Um modelo de camundongo ortotópico de câncer de mama espontânea metástase
Summary
Um modelo de tumor primário do cancro da mama ortotópico e remoção cirúrgica do tumor primário para prolongar a vida do rato para gerar metástase espontânea são descritos. O crescimento do tumor e progressão são monitorados e quantificado por imagens de fluorescência da luciferase.
Abstract
A metástase é a principal causa de mortalidade de pacientes de cancro da mama. O mecanismo subjacente a metástase de células de câncer, incluindo metástase do câncer de mama, é em grande parte desconhecido e é um foco na pesquisa do câncer. Vários modelos de cancro da mama espontâneos rato metástase foram estabelecidas. Aqui, nós relatamos um procedimento simplificado para estabelecer tumor primário do cancro da mama transplantado ortotópico e resultante metástase espontânea que imitam a metástase do câncer de mama humano. Combinado com a imagiologia de tumores bioluminescência vivo, neste modelo de ratinho permite o crescimento do tumor e cinética de progressão para ser monitorizada e quantificada. Neste modelo, uma dose baixa (1 x 10 4 células) de células de cancro da mama 4T1-Luc foi injectada em ratinhos BALB / C mamário de ratinho almofada de gordura utilizando uma seringa de tuberculina. Os ratinhos foram injectados com luciferina e fotografada em vários pontos de tempo, utilizando um sistema de imagiologia bioluminescente. Quando os tumores primários cresceu para o limite de tamanho como no protocolo IACUC-aprovado (aproxoximately 30 dias), os ratinhos foram anestesiados sob um fluxo constante de 2% de isoflurano e oxigénio. A área do tumor foi esterilizada com etanol a 70%. A pele do murganho em torno do tumor foi excisada para expor o tumor, que foi removido com um par de tesouras estéreis. A remoção do tumor primário estende-se a sobrevivência dos ratos portadores de tumor 4T-1, durante um mês. Os ratinhos foram em seguida repetidamente fotografada para propagação de tumores metastáticos para órgãos distantes. Os agentes terapêuticos podem ser administrados para suprimir a metástase do tumor neste ponto. Este modelo é simples e ainda sensível em quantificar o crescimento de células de câncer de mama no sítio primário e cinética progressão para órgãos distantes, e, portanto, é um excelente modelo para o estudo do crescimento e progressão do cancro da mama, e para testar agentes anti-metástase terapêuticos e imunoterápicos in vivo .
Introduction
De acordo com a American Cancer Society, o cancro da mama é a forma mais frequentemente diagnosticado de câncer em mulheres nos Estados Unidos. A detecção precoce em combinação com terapias específicas recentemente desenvolvidos reduziu significativamente a mortalidade do cancro da mama nas últimas duas décadas. No entanto, o câncer de mama ainda é a segunda principal causa de morte relacionada ao câncer em mulheres nos Estados Unidos 1. A maioria das mortes de pacientes com câncer de mama são devido a metástase das células tumorais. Infelizmente, a maioria do cancro da mama invasivo e é frequentemente metastiza para o nódulo linfático e, subsequentemente, para órgãos distantes, incluindo osso, pulmão, fígado e cérebro. 1,2 Não existe actualmente nenhuma terapia eficaz para o cancro da mama metastático. Portanto, o desenvolvimento de agentes quimioterapêuticos e imunoterapêuticos para suprimir o cancro da mama metastático é de grande importância.
Vários cancro da mama mouse modelos de metástase espontânea têm been desenvolvidas para estudar os mecanismos moleculares subjacentes a progressão de células de tumor da mama e de metástases e para ser usados como modelos para o desenvolvimento de agentes terapêuticos. 1,3-5 No entanto, a maioria destes modelos de murganho são modelos de tumor genéticas que, ao mesmo tempo excelentes modelos para mecanicista estudos, não são adequados para testar agentes terapêuticos uma vez que a metástase leva meses a desenvolver-se estes modelos genéticos, exigindo, assim, a administração dispendiosos de longo prazo dos agentes anti-cancro. progressão tumoral 6,7 Monitorização em ratinhos vivo também é tecnicamente exigente. Em contraste, um modelo de metástases de cancro da mama transplantado tem as vantagens de progressão tumoral termo curto e fácil de seguimento da progressão do tumor em murganhos vivos. O modelo de ratinho 4T1 metástase espontânea ortotópico de cancro da mama é um modelo de tumor transplantado tal. 8 Neste modelo, as células de tumor da mama são transplantadas para a almofada de gordura mamaria de estabelecer nódulos de tumor primário. O tumor primáriopode então ser removido cirurgicamente como em pacientes com cancro da mama humano. Células de tumor 4T1 são altamente invasivo. 8,9, 3,10 Quase todos os ratinhos desenvolvem metástases em 30 dias após o transplante do tumor para dentro a almofada de gordura mamária portador de tumor. No entanto, os tumores 4T1 crescer agressivamente nos sítios primários e muitas vezes os tamanhos dos tumores exceder os limites que são permitidos na maioria dos protocolos de origem animal. Nesta fase, as metástases são muitas vezes micrometástases. Portanto, é essencial para remover tumores primários para permitir o progresso metástase para testar agentes terapêuticos. Aqui, nós relatamos o estabelecimento de um procedimento simples e ainda sensível do transplante do tumor primário, a remoção cirúrgica do tumor primário e bioluminescência quantificação baseadas em imagiologia do crescimento do tumor 4T1 e progressão in vivo.
Protocol
Representative Results
Discussion
Muitos tipos de modelos de ratinhos transgénicos de metástases de cancro da mama têm sido desenvolvidos. 1 Estes ratinhos transgénicos têm uma incidência elevada de tumor variando entre 60 a 100%. No entanto, a incidência de metástases destes ratinhos transgénicos é muito menor do que a incidência de tumores (14 – 100%). As células de tumor metastizar para LN e pulmões na maioria destes modelos de ratinho transgénicos de metástases de cancro da mama. A latência metástase varia de modelo para …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).
Materials
| Ami-X Imaging System | Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ | ||
| IsoTec SurgiVet | Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA | ||
| AutoClip Physicians Kit | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427638 | |
| 9 MM AutoClip Applier | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427630 | |
| 9 MM AutoClip Remover | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427637 | |
| 9 MM AutoClip Wound Clip | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427631 | |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher | 8940 | |
| Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher | 8875 | |
| 1/2 CC 27G1/2 tuberculin syringe | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 | |
| RPMI 1640 medium | Mediatech Inc | 10-040-CV | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| 70% Ethanol | Ultrapure-usa.com | ||
| Trypsin-EDTA | Mediatech Inc | 25-040-CI |
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