Un modèle de souris orthotopique du sein spontané Cancer Métastase
Summary
Un modèle de tumeur primaire du cancer du sein orthotopique et l'ablation chirurgicale de la tumeur primitive pour prolonger la vie de la souris pour générer des métastases spontanées sont décrites. La croissance et la progression tumorale sont surveillés et quantifiés par imagerie par fluorescence luciférase.
Abstract
Les métastases sont la principale cause de mortalité des patients atteints de cancer du sein. Le mécanisme sous-jacent de métastases de cellules cancéreuses, y compris les métastases du cancer du sein, est largement inconnue et l'accent est mis sur la recherche sur le cancer. modèles métastase de souris spontanés de cancer du sein Divers ont été établis. Nous rapportons ici une procédure simplifiée pour établir orthotopique transplanté le cancer du sein tumeur primaire et résultante métastase spontanée qui imitent les métastases du cancer du sein humain. Combiné avec la visualisation d'une tumeur en temps réel de bioluminescence, ce modèle de souris permet la croissance tumorale et la cinétique de progression à surveiller et quantifiés. Dans ce modèle, une dose faible (1 x 10 4 cellules) des cellules de cancer du sein 4T1-Luc a été injecté dans des souris BALB / c mammaire de souris coussinet adipeux à l' aide d' une seringue à tuberculine. Les souris ont été injectées avec de la luciférine et imagés à divers points de temps en utilisant un système d'imagerie bioluminescente. Lorsque les tumeurs primaires ont atteint la limite de taille que dans le protocole IACUC approuvé (approximately 30 jours), les souris ont été anesthésiées sous flux constant de 2% d'isoflurane et de l'oxygène. La zone de la tumeur a été stérilisé avec 70% d'éthanol. La peau de souris autour de la tumeur a été excisée pour exposer la tumeur qui a été retirée avec une paire de ciseaux stériles. Ablation de la tumeur primaire prolonge la survie des souris 4T-1 porteur d'une tumeur pendant un mois. Les souris ont ensuite été imagées de manière répétée pour une tumeur métastatique se propager à des organes distants. Les agents thérapeutiques peuvent être administrés pour supprimer les métastases tumorales à ce stade. Ce modèle est simple et pourtant sensible à quantifier la croissance des cellules du cancer du sein dans le site primaire et la progression cinétique aux organes distants, et est donc un excellent modèle pour l' étude de la croissance du cancer du sein et de la progression, et pour tester des agents anti-métastase thérapeutiques et immuno – thérapeutiques in vivo , .
Introduction
Selon l'American Cancer Society, le cancer du sein est la forme la plus fréquemment diagnostiqué de cancer chez les femmes aux États-Unis. La détection précoce en combinaison avec des thérapies ciblées récemment mis au point a permis de réduire de manière significative le taux de mortalité du cancer du sein au cours des deux dernières décennies. Cependant, le cancer du sein est toujours la deuxième cause de décès liés au cancer chez les femmes aux États-Unis 1. La majorité des décès chez les patients atteints de cancer du sein sont dus à la métastase des cellules tumorales. Malheureusement, la plupart des cancers du sein est invasive et souvent métastase du ganglion lymphatique et ensuite à des organes éloignés, y compris les os, les poumons, le foie et le cerveau. 1,2 Il n'y a actuellement aucune thérapie efficace pour le cancer du sein métastatique. Par conséquent, le développement des chimiothérapeutiques et immunothérapeutiques agents pour supprimer le cancer du sein métastatique est d'une grande importance.
modèles métastase spontanée de souris de cancer du sein ont Divers been développé pour étudier les mécanismes moléculaires sous – jacents tumeur du sein progression cellulaire et la métastase et à être utilisés comme modèles pour le développement d'agents thérapeutiques. 1,3-5 Cependant, la plupart de ces modèles de souris sont des modèles de tumeurs génétiques, tandis que d' excellents modèles pour mécaniste des études, ne sont pas appropriés pour tester des agents thérapeutiques depuis la métastase prend des mois à se développer dans ces modèles génétiques, ce qui nécessite coûteuse l' administration à long terme des agents anti-cancéreux. progression de la tumeur 6,7 Monitoring chez les souris en direct est également techniquement difficile. En revanche, un modèle de métastases du cancer du sein greffé présente les avantages de la progression tumorale court terme et de faciliter le suivi de la progression tumorale chez des souris vivantes. Le modèle de souris 4T1 métastase spontanée du cancer du sein orthotopique est un modèle de tumeur tel transplanté. 8 Dans ce modèle, des cellules tumorales du sein sont transplantés dans le coussinet adipeux mammaire à établir des nodules de tumeur primaire. La tumeur primairepeuvent ensuite être enlevés chirurgicalement comme chez les patients atteints de cancer du sein humain. Les cellules tumorales 4T1 sont hautement invasives. 8,9, 3,10 Presque toutes les souris porteuses de tumeurs développent des métastases dans les 30 jours après la greffe de la tumeur dans le coussinet adipeux mammaire. Cependant, les tumeurs 4T1 poussent agressivement dans les sites primaires et les tailles des tumeurs dépassent souvent les limites qui sont autorisés dans la plupart des protocoles d'animaux. A ce stade, les métastases sont souvent micrométastases. Par conséquent, il est essentiel d'éliminer les tumeurs primaires pour permettre la progression de la métastase pour tester des agents thérapeutiques. Nous rapportons ici la mise en place d'une procédure simple et pourtant sensible de la transplantation de la tumeur primaire, l' ablation chirurgicale de la tumeur primitive et bioluminescence quantification basée sur l' imagerie-de la croissance de la tumeur 4T1 et la progression in vivo.
Protocol
Representative Results
Discussion
De nombreux types de modèles de souris transgéniques de métastases du cancer du sein ont été développés. 1 Ces souris transgéniques ont l' incidence tumorale élevée allant de 60 à 100%. Cependant, l'incidence des métastases de ces souris transgéniques est bien inférieure à l'incidence des tumeurs (14 à 100% de). Les cellules tumorales forment des métastases LN et les poumons, dans la plupart de ces modèles de souris transgéniques de métastases du cancer du sein. La latence des …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).
Materials
| Ami-X Imaging System | Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ | ||
| IsoTec SurgiVet | Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA | ||
| AutoClip Physicians Kit | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427638 | |
| 9 MM AutoClip Applier | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427630 | |
| 9 MM AutoClip Remover | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427637 | |
| 9 MM AutoClip Wound Clip | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427631 | |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher | 8940 | |
| Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher | 8875 | |
| 1/2 CC 27G1/2 tuberculin syringe | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 | |
| RPMI 1640 medium | Mediatech Inc | 10-040-CV | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| 70% Ethanol | Ultrapure-usa.com | ||
| Trypsin-EDTA | Mediatech Inc | 25-040-CI |
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