सेल आकार परिवर्तन और में सेल आंदोलन की इमेजिंग<em> ड्रोसोफिला</em> Gastrulation का उपयोग डे-cadherin रिपोर्टर ट्रांसजेनिक मक्खियों
Summary
Herein we describe a procedure to capture live images of Drosophila gastrulation. This has enabled us to better understand the apical constriction involved in early development and further analyze mechanisms governing cellular movements during tissue structure modification.
Abstract
Gastrulation आकृति विज्ञान गतिशील घटनाओं है कि इस तरह के रूप में ड्रोसोफिला बहुकोशिकीय जानवरों के भ्रूण के विकास के दौरान होने का पहला सेट है। यह रूपात्मक परिवर्तन भी mesenchymal संक्रमण (EMT) को उपकला के रूप में मान्यता प्राप्त है। EMT का अनियंत्रण फाइब्रोसिस और कैंसर मेटास्टेसिस के साथ जुड़ा हुआ है। उभरते सबूत है कि EMT आणविक तंत्र के एक नंबर के द्वारा नियंत्रित किया जाता है। इस तरह के कई प्रमुख जीन है कि शिखर कसना पर नियंत्रण भी जाना जाता है के रूप में EMT कैंसर मेटास्टेसिस में मनाया में महत्वपूर्ण कारक हो सकता है। ड्रोसोफिला gastrulation के दौरान EMT तरह, उपकला कोशिकाओं उनके आकार बदलने के लिए प्रेरित किया जा सकता है और विभिन्न अन्य प्रकार की कोशिकाओं की ओर सेल भाग्य को दिशानिर्देश देने में reprogrammed किया। यहाँ हम ड्रोसोफिला gastrulation के एक मजबूत इमेजिंग विधि भ्रूण के विकास के इस चरण के दौरान मॉर्फ़ोजेनेटिक सेलुलर आंदोलनों और सेल भाग्य पहचान की दीक्षा परख करने के लिए प्रदान करते हैं। इस विधि का उपयोग करना, हम पहचान गgastrulation के समय में पक्ष पुनर्व्यवस्था और GFP का उपयोग कर gastrulation के दौरान शिखर कसना के महत्व को प्रदर्शित लेबल डे-cadherin।
Introduction
Gastrulation आकृति विज्ञान गतिशील घटनाओं है कि इस तरह के ड्रोसोफिला 1,2 के रूप में बहुकोशिकीय जानवरों के भ्रूण के विकास के दौरान होने का पहला सेट है। दिलचस्प है, उभरते सबूत से पता चलता है कि इस प्रक्रिया यांत्रिक और आणविक तंत्र 3 के बीच परस्पर क्रिया के माध्यम से नियंत्रित किया जाता है। इसके अलावा, mesenchymal संक्रमण (EMT) है, जो gastrulation में एक महत्वपूर्ण प्रक्रिया है, के लिए उपकला भी इस तरह के कैंसर मेटास्टेसिस 4-8 के रूप में मानव रोग प्रक्रियाओं में फंसा है। जैसे, कई जीन है कि शिखर कसना पर नियंत्रण भी जाना जाता है के रूप में EMT कैंसर मेटास्टेसिस 9 में मनाया में महत्वपूर्ण कारक हो सकता है। इस प्रकार, gastrulation के समय में शिखर कसना ऊपर उल्लिखित नियामक तंत्र की जांच करने के लिए और कैंसर मेटास्टेसिस के बारे में हमारी समझ को बढ़ाने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल है। इस तकनीक का लाभ यह है कि हम वास्तविक समय है और इसलिए में gastrulation के समय में सेल आंदोलन का निरीक्षण कर सकते है, हम होगाकैंसर मेटास्टेसिस के रूप में रूप में अच्छी तरह gastrulation में शामिल जीनों स्क्रीन करने में सक्षम।
हालांकि अपेक्षाकृत अनजान, सेल करने वाली कोशिका आसंजन शिखर कसना 1 में एक केंद्रीय भूमिका निभाने के लिए सोचा है। ड्रोसोफिला आनुवंशिकी अच्छी तरह से नियामक आणविक तंत्र की खोज के एकल कोशिका के स्तर की जांच के लिए अनुकूल है। यह मॉडल gastrulation के दौरान शिखर कसना के महत्व को उजागर करने के लिए सक्षम हो जाएगा। इसके अलावा, इस विधि कैंसर मेटास्टेसिस में शामिल जीनों स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। ड्रोसोफिला gastrulation का कब्जा जीना छवियों आगे ऊतक पुनर्व्यवस्था गवर्निंग आणविक तंत्र अधिक से अधिक विस्तार में समझने के लिए हमें सक्षम है। इस के साथ साथ, हम इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए एक सरल विधि की एक व्यापक वर्णन प्रदान करते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
Although we have previously reported a similar procedure to capture live images of the gastrulation process in Drosophilla1, the method we describe here is detailed and easy to trace endogenous cadherin expression and thus is quite useful for genetic screening of key factors involved in gastrulation. To maximize success with this imaging procedure, it is essential to use an indented slide. Mechanical pressure sometimes causes embryonic death. Therefore, it is also important to handle the embryos as ge…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This study was supported by the Astellas Foundation for Research on Metabolic Disorders (HT), Takeda Science Foundation (HT), and MEXT-Supported Program for the Strategic Research Foundation at Private Universities (HT).
Materials
| Halocarbon oil 700 | Sigma | MKBH 5726 | |
| Vacuum grease Silicone | Beckman | 335148 | |
| Glass coverslip | Matsunami glass | Thickness No1 | 24-36mm |
| Embryo stariner | Corning | Corning3477 | |
| Plastic Drosophilla Stock Bottles | Hitec | MKC-100 | |
| DE-Cadherin knock-in flies | REF (10) |
References
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