ग्रुप 'बी' के एक murine मॉडल<em> स्ट्रेप्टोकोकस</em> योनि औपनिवेशीकरण
Summary
इस प्रोटोकॉल के उद्देश्य से एक murine मॉडल में मानव समूह बी स्ट्रेप्टोकोकस (जीबीएस) योनि उपनिवेशवाद की नकल करने के लिए है। इस विधि मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और जीबीएस योनि हठ के लिए योगदान दे बैक्टीरियल कारकों की जांच करने के लिए, साथ ही चिकित्सीय रणनीतियों का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
Abstract
वयस्कों के 30% – स्ट्रेप्टोकोकस agalactiae (ग्रुप बी स्ट्रेप्टोकोकस, जीबीएस), एक ग्राम पॉजिटिव, मानव जठरांत्र संबंधी मार्ग और 10 के योनि मार्ग की स्पर्शोन्मुख उपनिवेशवादी है। प्रतिरक्षा-समझौता व्यक्तियों, नवजात शिशुओं सहित, गर्भवती महिलाओं, और बुजुर्गों में, जीबीएस के कारण पूति, गठिया, निमोनिया, और दिमागी बुखार एक आक्रामक रोगज़नक़ के लिए स्विच कर सकते हैं। क्योंकि जीबीएस नवजात शिशुओं के एक अग्रणी जीवाणु रोगज़नक़ है, वर्तमान प्रोफिलैक्सिस जीबीएस योनि उपनिवेशवाद और जीबीएस पॉजिटिव माताओं के बाद peripartum एंटीबायोटिक उपचार के लिए देर से गर्भ स्क्रीनिंग के शामिल है। भारी जीबीएस योनि बोझ दोनों नवजात रोग और उपनिवेशवाद के लिए एक जोखिम कारक है। दुर्भाग्य से, थोड़ा मेजबान और बैक्टीरियल कारक है कि को बढ़ावा देने या जीबीएस योनि उपनिवेश की स्थापना की अनुमति के बारे में जाना जाता है। इस प्रोटोकॉल एक भी β-एस्ट्राडियोल पूर्व उपचार और दैनिक नमूने का उपयोग बैक्टीरियल लोआ निर्धारित करने के लिए लगातार जीबीएस योनि उपनिवेशवाद की स्थापना के लिए एक तकनीक का वर्णनघ। यह अधिक जानकारी के तरीकों अतिरिक्त उपचारों या ब्याज की अभिकर्मकों प्रशासन के लिए और योनि पानी से धोना तरल पदार्थ और प्रजनन पथ ऊतकों एकत्र करने के लिए। इस माउस मॉडल योनि वातावरण में जीबीएस मेजबान बातचीत, जो गर्भावस्था के दौरान मातृ योनि उपनिवेशवाद को नियंत्रित करने और कमजोर नवजात शिशु को संचरण को रोकने के लिए संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों को बढ़ावा मिलेगा की समझ को आगे होगा। यह भी महिला योनि मार्ग में सामान्य जीवाणु मेजबान बातचीत के बारे में हमारी समझ को बढ़ाने के लिए ब्याज की हो जाएगा।
Introduction
स्ट्रेप्टोकोकस agalactiae, समूह बी स्ट्रेप्टोकोकस (जीबीएस), एक समझाया, ग्राम पॉजिटिव जीवाणु जो अक्सर पेट और स्वस्थ वयस्कों की genitourinary पथ से अलग है। 1970 के दशक में जीबीएस संक्रामक नवजात मृत्यु दर का प्रमुख एजेंट के रूप में उभरा है, प्रतिवर्ष नवजात रोग के 7,000 से अधिक मामलों के साथ 1। पहले ही शुरू होने जीबीएस रोग (ईओडी) के पहले घंटे या जीवन के दिनों में होता है, निमोनिया या श्वसन संकट के रूप में उठता है, और अक्सर, पूति में विकसित करता है, जबकि देर शुरुआत रोग (लोद) कई महीनों के बाद ensues और bacteremia, जो अक्सर के साथ प्रस्तुत करता है 2 मैनिंजाइटिस के लिए अग्रिम। 2002 के रूप में, रोग नियंत्रण और रोकथाम के लिए केंद्र जीबीएस पॉजिटिव माताओं 1 करने के लिए देर से गर्भ और intrapartum एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस (आईएपी) में जीबीएस योनि उपनिवेश की स्थापना के लिए सार्वभौमिक स्क्रीनिंग की सिफारिश की। संयुक्त राज्य अमेरिका में लगभग 1000 मामलों में पहले ही शुरू होने रोग की कमी के सालाना आईएपी के कारण के बावजूद,जीबीएस पहले ही शुरू होने नवजात पूति का प्रमुख कारण बनी हुई है, और देर शुरुआत घटना अप्रभावित 1 रहता है। गर्भाशय में चाहे, प्रसव के दौरान, या यहां तक कि देर शुरुआत मामलों में, जीबीएस के लिए नवजात जोखिम दिमागी बुखार, विनियमित अत्यधिक रक्त की क्रासिंग के मामले में मेजबान वातावरण और बाधाओं, प्रतिरक्षा चोरी के एक नंबर के माध्यम से अस्तित्व, आड़ा आवश्यकता है, और, मस्तिष्क बाधा 2। नवजात शिशु के भीतर इन विषमय बातचीत के ऊपर मातृ योनि पथ का प्रारंभिक बसाना है। मातृ जीबीएस योनि बसाना दरों 12.7% 3,4 की अनुमानित औसत दर के साथ, विकसित और विकासशील देशों में 8-18% से लेकर। गर्भावस्था के दौरान योनि मार्ग की जीबीएस उपनिवेशन, लगातार रुक-रुक कर, या अलग-अलग महिलाओं 5 के बीच में प्रकृति में क्षणिक हो सकता है। दिलचस्प है, एक मातृ उम्र> 36 साल से लगातार बसाना 6 के साथ जुड़ा हुआ है। जीबीएस योनि उपनिवेश की स्थापना के लिए कई जैविक और सामाजिक-आर्थिक जोखिम कारकोंपहचान की गई है। जैविक कारकों जठरांत्र जीबीएस उपनिवेशवाद और पेट के भीतर लैक्टोबैसिलस के अभाव में शामिल हैं। हालांकि, जातीयता, मोटापा, स्वच्छता, और यौन गतिविधि भी जीबीएस योनि गाड़ी 7 के साथ संबद्ध किया गया है।
हालांकि संक्रमण के कारण नवजात के लिए कुख्यात, जीबीएस भी मातृ संक्रमण के दोनों peripartum और प्रसवोत्तर की एक किस्म का कारण बनता है। जीबीएस गाड़ी योनिशोथ 8 के साथ पेश महिलाओं में बढ़ जाती है और कुछ मामलों में, यहां तक कि रोग इकाई 9 हो सकता है। इसके अतिरिक्त, गर्भावस्था के दौरान प्रजनन पथ की जीबीएस उदगम इंट्रा-एमनियोटिक संक्रमण या chorioamnionitis 10 में परिणाम हो सकता है। इसके अलावा, गर्भधारण के 3.5% तक में, जीबीएस मूत्राशय के लिए प्रसार एक मूत्र पथ के संक्रमण या स्पर्शोन्मुख बेक्टेरियूरिया 11 पैदा करने के लिए। गर्भावस्था के दौरान जीबीएस बेक्टेरियूरिया intrapartum बुखार, chorioamnionitis, अपरिपक्व प्रसव, और prematur का एक बढ़ा जोखिम के साथ जुड़ेझिल्ली 12 की ई टूटना। साथ में ले ली, योनि पथ के भीतर जीबीएस की उपस्थिति कई मेजबान ऊतकों के संक्रमण से जुड़ा हुआ है, और क्षमता इस जगह से जीबीएस समाप्त करने के लिए दोनों मातृ एवं नवजात के स्वास्थ्य के लिए आवश्यक है।
अभी हाल तक, काम cervicovaginal पथ के साथ जीबीएस बातचीत की जांच के बहुमत में इन विट्रो सेल मॉडल 13-15 तक ही सीमित था। ये इन विट्रो प्रयोगों बैक्टीरियल कारक है कि पालन के लिए महत्वपूर्ण हैं, सतह प्रोटीन सहित पता चला है इस तरह के एक पिली और सेरीन अमीर दोहराता 17,18, साथ ही दो घटक नियामक प्रणाली 15,19 और योनि उपकला के वैश्विक ट्रांसक्रिप्शनल प्रतिक्रिया जीबीएस 19। हालांकि, पूरी तरह से योनि पथ के भीतर मेजबान सूक्ष्म जीव बातचीत स्पष्ट करने के लिए एक मजबूत पशु मॉडल आवश्यक है। प्रारंभिक कार्य प्रदर्शन किया है कि जीबीएस टीका चूहों 20,21 और चूहों के योनि मार्ग से बरामद किया जा सकता है <sup> दोनों गर्भवती और गैर गर्भवती की स्थिति में 22। 2005 में, अल्पकालिक जीबीएस योनि बसाना चूहों में मॉडलिंग की थी एक फेज अपघट्य एंजाइम की प्रभावकारिता की जांच के लिए एक 24 घंटा अवधि 23 से अधिक योनि जीबीएस के इलाज के लिए। कई साल बाद, एक लंबी अवधि जीबीएस योनि बसाना माउस मॉडल जीबीएस हठ गवर्निंग मेजबान और बैक्टीरियल कारकों का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया था। यह मॉडल उपनिवेशन के लिए योगदान कई कारकों जीबीएस, सतह उपांग 17,18 और जीबीएस दो घटक प्रणालियों 19,24 सहित पहचान की है। यह मॉडल मेजबान प्रतिक्रिया तंत्र 19,25 की पहचान के लिए योगदान दिया है और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी पेप्टाइड्स 26 और 27 प्रोबायोटिक्स सहित कई चिकित्सीय रणनीतियों, परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। इस प्रोटोकॉल आवश्यक मार्गदर्शन माउस योनि मार्ग में जीबीएस टीका लगाना और बाद में उपनिवेशवाद पर नज़र रखने और आगे के विश्लेषण के लिए नमूने एकत्र करने के लिए देता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
दोनों मेजबान के संदर्भ में मेजबान और अन्य रोगाणुओं के साथ जीबीएस बातचीत की समझ की उन्नति आगे बढ़ाने के लिए एक पशु मॉडल की आवश्यकता है। इस काम के चूहों में जीबीएस योनि उपनिवेशवाद की स्थापना के तकनीकी पह…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We would like to thank the vivarium manager and staff at San Diego State University for support with animal husbandry. During this work, K.A.P. was supported by an ARCS scholarship and a fellowship from the Inamori Foundation. K.S.D. is supported by an R01 grant, NS051247, from the National Institutes of Health.
Materials
| Sesame oil | Sigma Aldrich | S3547-250ML | |
| β-Estradiol | Sigma Aldrich | E8875-1G | CAUTION: Wear appropriate PPE. β-estradiol can be absorbed through the skin and mucosal surfaces. |
| 200 μL gel loading pipette tips | USA Scientific | 1252-0610 | |
| Urethro-genital, sterile, calcium alginate swabs | Puritan | 25-801 A 50 | |
| CHROMagar StrepB | DRG International | SB282 | |
| Todd Hewitt Broth | Hardy Diagnostics | 7161C | |
| 18 G, 1.5 inch needles | BD | 305199 | |
| 26 G, 0.5 inch needles | BD | 305111 | |
| 10 mL syringes | BD | 309604 | |
| 1 mL syringes | BD | 309659 | |
| 0.45 μm PVDF syringe filters | Whatman | 6900-2504 | |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt Solution 1X | Corning | 21-031-CV |
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