Rotifers are microscopic zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of survival time in Brachionus rotifers. Synchronization of culture conditions over several generations is of particular importance because maternal condition affects life history of offspring.
Rotifers are microscopic cosmopolitan zooplankton used as models in ecotoxicological and aging studies due to their several advantages such as short lifespan, ease of culture, and parthenogenesis that enables clonal culture. However, caution is required when measuring their survival time as it is affected by maternal age and maternal feeding conditions. Here we provide a protocol for powerful and reproducible measurement of the survival time in Brachionus rotifers following a careful synchronization of culture conditions over several generations. Empirically, poor synchronization results in early mortality and a gradual decrease in survival rate, thus resulting in weak statistical power. Indeed, under such conditions, calorie restriction (CR) failed to significantly extend the lifespan of B. plicatilis although CR-induced longevity has been demonstrated with well-synchronized rotifer samples in past and present studies. This protocol is probably useful for other invertebrate models, including the fruitfly Drosophila melanogaster and the nematode Caenorhabditis elegans, because maternal age effects have also been reported in these species.
Коловратки являются микроскопическими космополитичный зоопланктона (<1 мм) , которые составляют филюмом Rotifera 1. Они имеют простой план тело состоит из примерно 1000 соматических клеток, а также характерным реснитчатого аппарата колесного типа называют коронным, который используется для передвижения и кормления. Большинство коловраток принадлежат к классам Monogononta или Bdelloidea, которые содержат около 1600 и 500 видов, соответственно 2. Monogonont коловратки обычно имеют как половое и бесполое репродуктивные фазы (циклический партеногенез), в то время как bdelloid коловратки размножаются обязательным партеногенеза 3. Таким образом, можно получить генетически идентичных особей коловраток, что обеспечивает высокую воспроизводимость в экспериментах. Кроме того, у них есть ряд других преимуществ в качестве модельных организмов, таких как короткий срок жизни, простота культуры, доступность геномных и транскриптомных последовательности данных 4-7 и уникальной филогенетического позиции , удаленные отrthropods и нематоды 8. Rotifers поэтому перспективные модели беспозвоночными в экологические, токсикологические и старения исследований 9-12.
Время выживания под воздействием нагрузки на окружающую среду или химических веществ является часто измеряемым параметром в этих областях исследований 13-19. Тем не менее, необходимо соблюдать осторожность при измерении времени выживания коловраток, поскольку он чувствителен к условиям окружающей среды их матерей. А именно, в monogonont коловраток Brachionus manjavacas, женское потомство от матерей в возрасте имеют более короткую продолжительность жизни , чем те , от молодых матерей; Однако, ограничение материнской калорий (CR) частично компенсирует вредные эффекты передовой возраст матери 20. В B. plicatilis, материнская CR обеспечивает долговечность потомство, долгое время выживания в условиях голода , и высокой окислительной устойчивость к стрессу , связанный с повышенной экспрессии антиоксидантных ферментов 21,22. Возрастной эффект материнскойтакже наблюдается в bdelloid коловраток 23. Таким образом, условия эксперимента коловратках должны быть тщательно синхронизирована в течение нескольких поколений, прежде чем измерения времени выживания.
Здесь мы приводим протокол для измерения времени выживания в Brachionus коловраток следующей синхронизации условий культивирования в течение нескольких поколений. Периодическое голодание (КРП), изменение CR , где коловратки подают периодически, наносили выявить эффект синхронизации из – за известных эффектов IF на продолжительность жизни 22,24.
Текущий протокол описывает метод измерения времени выживания в Brachionus коловраток. Важным шагом является синхронизация условий коловраток в течение нескольких поколений. Когда экспериментальные коловратки хорошо синхронизированы, типичный тип кривой выживаемости я наблюдается …
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарны Джорджу Jarvis, Марта Бок и Бетт Hecox-Lea, морской биологической лаборатории, за помощь в съемках фильма.
Sodium chloride | Wako | 190-13921 | |
Magnesium chloride | Wako | 136-03995 | |
Magnesium sulfate | Wako | 131-00427 | |
Potassium chloride | Wako | 168-22111 | |
Calcium chloride | Wako | 035-00455 | |
Sodium bicarbonate | Wako | 199-05985 | |
Sodium bromide | Wako | 190-01515 | |
Membrane filter (0.45 µm pore size) | Millipore | HAWP04700 | |
Culture plate, 6-well, non-treated | Thomas Scientific | 6902D01 | Flat bottom |
Culture plate, 48-well, non-treated | Thomas Scientific | 6902D07 | Flat bottom |
Tetraselmis, Living | Carolina Biological Supply Company | 152610 | |
PRISM 6 | GraphPad Software | Version 6.0d |