अवलोकन और पाइनवुड निमेटोड में संभोग व्यवहार की मात्रा का ठहराव,<em> Bursaphelenchus xylophilus</em
Summary
A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.
Abstract
देख और पाइनवुड निमेटोड, Bursaphelenchus xylophilus के संभोग व्यवहार बढ़ाता के लिए एक विधि है, एक stereomicroscope के तहत स्थापित किया गया था। बी Xylophilus के संभोग दक्षता में सुधार करने के लिए और संभोग अवलोकन के अवसरों को बढ़ाने के लिए, कुंवारी वयस्कों सुसंस्कृत थे और जांच के लिए इस्तेमाल किया। अंडे पानी में नेमाटोड रखने और महिलाओं के 10 मिनट के लिए अंडे देना करने की अनुमति देकर प्राप्त किया गया। दूसरे चरण किशोरों (J2) अंधेरे में 25 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए अंडे सेने से सिंक्रनाइज़ कर रहे थे, और जल्दी जे 4, ग्रे मोल्ड, Botrytis धूसर पदार्थ के साथ J2 संवर्धन एक और 52 घंटे के लिए द्वारा प्राप्त किया गया। इस समय बिंदु पर, सबसे J4 नेमाटोड अपने जननांग आकृति विज्ञान का उपयोग करते हुए नर हो या मादा होने के रूप में स्पष्ट रूप से प्रतिष्ठित किया जा सकता है। पुरुष और महिला J4 एकत्र की है और 24 घंटे के लिए दो अलग अलग पेट्री डिश में अलग से सुसंस्कृत वर्जिन वयस्क नेमाटोड मिल रहे थे। एक कुंवारी पुरुष और एक कुंवारी महिला वाट की एक बूंद में रखा गयाएक अवतल स्लाइड के कुएं में इंजी। संभोग के व्यवहार एक stereomicroscope के तहत एक वीडियो रिकॉर्डर के साथ फिल्माया गया था। संभोग की प्रक्रिया की पूरी अवधि के 82.8 ± 3.91 मिनट (मतलब ± एसई) था और 4 अलग-अलग चरणों में विभाजित किया जा सकता है: खोज, संपर्क मैथुन, और सुस्त। अवधि का मतलब मिनट क्रमश: 21.8 ± 2.0, 28.0 ± 1.9, 25.8 ± 0.7 और 7.2 ± 0.5। ग्यारह उप-व्यवहार का वर्णन किया गया:, मंडरा आ रहा है, सामना, छू काली, लगाने, संलग्न, ejaculating, को अलग करने, निष्क्रियता, और रोमिंग। दिलचस्प बात स्पष्ट इंट्रा-यौन प्रतियोगिता मनाया गया था जब एक महिला 3 पुरुषों या 3 महिलाओं के साथ एक पुरुष के साथ बांटा गया था। इस प्रोटोकॉल उपयोगी और मूल्यवान है, न केवल बी xylophilus के संभोग व्यवहार की जांच में, बल्कि अन्य नेमाटोड के ethological अध्ययन के लिए एक संदर्भ के रूप में कार्य कर रही है।
Introduction
The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity.
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.
Protocol
Representative Results
Discussion
व्यवहार परीक्षण रासायनिक पारिस्थितिकी, तंत्रिका जीव विज्ञान, आणविक जीव विज्ञान, और आनुवंशिकी का एक मूलभूत पहलू हैं। नेमाटोड, और विशेष रूप से एलिगेंस, बड़े पैमाने पर इन क्षेत्रों में अध्ययन के लिए ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Najie झू और Liqun बाई इस काम के लिए समान रूप से योगदान दिया। इस काम के लिए आर्थिक रूप से लोक कल्याण में वनों के वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए विशेष कोष (201204501) और चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (31170604, 31270688, और 31570638) द्वारा समर्थित किया गया। हम अंग्रेजी लेखन पर अपने उपयोगी सुझाव के लिए डॉ Holighaus Gerrit और डॉ डेनिएल Hickford धन्यवाद।
Materials
| B. xylophilus isolate Nxy61 | Extracted from Pinus massoniana in Ningbo area of China | ||
| Grey mold strain | Obtained from Forestry Academy of China | ||
| Baermann funnels | Sengong | ||
| falcon tubes | Sengong | ||
| centrifuge | Sengong | ||
| pipette | Sengong | ||
| sterile dd H2O | Sterilized by high pressure of steam at 121°C for 30 min. | ||
| Petri dishes | Sengong | ||
| PDA medium | Huankai Bio. | 021050 | |
| incubator | Sengong | ||
| Laminar flow | Sengong | ||
| glass capillary | Sengong | ||
| Stereoscope | Leica | LED5000 RL | |
| inverted stereo microscope | Zeiss | A1 | |
| concave slides | Sengong |
References
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