Summary

بروتوكول تصوير الإشعاع الذاتي مستقبلات للالتصور المترجمة من أنجيوتنسين الثاني المستقبلات

Published: June 07, 2016
doi:

Summary

Here we present a protocol to describe the localization of angiotensin II Type 1 receptors in the rat brain by quantitative, densitometric, in vitro receptor autoradiography using an iodine-125 labeled analog of angiotensin II.

Abstract

يصف هذا البروتوكول مستقبلات أنماط ملزمة للأنجيوتنسين الثاني (آنغ الثاني) في الدماغ الفئران باستخدام جين مشع معين لمستقبلات انج الثاني لأداء مستقبلات رسم الخرائط autoradiographic.

ويتم حصاد عينات الأنسجة وتخزينها في -80 درجة مئوية. ويستخدم ناظم البرد إلى قسم coronally النسيج (الدماغ) وذوبان الجليد يشن المقاطع على الشرائح المشحونة. يتم تحضين المقاطع الأنسجة محمولة على الشرائح في 125 I-SI-آنغ الثاني لradiolabel مستقبلات انج الثاني. يتم فصل الشرائح المجاورة إلى مجموعتين: "غير محددة ملزمة" (اس بي) في وجود مستقبلات تشبع تركيز غير رديولبلد انج الثاني، أو AT 1 آنغ الثاني مستقبلات النوع الفرعي (AT 1 R) انتقائية انج الثاني مستقبلات و'توتال ملزمة "مع عدم وجود AT 1 R خصم. وهناك تركيز تشبع من AT 2 انج الثاني مستقبلات النوع الفرعي (AT 2 R) خصم (PD123319، 10 ميكرومتر) موجود أيضا في incubatiعلى عازلة للحد 125 I-SI-آنغ الثاني ملزما للR النوع الفرعي AT 1. خلال 30 دقيقة قبل الحضانة في ~ 22 درجة مئوية، وتتعرض الشرائح برنامج الفضاء الوطني إلى 10 ميكرومتر PD123319 واللوسارتان، في حين أن 'توتال ملزمة "يتعرض الشرائح إلى 10 ميكرومتر PD123319. ثم يتم تحضين الشرائح مع 125 I-SI-آنغ الثاني في وجود PD123319 ل 'مجموع ملزمة "، وPD123319 واللوسارتان لبرنامج الفضاء الوطني في المخزن الفحص، تليها عدة" يغسل "في المخزن، والماء لإزالة الملح وغير ملزمة لجين مشع على وجه التحديد. يتم تجفيفها الشرائح باستخدام ضربة المجففات، ثم تتعرض لفيلم تصوير الإشعاع الذاتي باستخدام فيلم المتخصصة والكاسيت. تم تطوير الفيلم ويتم تفحص الصور إلى جهاز كمبيوتر لقياس كثافة بصرية والكمية باستخدام نظام التصوير الملكية والبيانات. مجموعة إضافية من الشرائح وثيونين-ملطخة للمقارنات النسيجية.

وميزة استخدام مستقبلات تصوير الإشعاع الذاتي هو القدرة على تصورآنج مستقبلات الثاني في الموقع، في قسم من عينة الأنسجة، وتشريحيا تحديد منطقة الأنسجة عن طريق مقارنتها إلى قسم المراجع النسيجي المجاور.

Introduction

لا يزال مرض القلب والأوعية الدموية هي السبب الرئيسي للوفاة والعجز في الولايات المتحدة، مما تسبب في أكثر من 30٪ من الوفيات في الولايات المتحدة في عام 2011 1. إن الإحصاءات التي صدرت مؤخرا عن جمعية القلب الأمريكية تشير إلى أن أكثر من شخص واحد من كل ثلاثة لديها واحد أو أكثر من نوع من مرض القلب والأوعية الدموية. يستمر البحث القلب والأوعية الدموية لاتخاذ خطوات واسعة ضد فهم هذا المرض، ولكن عندما تبدأ الأجيال الحصول على كبار السن لا بد من مواصلة هذه الجهود. نظام رينين أنجيوتنسين (RAS) يلعب دورا مركزيا في تنظيم نظام القلب والأوعية الدموية في المقام الأول من خلال تعزيز تصلب الشرايين، والتهاب، تضيق الأوعية النظامية، وتفعيل الجهاز العصبي الودي (الشكل 1) 2-8.

وRAS هو نظام الهرموني الذي يتم تفعيلها عند الخلايا المجاورة للكبيبة الكلى تفرز الرينين في مجرى الدم استجابة لانخفاض ضغط الدم، وزيادة sympatالتحفيز hetic، أو انخفاض تدفق الصوديوم البقعة الكثيفة. الرينين يتأيض مولد الأنجيوتنسين (تصنيعه في الكبد) لتشكيل أنجيوتنسين الأول (آنغ لي). آنج لي ثم يتم استقلاب من قبل المحول للأنجيوتنسين انزيم (ACE)، وهو إنزيم خارجي على الجانب اللمعية من خلايا بطانة الأوعية الدموية، وخاصة في الرئتين والكليتين، لتشكيل أنجيوتنسين الثاني (آنج الثاني)، والببتيد المستجيب الرئيسي للRAS. آنج الثاني قادر على تفعيل نوعين مستقبل. مستقبلات نوع 1 (AT 1 R) ومستقبلات نوع 2 (AT 2 R)، على حد سواء التي تنظم نظام القلب والأوعية الدموية، والحفاظ على السوائل والكهارل التوازن وتعتبر الآن أن تؤثر على الوظيفة المعرفية والأمراض العصبية التنكسية العمليات 8،9. وتفيد التقارير ان، RAS في الدماغ محددة المحلي لتجميع مستقل انج الثاني. في الدماغ، ويتم تصنيعه في مولد الأنجيوتنسين البروتين السلائف في دبق نجمي الخلايا 10 تحويلها إلى آنغ لي من قبل مثل الرينين انزيم ربما ملزمة prorenin لمستقبلات prorenin11، وبعد ذلك تحويلها إلى آنغ الثاني بواسطة انزيم المحول للأنجيوتنسين وهو ما يعبر عنه بكثرة على سطح الخلية من الخلايا العصبية في الدماغ (12). هذا intrabrain ولدت آنغ الثاني هو ناهض للدماغ AT 1 وايه 2 المستقبلات التي يتم عزل من المنقولة عن طريق الدم انج الثاني.

في حين أن AT 1 R تلعب دورا هاما الفسيولوجية، وأفضل المعروف للآثار المرضية في جميع أنحاء الجسم، مما يؤثر في المقام الأول على نظام القلب والأوعية الدموية والكلى (الشكل 2). عندما يربط انج الثاني لAT 1 R، فإنه يتسبب تضيق الأوعية. زيادة المقاومة لتدفق الدم ورفع ضغط الدم. كما أنها تشجع على تخليق وإفراز الألدوستيرون وفاسوبريسين، مما يؤدي إلى زيادة الصوديوم واحتباس الماء. ويمكن لهذه الآثار أيضا لحث تلف في الدماغ الإقفاري وإدراكيا ويرتبط مرض باركنسون ومرض الزهايمر، وتنظيم السكرقسم التدريب والامتحانات، وكذلك يجري تحديدها مؤخرا أن تؤثر على التعلم والذاكرة 13-15. هناك حلقة مفرغة في RAS في هذا AT 1 R على الخلايا المجاورة للكبيبة في الكلى يحول دون إفراز الرينين. ومن المثير للاهتمام، وAT 2 R عموما مكافحة ينظم عمل AT 1 R، مما تسبب توسع الأوعية، ثمرة neurite، تجدد المحاور، ومكافحة انتشار الأسلحة النووية، وcerebroprotection ضمن أشياء أخرى كثيرة 16-20. كما تم تحديد AT 2 R كهدف لمكافحة ارتفاع ضغط الدم ومؤخرا، الأدوية المضادة للسرطان 21. تحديد توطين وكثافة من مستقبلات انج الثاني في الأنسجة المختلفة، وكيف تتأثر من قبل مختلف العلاجات والحالات المرضية باستخدام الكمي قياس الكثافة تصوير الإشعاع الذاتي مستقبلات سوف تساعد في الكشف عن الدور الذي لعبته RAS في أمراض معينة.

وقد استخدم مستقبلات تصوير الإشعاع الذاتي لأكثر من 30 عاما في وسيلة فعالة لتشير إلى وجود أنجيوتنسين الأولأنا مستقبلات وغيرها من مكونات RAS في الدماغ وغيرها من أنسجة الجرذان والفئران، خنزير غينيا، والكلب والإنسان في إطار مجموعة من الظروف التجريبية 22-34. أهمية تحديد مستقبلات انج الثاني داخل الدماغ هو أن واحدة يمكن تطبيقها التشريح الوظيفي لتصرفات انج الثاني في الدماغ، على سبيل المثال، فإن وجود AT 1 R في النواة مجاور للبطين من منطقة ما تحت المهاد (PVN) يشير إلى وجود وظيفة من آنغ الثاني في الدماغ لتحفيز فاسوبريسين، الأوكسيتوسين أو الإفراج القشرية الافراج عن هرمون (CRH)، أو تفعيل الجهاز العصبي الودي. وهكذا، والأدوية التي تعمل على منع AT 1 R قد يقلل من بعض هذه الآثار بوساطة PVN المرتبط مع أكثر نشاط RAS الدماغ. التقدم في العمل يشير إلى أن استخدام AT 1 الخصوم R يمكن أن تقلل ما بعد الصدمة الإجهاد اضطراب (PTSD) الإفراج -induced من CRH ويخفف من أعراض اضطراب ما بعد الصدمة (هيرت وآخرون، قدم للنشر). وPVN، تحت القبوومن المعروف جهاز (SFO)، واللوزة لتنظيم التوازن، شهية / العطش والنوم والذاكرة، وردود الفعل العاطفية، وهي المناطق المستهدفة من هذه الدراسة مظاهرة. تم فحص هذه المناطق من خلال جمع أقسام الاكليلية من الدماغ على شرائح المجهر، وعلاج المقاطع مع مثبطات محددة جنبا إلى جنب مع لجين مشع معين لمستقبلات انج الثاني. في هذه الدراسة، يتم سرد، واستخدام كافة المواد والكواشف جنبا إلى جنب مع البائعين اقترح اليود 125 إلى radiolabel على مستقبلات انج الثاني، ساركوزين آيسولوسين 8 انج الثاني (SI انج الثاني)، الذي كان آنذاك وتنقيته كما أحادية 125 I -SI انج الثاني باستخدام أساليب HPLC كما هو موضح سابقا (35). استخدام هذا جين مشع نشاط معين مرتفع يسمح التصور من مناطق منخفضة، متوسطة وعالية الكثافة مستقبلات بعد التعرض للأقسام رديولبلد إلى فيلم الأشعة السينية. من خلال معايرة الفيلم مع المعايير عجينة الدماغ التي تحتوي على كميات معروفة من اليود 125، ومبلغ محددمن آنغ الثاني مستقبلات ملزم في منطقة يمكن قياسها كميا. في الدراسات التجريبية، ومستقبلات انج الثاني ملزمة في أدمغة الاشخاص الخاضعين للتجارب يمكن مقارنة ذلك في أدمغة الأشخاص الخاضعين للمراقبة. يمكن أن تشير إلى هذا سواء يتم تغيير تصرفات انج الثاني ردا على حالة وراثية، شذوذ المظهري، دولة المرض أو العلاج من تعاطي المخدرات. ومن ثم يمكن تطبيق هذه المعرفة لتطوير علاجات لعلاج الأمراض المرتبطة ديسريغولاتيون من RAS. التقنيات البديلة التي تحدد مستقبل مواقع الربط، ولكن مع قرار خفض التشريحية، ملزمة المقايسات التي تستخدم الاستعدادات غشاء الأنسجة المستمدة من الخليط الأنسجة، والتي يتم تحضين مع لجين مشع على مجموعة من تركيزات لتقييم جين مشع تقارب ملزمة كما ثابت التفكك (K D ) وقدرة ملزمة القصوى (ماكس ب) من الأنسجة من الاهتمام.

بروتوكول صفها هنا يمكن تقسيمها إلى 5 المشارك الرئيسيmponents: إعداد أقسام الأنسجة لمستقبلات تصوير الإشعاع الذاتي. مستقبلات تصوير الإشعاع الذاتي. تعرض فيلم والتنمية؛ علم الانسجة؛ وقياس الكثافة تحليل الصور.

Protocol

وقد وافق جميع الإجراءات الحيوانية التي أجريت لهذه الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي من جامعة جنوب شرق نوفا في اتفاق مع دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، 8 الطبعة ال (الأكاديميات الوطنية الصحافة، واشنطن، DC، 2011 ). <p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl…

Representative Results

يظهر محة عامة عن المسار الأيضي للنظام رينين أنجيوتنسين في الشكل (1) والتركيز المباشر على أنواع فرعية مستقبلات الأنجيوتنسين الثاني (AT 1 R وايه 2 R) الموضح في الشكل 2 الشكل 3 يعرض نقل الدماغ الاكليلية أقسام على الشرا…

Discussion

ويحدد بروتوكول صفها التصور من "مجموع" و "غير محددة" ملزمة للجين مشع في المقاطع المتجاورة من أقسام الاكليلية من الدماغ القوارض من قبل حصادها وتخزينها في -80 درجة مئوية، ويمكن أن تكون قابلة للتطبيق بسهولة إلى كل الأنسجة التي حلت تشريحيا الأساسات التي تعرض كميا…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was supported by NIH Grant HL-113905

Materials

500ml Plastic Beakers Fisher 02-591-30
24mm x 60mm Coverslips Fisher 22-050-25
Autoradiography Imaging Film 24x30cm Carestream-Biomax MR Film 891-2560
Bacitracin (from Bacillus licheniformis) Sigma B-0125
Cardboard Sheet 8×11 Crescent Illustration Board #201 201
Coplin Jars Fisher Scientific E94
Commercial hair dryers Conair Model SD6X
Disposable Culture Tubes Fisher 14-961-26
EDTA (Disodium salt, Dihydrate) USB Corporation 15-699
Ethanol Fisher 16-100-210 
Formulary Substitute for D-19 Developer Photographers Formulary, Inc.  01-0036
Glacial Acetic Acid Fisher A38 SI-212
Histoprep / OCT Fisher SH75-125D
Film Fixer Kodak 5160320
Photo flo Kodak 1464502
Losartan Fisher/Tocris 37-985-0
MCID™ Core 7.0 MCID N/A
NaCl Fisher S271
Peel-A-Way slide grips VWR 48440-003
Permount Fisher SP15-100
PD123319 Fisher 13-615-0
Premium Charged Slides , Fine Ground Edge Premiere Microscope Slides 9308W
125I Ligands Perkin Elmer NEX- 248
125SI-Ang II  George Washington University Radioiodinated by Dr. Speth
Slide Mailers Fisher Scientific HS15986
Sodium Dibasic Phosphate Anhydrous (Na2PO4) Fisher RDCS0750500
Sodium Acetate (Anhydrous) Fisher BP333-500
Thionin  Fisher T409-25
X-Ray Casette (10 x 12) Spectronics Corporation Four Square
Xylene Fisher  X3P-1GAL

References

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart disease and stroke statistics–2015 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 131 (4), 29-322 (2015).
  2. Peart, W. S. The Renin-Angiotensin System. Pharmacol Rev. 17, 143-182 (1965).
  3. Ganten, D., et al. Angiotensin-forming enzyme in brain tissue. Science. 173 (3991), 64-65 (1971).
  4. Ganten, D., Fuxe, K., Phillips, M. I., Mann, J. F. E., Ganten, U., Ganong, W. F., Martini, L. . Frontiers in Neuroendocrinology. , 61-99 (1978).
  5. Fyhrquist, F., Metsarinne, K., Tikkanen, I. Role of angiotensin II in blood pressure regulation and in the pathophysiology of cardiovascular disorders. J Hum Hypertens. 9, 19-24 (1995).
  6. von Bohlenund und Halbach, O., Albrecht, D. The CNS renin-angiotensin system. Cell Tissue Res. 326 (2), 599-616 (2006).
  7. Speth, R., Giese, M. Update on the renin-angiotensin system. J Pharmacol Clin Toxicol. 1 (1), 1004 (2013).
  8. de Kloet, A. D., Liu, M., Rodriguez, V., Krause, E. G., Sumners, C. Role of neurons and glia in the CNS actions of the renin-angiotensin system in cardiovascular control. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. , (2015).
  9. Saavedra, J. M., Sanchez-Lemus, E., Benicky, J. Blockade of brain angiotensin II AT1 receptors ameliorates stress, anxiety, brain inflammation and ischemia: Therapeutic implications. Psychoneuroendocrinology. 36 (1), 1-18 (2011).
  10. Stornetta, R. L., Hawelu-Johnson, C. L., Guyenet, P. G., Lynch, K. R. Astrocytes synthesize angiotensinogen in brain. Science. 242, 1444-1446 (1988).
  11. Li, W., Peng, H., Seth, D. M., Feng, Y. The Prorenin and (Pro)renin Receptor: New Players in the Brain Renin-Angiotensin System. Int.J.Hypertens. 2012, 290635 (2012).
  12. Strittmatter, S. M., Kapiloff, M. S., Snyder, S. H. [3H]captopril binding to membrane associated angiotensin converting enzyme. Biochem. Biophys. Res. Commun. 112, 1027-1033 (1983).
  13. Bild, W., Hritcu, L., Stefanescu, C., Ciobica, A. Inhibition of central angiotensin II enhances memory function and reduces oxidative stress status in rat hippocampus. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 43, 79-88 (2013).
  14. Wright, J. W., Harding, J. W. Brain renin-angiotensin-A new look at an old system. Progress in Neurobiology. 95 (1), 49-67 (2011).
  15. Tashev, R., Stefanova, M. Hippocampal asymmetry in angiotensin II modulatory effects on learning and memory in rats. Acta Neurobiol Exp (Wars). 75 (1), 48-59 (2015).
  16. Reudelhuber, T. L. The continuing saga of the AT2 receptor: a case of the good, the bad, and the innocuous. Hypertension. 46 (6), 1261-1262 (2005).
  17. Carey, R. M. Cardiovascular and renal regulation by the angiotensin type 2 receptor: the AT2 receptor comes of age. Hypertension. 45 (5), 840-844 (2005).
  18. Valero-Esquitino, V., et al. Direct angiotensin type 2 receptor (AT2R) stimulation attenuates T-cell and microglia activation and prevents demyelination in experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. Clin Sci (Lond). 128 (2), 95-109 (2015).
  19. Chen, J., et al. Neuronal over-expression of ACE2 protects brain from ischemia-induced damage. Neuropharmacology. 79, 550-558 (2014).
  20. Kalra, J., Prakash, A., Kumar, P., Majeed, A. B. Cerebroprotective effects of RAS inhibitors: Beyond their cardio-renal actions. J Renin Angiotensin Aldosterone Syst. , (2015).
  21. Zhao, Y., et al. Activation of intracellular angiotensin AT(2) receptors induces rapid cell death in human uterine leiomyosarcoma cells. Clin Sci (Lond). 128 (9), 567-578 (2015).
  22. Gehlert, D. R., Speth, R. C., Wamsley, J. K. Quantitative autoradiography of angiotensin II receptors in the SHR brain. Peptides. 7 (6), 1021-1027 (1986).
  23. Mendelsohn, F. A., Quirion, R., Saavedra, J. M., Aguilera, G., Catt, K. J. Autoradiographic localization of angiotensin II receptors in rat brain. Proc Natl Acad Sci U S A. 81 (5), 1575-1579 (1984).
  24. Gehlert, D. R., Speth, R. C., Wamsley, J. K. Autoradiographic localization of angiotensin II receptors in the rat brain and kidney. Eur J Pharmacol. 98 (1), 145-146 (1984).
  25. Speth, R. C., et al. Angiotensin II receptor localization in the canine CNS. Brain Res. 326 (1), 137-143 (1985).
  26. Santos, R. A. S., et al. Angiotensin-(1-7) is an endogenous ligand for the G protein-coupled receptor Mas. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (14), 8258-8263 (2003).
  27. Karamyan, V. T., Gembardt, F., Rabey, F. M., Walther, T., Speth, R. C. Characterization of the brain-specific non-AT(1), non-AT(2) angiotensin binding site in the mouse. Eur J Pharmacol. 590 (1-3), 87-92 (2008).
  28. Karamyan, V. T., Speth, R. C. Distribution of the non-AT1, non-AT2 angiotensin-binding site in the rat brain: preliminary characterization. Neuroendocrinology. 88 (4), 256-265 (2008).
  29. Karamyan, V. T., Stockmeier, C. A., Speth, R. C. Human brain contains a novel non-AT1, non-AT2 binding site for active angiotensin peptides. Life Sci. 83 (11-12), 421-425 (2008).
  30. Miller-Wing, A. V., et al. Central angiotensin IV binding sites: distribution and specificity in guinea pig brain. J Pharmacol Exp Ther. 266 (3), 1718-1726 (1993).
  31. Castren, E., Kurihara, M., Saavedra, J. M. Autoradiographic localization and characterization of angiotensin II binding sites in the spleen of rats and mice. Peptides. 8 (4), 737-742 (1987).
  32. MacGregor, D. P., et al. Angiotensin II receptor subtypes in the human central nervous system. Brain Res. 675 (1-2), 231-240 (1995).
  33. Plunkett, L. M., Correa, F. M. A., Saavedra, J. M. Quantitative autoradiographic determination of angiotensin-converting enzyme binding in rat pituitary and adrenal glands with 125I-351/A, a specific inhibitor. Regul Pept. 12, 263-272 (1985).
  34. Armando, I., et al. Increased angiotensin II AT(1) receptor expression in paraventricular nucleus and hypothalamic-pituitary-adrenal axis stimulation in AT(2) receptor gene disrupted mice. Neuroendocrinology. 76 (3), 137-147 (2002).
  35. Speth, R. C., Harding, J. W., Wang, D. H. . Angiotensin Protocols Vol. 51 Methods in Molecular Medicine. , 275-295 (2001).
  36. Widdop, R. E., Jones, E. S., Hannan, R. E., Gaspari, T. A. Angiotensin AT2 receptors: cardiovascular hope or hype. Br J Pharmacol. 140 (5), 809-824 (2003).
  37. Michel, M. C., Wieland, T., Tsujimoto, G. How reliable are G-protein-coupled receptor antibodies. Naunyn Schmiedebergs Arch.Pharmacol. 379 (4), 385-388 (2009).
  38. Jensen, B. C., Swigart, P. M., Simpson, P. C. Ten commercial antibodies for alpha-1-adrenergic receptor subtypes are nonspecific. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 379 (4), 409-412 (2009).
  39. Jositsch, G., et al. Suitability of muscarinic acetylcholine receptor antibodies for immunohistochemistry evaluated on tissue sections of receptor gene-deficient mice. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 379 (4), 389-395 (2009).
  40. Hamdani, N., van der Velden, J. Lack of specificity of antibodies directed against human beta-adrenergic receptors. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 379 (4), 403-407 (2009).
  41. Bodei, S., Arrighi, N., Spano, P., Sigala, S. Should we be cautious on the use of commercially available antibodies to dopamine receptors. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 379 (4), 413-415 (2009).
  42. Lu, X., Bartfai, T. Analyzing the validity of GalR1 and GalR2 antibodies using knockout mice. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 379 (4), 417-420 (2009).
  43. Everaerts, W., et al. Where is TRPV1 expressed in the bladder, do we see the real channel. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 379 (4), 421-425 (2009).
  44. Adams, J. M., McCarthy, J. J., Stocker, S. D. Excess dietary salt alters angiotensinergic regulation of neurons in the rostral ventrolateral medulla. Hypertension. 52 (5), 932-937 (2008).
  45. Herrera, M., Sparks, M. A., Alfonso-Pecchio, A. R., Harrison-Bernard, L. M., Coffman, T. M. Lack of specificity of commercial antibodies leads to misidentification of Angiotensin type 1 receptor protein. Hypertension. 61 (1), 253-258 (2013).
  46. Rateri, D. L., et al. Endothelial Cell-Specific Deficiency of Ang II Type 1a Receptors Attenuates Ang II-Induced Ascending Aortic Aneurysms in LDL Receptor(-/-) Mice. Circ Res. 108 (5), 574-583 (2011).
  47. Benicky, J., Hafko, R., Sanchez-Lemus, E., Aguilera, G., Saavedra, J. M. Six Commercially Available Angiotensin II AT(1) Receptor Antibodies are Non-specific. Cell Mol Neurobiol. 32 (8), 1353-1365 (2012).
  48. Elliott, K. J., Kimura, K., Eguchi, S. Lack of specificity of commercial antibodies leads to misidentification of angiotensin type-1 receptor protein. Hypertension. 61 (4), 31 (2013).
  49. Hafko, R., et al. Commercially available angiotensin II At(2) receptor antibodies are nonspecific. PLoS One. 8 (7), 69234 (2013).
  50. Gonzalez, A. D., et al. Distribution of angiotensin type 1a receptor-containing cells in the brains of bacterial artificial chromosome transgenic mice. 신경과학. 226, 489-509 (2012).
check_url/kr/53866?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Linares, A., Couling, L. E., Carrera, E. J., Speth, R. C. Receptor Autoradiography Protocol for the Localized Visualization of Angiotensin II Receptors. J. Vis. Exp. (112), e53866, doi:10.3791/53866 (2016).

View Video