme reaksiyonları tahrik ve tüm sentez aşamalar, malzemenin 20 arasında transfer olmadan aynı kap içinde gerçekleştirilebilir.
SPPS bu reaksiyon 21 izleme tamamlanmamış reaksiyonlar, yan reaksiyonların ürünleri, saf olmayan reaktifler yanı sıra zorluklar üretimi gibi bazı sınırlamalar vardır, ancak, SPPS avantajları peptid sentezi için "altın standart" hale getirmiştir. Bu avantajlar elde doğal olmayan amino asitler, otomasyon, kolay saflaştırmaya birleştirmek için bir seçenek, en aza fiziksel kayıp, ve fazla reaktifler kullanılmasını içeriryüksek verim. SPPS zor sekuenzler 21,22, floresan modifikasyonlar 23 ve peptid kütüphanelerinin 24,25 sentezinde, son derece faydalı olduğu gösterilmiştir. SPPS ayrıca oligonükleotidler 26,27, 28,29 oligosakaritlerin ve peptid nükleik asitler 30,31 gibi diğer poli zincirli montajlar için çok yararlıdır. İlginç bir şekilde, bazı durumlarda, SPPS geleneksel çözelti 32,33 yapılır küçük moleküllerin sentezi için avantajlı olduğu gösterilmiştir. SPPS sektöründe 36-38 araştırma ve öğretim 34,35 için küçük ölçekli hem de büyük ölçekte hem de kullanılır.
Esas olarak Peptidlerin sentezi için SPSS metodoloji kullanılır iki sentez stratejileri bütiloksikarbonil (Boc) ve 9-fluorenilmetoksikarbonil (Fmoc) 'dir. SPPS'si için kişiye ilk strateji r peptidin grupları Yan-zincir koruma kaldırma ve parçalamak için güçlü asit koşulları gerektirir Boc olduğuEsin. Fmoc-temelli peptit sentez, ancak, orta dereceli bir baz koşulları kullanır ve asit-labil Boc protokolü 39 daha yumuşak bir alternatiftir. Fmoc stratejisi asit koşulları altında, peptidin reçineden ayrılması sırasında sentezin son aşamasında uzaklaştırılır ortogonal t-butil (tBu) yan zincir koruma kullanmaktadır.
Katı bir destek üzerinde peptit sentezi için genel çalışma prensibi Şekil 1 'de sunulmuştur. N-α-terminalinde bir geçici koruyucu grup ile maskelenen başlangıç amino asidi, C-terminali reçineye yüklenir. (Şekil 1, Aşama 1) gerektiğinde yan zinciri maskelemek için bir yarı kalıcı koruyucu grup, aynı zamanda kullanılır. Hedef peptidin sentezi N-α-geçici koruyucu grubun korumasının kaldırılması, tekrarlı devreler aşağıdaki korumalı amino asit (Şekil 1, Aşama 2) ve bağlantı (Şekil 1 ile N-terminine C-termininden monte edilir </str Ong>, Aşama 3). Son amino asit (Şekil 1, Aşama 4) yüklendikten sonra, peptit reçine desteğinden ayrılmaktadır ve yarı kalıcı koruyucu-gruplar (Şekil 1, Aşama 5) çıkarılır.
Katı fazlı peptid sentezi Şekil 1. genel şema. N-α-korumalı amino asit reçinesi (Aşama 1) bir bağlayıcı vasıtasıyla bir karboksil grubuna kullanılması ile tespit edilir. Istenen peptit N-a (Aşama 2) ve amino asit bağlama (Aşama 3) geçici koruma grubu (TPG) korumasının kaldırılması, tekrarlı devreler ile N-terminine C-terminaline kadar olan bir doğrusal tarzda monte edilir. Sentezi (Aşama 4) tamamladıktan sonra, yarı-kalıcı koruyucu-gruplar (SPG) peptidi yarılması (Aşama 5) boyunca kaldırılır.= "_ blank" olsun> bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Bu siklizasyon (Şekil 2A) için tek seçenek, (B) halkalanmaya sağlar çünkü bu uygun bir yoldur, ancak sınırlı – (A) baş-kuyruk siklizasyonuyla: Tüm peptit zincirinin toplanması ardından, siklizasyon çeşitli alternatifler elde edilebilir Biyolojik olarak aktif fonksiyonel gruplar ihtiva ilgi sekansından amino asitleri – ancak bu amino asitlerin kullanımı bozmadan amino asit (ya da diğer yapı taşları) ile biyolojik aktivitesi (Şekil 2B) ve (C) siklizasyonunu etkileyebilir Biyolojik olarak aktif dizisi. Bu ilgi duyulan dizilimi (Şekil 2C) değiştirmeden odaklı kütüphanelerin üretilmesine imkan verir olarak bu molekülleri tanıtılması yaygındır.
FŞEKIL 2. Alternatif peptit siklizasyon stratejilerinin C-terminal ve N-terminal arasında bir peptid bağı vasıtasıyla kuyruk siklizasyon (A) kafası.; Fonksiyonel gruplar arasında, (B) siklizasyon örneğin / glutamik asit (2) ya da yan zincir N- ya da C-ucu (3 aspartik sistein artığı (1), ya da lizin yan zincirleri arasında bir amid bağı arasında bir disülfid bağı olarak -4); (R0) öncesi ve (R7) biyoaktif dizisi sonra, örneğin ekstra amino asitler ya da amino asit türevleri ya da küçük moleküller ekleyerek (C) siklizasyon. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Mikrodalga destekli böylece organik kimyasal hızlandırıcı, sentez reaksiyonlarını ısıtmak için mikrodalga ışıması kullanan 40,41 dönüşümler. Mikrodalga kimyası absorbe çözücü reaktif yeteneği / dayanmaktadırmikrodalga enerjisi ve dönüştürmek 42 ısıtmak için. Teknoloji yaygınlaşmadan önce, önemli dezavantajları kontrol edilebilirlik ve sentez protokolleri tekrarlanabilirlik ve yeterli sıcaklık ve basınç kontrolleri 43,44 mevcut sistemlerin eksikliği de dahil olmak üzere, aşılması gerekiyordu. Mikrodalga destekli peptid sentezi ilk rapor birleştirme verimlilik ve saflıkta 45 arasında önemli bir gelişme ile birkaç kısa peptidlerin sentezlenmesi için bir mutfak mikrodalga (7-10 amino asit) kullanılarak yapıldı. Ayrıca, mikrodalga enerjisi, zincir agregasyonunu azaltmak yan tepkimeleri azaltmak rasemizasyon sınırlandırılması ve tüm zor ve uzun sekanslar 46-53 için kritik olan birleştirme oranlarını geliştirdiği gösterilmiştir.
Şu anda, bir katı destek üzerinde peptitler veya ilgili bileşiklerin sentezi için mikrodalga ışınlama kullanılması, bir organik çözücü 54 yerine su içinde (A) sentezi de dahil olmak üzere, geniş; (B) peptitlerin sentezi ileBu tür sentez, sterik olarak engellenmiş bir amino asit türevlerinin, düşük bağlanma verimliliği tipik olarak zordur glikopeptidler 55-58 veya 59-61 phosphopeptides, ortak post-translasyonel modifikasyonlar; (C) olan bir yan zincir ile bağlı olan bir azot atomu 62 veya peptoidler, bir amino asit kalıntısının C (α) değiştirilmesi ile oluşturulabilir örneğin azapeptides olarak omurgasındaki modifikasyon ile peptidler, sentezi yerine Ca'sına atomu 63,64 daha amid nitrojen; (D) siklik peptit 65-71 sentezi; birleşimsel kütüphanelerin 51,72 ve (E) sentezi. Birçok durumda, yazarlar daha yüksek verim rapor geleneksel protokole göre, mikrodalga ışıma altında sentez süresini düşürmüştür.
Rasyonel tasarımı 73-75 kullanarak, fo skafold L eishmania en reseptörden elde edildi, anti-parazitik peptidleri gelişmişr C-kinaz (EKSİKLİĞİ) aktif. LACK Layişmanya enfeksiyonu 76 erken fazında önemli bir rol oynar. LACK düşük seviyelerde ifade Parazitler EKSİKLİĞİ temel parazit sinyal süreçleri ve protein sentezinde 78 katılır bile immün tehlikeye farelere 77 parasitize başarısız. Bu nedenle, EKSİKLİĞİ önemli bir iskele protein 79 ve değerli bir ilaç hedefidir. Ancak ev sahibi memeli benzerinin RACK olarak, parazitler korunan LACK diziler üzerinde yoğunlaşırken, biz 8 amino asit peptid kültüründe Leishmania sp. Canlılığını azalma (RNGQCQRK) belirledi.
Burada, yukarıda tarif edilen LACK proteini dizisi elde omurgası siklik peptit sentezi için bir protokol açıklar. Peptidler, Fmoc / tBu protokolü ile SPSS metodolojisine göre mikro dalga ısıtma kullanılarak katı bir destek üzerinde sentezlendi. Peptidler, bir amid bağı olarak aracılığıyla bir TAT 47-57 (YGRKKRRQRRR) taşıyıcı peptide konjuge edildiSPPS'si parçası. Hücre içine yüklerin çeşitli TAT merkezli ulaşım 15 yılı aşkın bir süredir kullanılmaktadır ve hücre içi organellere içine kargo teslim 80 teyit edilmiştir. Dört farklı bağlayıcılar, süksinik ve glutarik anhidrid gibi adipik ve pimelik asit, iki ila beş karbonlu karboksilik asit bağlayıcılar oluşturmak için siklizasyonu gerçekleştirmek için kullanıldı. Siklizasyon mikrodalga enerjisi kullanılarak yapıldı ve son ayırma ve yan zincir koruma giderme adımları, mikrodalga enerjisi manuel olarak yapıldı. Otomatik bir mikro dalga sentezleyicisi kullanımı, ürün saflığı geliştirilmiş ürün verimini ve sentez süresini kısalttığını göstermiştir. Bu genel bir protokol, in vitro ve in vivo önemli moleküler mekanizmasının anlaşılması ve daha fazla insan hastalıklar için potansiyel ilaçların geliştirilmesi peptidleri kullanan diğer çalışmalar için uygulanabilir.
Tam otomatik bir sentezleyici kullanılarak mikrodalga Layişmanya parazitin LACK proteini elde edilen omurgası, siklik peptitlerin odaklanmış bir kütüphane sentezi tarif edilmektedir. Siklik peptidlerin bir odaklanmış kütüphanesi korunmuş pharmacophores ve çeşitli bağlayıcılar ile geliştirilmiştir. Örneğin glutarik anhidrit, süksinik anhidrit, adipik asit, pimelik asit, lizin, ornitin, ve diğer yapı blokları gibi çeşitli bağlayıcıların eklenmesi siklik peptidlerin konformasyonal al…
The authors have nothing to disclose.
Biz yararlı tartışmalar için Lauren Van Wassenhove, Sunhee Hwang ve Daria Mochly-Rosen teşekkür ederiz. Fon çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayınlama kararı, ya da yazının hazırlanmasında hiçbir rolü vardı NQ için çalışma Sağlık Hibe NIH RC4 TW008781-01 C-IDEA (SPARK) Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir.
REAGENTS | |||
Solid support, Rink Amide AM resin ML | CBL | BR-1330 | loading: 0.49 mmol/g |
Fmoc-Ala-OH | Advanced Chemtech | FA2100 | |
Fmoc-Arg(Pbf)-OH | Advanced Chemtech | FR2136 | |
Fmoc-Asn(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FN2152 | |
Fmoc-Asp(OBut)-OH | Advanced Chemtech | FD2192 | |
Fmoc-Cys(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FC2214 | |
Fmoc-Gln(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FQ2251 | |
Fmoc-Glu(OtBu)-OH | Advanced Chemtech | FE2237 | |
Fmoc-Gly-OH | Advanced Chemtech | FG2275 | |
Fmoc-His(Trt)-OH | Advanced Chemtech | FH2316 | |
Fmoc-Ile-OH | Advanced Chemtech | FI2326 | |
Fmoc-Leu-OH | Advanced Chemtech | FL2350 | |
Fmoc-Lys(Boc)-OH | Advanced Chemtech | FK2390 | |
Fmoc-Met-OH | Advanced Chemtech | FM2400 | |
Fmoc-Phe-OH | Advanced Chemtech | FF2425 | |
Fmoc-Pro-OH | Advanced Chemtech | FP2450 | |
Fmoc-Ser-(tBu)-OH | Advanced Chemtech | FS2476 | |
Fmoc-Thr(tBu)-OH | Advanced Chemtech | FT2518 | |
Fmoc-Trp(Boc)-OH | Advanced Chemtech | FW2527 | |
Fmoc-Tyr(But)-OH | Advanced Chemtech | FY2563 | |
Fmoc-Val-OH | Advanced Chemtech | FV2575 | |
1-Methyl-2-pyrrolidinone (NMP) | Sigma | 328634 | Caution Toxic/Highly flammable/Irritant. |
N,N-Dimethylformamide (DMF) | Alfa Aesar | 43465 | Caution Toxic |
Use high quality DMF to eliminate side reactions such as Fmoc removal as a result of the dimethylamine traces from DMF decomposition. | |||
Dichloromethane (DCM) | Sigma | D65100 | Caution Harmful |
Dibromomethane (DBM) | Sigma | D41868 | Caution Harmful |
Trifluoroacetic acid (TFA) | Sigma | T62200 | Caution Corrosive/Toxic |
Trifluoroacetic acid, HPLC grade (TFA) | Sigma | 91707 | Caution Corrosive/Toxic |
Diethylether | Sigma | 31690 | Caution Highly flammable/Harmful |
Triisopropylsilane (TIS) | Sigma | 233781 | Caution Irritant/Flammable |
Water, HPLC grade | Sigma | 270733 | |
Acetonitroile, HPLC grade (ACN) | Fisher Scientific | A998-4 | Caution Flammable/Irritant/Harmful |
N,N-Diisopropylethylamine (DIEA) | Sigma | 3440 | Caution Corrosive/Highly flammable |
Piperidine | Sigma | W290807 | Caution Toxic/Highly flammable |
Pyridine | Sigma | 270970 | Caution Highly flammable/Harmful |
Ethanol (EtOH) | Sigma | 459844 | Caution Highly flammable/Irritant |
1-Hydroxybenzotriazole hydrate (HOBt) | Sigma | 157260 | Caution Highly flammable/Irritant/Harmful |
O-(Benzotriazol-1-yl)-N,N,N′,N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) | Sigma | 12804 | Caution Irritant/Harmful |
Benzotriazole-1-ly-oxy-tris-pyrrolidinophosphonium hexafluorphosphate (PyBOP) | Advanced Chemtech | RC8602 | Caution Irritant |
Ninhydrin | Sigma | 454044 | Caution Harmful |
Phenol | Sigma | P3653 | Caution Corrosive/Toxic |
Potassium cyanide (KCN) | Sigma | 11813 | Caution Very Toxic |
Potassium hydroxide (KOH) | Sigma | 221473 | Caution Toxic |
N,N’- | Sigma | 38370 | Caution Flammable/ Toxic |
Diisopropylcarbodiimide (DIC) | |||
4-Dimethylaminopyridine (DMAP) | Sigma | 522805 | Caution Toxic/Irritant |
Glutaric anhydride | Sigma | G3806 | Caution Flammable/Irritant/Harmful |
Succinic anhydride | Sigma | 239690 | Caution Irritant/Harmful |
Adipic acid | Sigma | A26357 | Caution Toxic/Irritant |
Pimelic acid | Sigma | P45001 | Caution Toxic/Irritant |
Chloranil | Sigma | 23290 | Caution Toxic/Irritant |
Acetaldehyde | Sigma | 402788 | Caution Flammable/ Toxic |
EQUIPMENT | |||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Centrifuge | Beckman Coulter | Allegra 6R centrifuge | |
Lyophilizer | Labconco | freezone 4.5 | |
Vacuum pump | Franklin Electric | model 1101101416 with 3/4 HP | Alcatel pump with Franklin Motor |
Polypropylene cartridge 12 ml | Applied Separation | 2419 | |
Cap plug for 12 ml polypropylene cartridge | Applied Separation | 8157 | |
Polypropylene cartridge 3 ml | Applied Separation | 2413 | |
Cap plug for 3 ml polypropylene cartridge | Applied Separation | 8054 | |
Stop cocks PTFE | Applied Separation | 2406 | |
Tubes flat, 50 ml | VWR | 21008-240 | |
Extraction manifold, 20 pos, 16 x 100 mm tubes | Waters | WAT200609 | |
Shaker, BD adams™ nutator mixer | Fisher scientific | 22363152 | |
Nalgene HDPE narrow mouth IP2 bottles, 125 ml | Fisher scientific | 03-312-8 | |
Erlenmeyer flask | Fisher Scientific | FB-501, 500 ml | |
Heating block | Thermolyne | 1760 dri bath | |
Disposable borosilicate glass tubes with plain end | Fisher Scientific | 14-961-25 | |
Micropipettes and tips Finnpipette | Thermo | 20–200 and 100–1,000 μl | |
HPLC vials – micro vl pp 400 µl PK100 | VWR | 69400-124 | |
HPLC vial- Blue Snap-It Cap | VWR | 66030-600 | |
Analytical HPLC column | Peeke Scientific | U1-5C18Q-JJ | ultro 120 5 µm C18Q, 4.6 mm ID 150 mm |
Prep HPLC column, XBridge | Waters | OBD C18 5 µm column | 19 mm × 150 mm |
Mass spectrometer | Applied Biosystems | Voyager DE-RP |