MicroSecure Vitrification was developed as a non-commercial, aseptic closed vitrification device system that is compliant with FDA good manufacturing and tissue-handling practices. Due to the withdrawal of hydrophobic plugged embryo straws from the industry, the vitrification procedure was modified to include an inner seal before the standard internal cotton plug.
임상 배아의 유리화는 "오픈"시스템 (즉, 직접 LN 2 접촉)에 매우 급속 냉각이 유리화 성공을 최적화하기위한 필요성 것을 21 세기와 오해 독특한 유리화 장치의 발달과 함께 진화. 냉각 속도의 중요성을 둘러싼 교의 중요한 품질 제어 요소 (예를 들어, 사용의 용이성, 반복성, 신뢰성, 라벨 보안, 저장 안전성)을 무시 기술 변화 및 유리화 장치의 작성 대상 불안전되었다. 인트라 및 인터 – 기술자의 변화를 최소화하는 것을 목표로 안전하고, 보안, 반복 가능하고 신뢰성 μS-VTF 방법의 개발을 허용, 다른 디바이스의 품질 관리 결함 이해. 내면화, 이중 색상, 변조-페이지 1) 0.3 mL의 이오노머 수지 배아 짚 : 마찬가지로 중요한 두 개의 기존 FDA 호환 장치의 가용성을 결합반복 용접 밀봉 가능성이있는 지붕 라벨; 2) 직접 매우 효과적인 전역 유리화 장치를 생성하기 위하여 태아 (들)을로드 300 μm의 ID가 멸균 flexipettes을 일반적으로 사용되는 단축. 다른 무균처럼, 유리화 시스템 (예를 들어, 높은 보안 유리화 (HSV), 빠른-I 및 VitriSafe) 효과적으로 생식 의학에서 사용이 microSecure 유리화 (μS-VTF)를가 높은 포스트 온난화의 생존과 임신을 달성 할 수 있음을 입증 폐쇄 단순함에 대한 관심, 감소 기술 변화에 결과. 내부 소수성 플러그를 함유하는 0.3 mL의 배아 짚 상업적 솜 폴리 비닐 피 롤리 돈 (PVP) 플러그를 갖는 표준 정액 빨대로 대체되지만, 용접 밀봉을 보장하기 위해 이오노머 수지 조성물을 유지 하였다. 그러나, 면화 플러그 접촉시 flexipettes 유체 배아 내용을 심지 할 수있다. 수정 된 μS-VTF 방법은 추가 내부 용접을 포함하도록했다장치로드 측의 플러그 전에 봉인. μS-VTF 절차에 대한 추가 기술 단계는 성공적인 응용 프로그램, 높은 생존율 (> 95 %)에 영향을하지 않은 임신 율은 오늘 계속합니다.
유리화는 세포질 내 정자 직접 주입술의 개발 이후 체외 수정 (IVF) 업계에서 가장 영향력있는 보조 된 생식 기술입니다. 오늘, 포배 이전에 기존의 느린 냉동 방법 1과 관련된 태아의 생존 능력의 손실없이 냉동 보관한다. 신뢰할 수있는 포스트 온난화 배아 생존, 불임 산업은 전통적인 신선한 배아 이식보다 비슷하거나 더 높은 임신 결과를 얻을 냉동 보존 배아 이식주기의 바람직한 사용로 변신한다. 배반포 생검 및 착상 전 유전 검사 (PGS)와 관련하여, 유리화는 euploid 단일 배아 이식 2, 3을 통해 건강한 출산 결과를 최적화 할 수있는 중요한 임상 도구가되었습니다.
쥐 배아의 유리화는 1980 년대 중반 4에서 개발 된 </SUP> 5 1990 년 6 축산업에 적응. 유리화 솔루션 얼음 결정의 형성을 손상없는 glasseous 준 안정 상태를 형성한다는 전제에 기초하여,보다 효율적 배아의 전체 세포의 무결성을 유지하기 위해 입증되었다. 흥미롭게도, 인간의 발생학에 유리화의 유망 수용은 21 세기까지 실현되기 시작하지 않았다. 유리화의 사용을 촉진 초기 공보 독특한 "열기"시스템 장치 7, 8, 9의 발전과 일치한다. 느린 배반포 동결 개선도 발생했다 때 한 번에 온 그러나, 임상 실습에 유리화의 채택은 느렸다. 성공적인 종래의 느린 속도 동결 유리화 이외에뿐만 아니라 incorporat와 배아 배양 시스템에서의 개선 된 정렬이후, trophectoderm의 모두 전체 생존율을 향상하고 blastocoele-붕괴 방식의 이온, 주입 10.
지난 10 년 동안 유리화 기술은 빠른 속도로 기존의 냉동 관행을 대체하고있다. 크게이 전문 유리화 장치의 발전에 기인 하였다. 이들 장치 중 일부는 IVF 산업 (11)에 사용되는 장치 고유의 디자인에 결함을 도입함으로써 임상 유리화의 전체 안전 효율 및 효과를 장애인있다. 사실, 다른 장치의 뉘앙스는 일반적으로 "기술 서명"(12)라고 프로그램 사이에 상당한 기술 변화를 소개합니다. 따라서, 과학 저널은 시각 실험의 저널 (주피터)와 같은 결과 편차를 개선하는 데 도움이 될 것입니다 기술적 인 세부 사항을 입증하기위한 귀중한 자원으로 역할을 할 수 있습니다. 또 다른 지속적인 문제는이 s입니다오메 발생 학자는 '오픈 유리화 시스템'의 배아 나 난자의 "매우 빠른 냉각 (즉, 액체 질소 (LN 2) 직접 배아 접촉) 최적화의 전제 조건임을 주장에 따라, 오늘날에도, 잘못 알고 계시는 계속 성공률. " 분명히,이 믿음은 시스템 13, 14, 15 폐쇄 무균의 검증 된 성공을 기반으로 부정확하다.
유리화 cryobiological의 원리에 기초하여, 유리화의 효능 등급 16, 17, 18 냉각보다 온난화 속도에 따라 더 크게 달라진다. 일반적으로 사용되는 유리화 장치 독립적 온난화 속도가 높은 생존율을 보장하기 위하여 냉각 속도를 초과한다. 높은 온난화 속도는 얼음 성장 (즉, recr 기회를 최소화온난화의 실투 단계에서 극저온 솔루션의 핵 불순물)의 ystallization. 부여 유리화 액 (즉, 유형 및 사용 cryoprotective 제의 농도)의 안정성은 교란 효과를 가질 수 있지만, 이것은 별도의 발행 (11)에 어드레싱된다. 냉각 온난화 속도 문제를 고려, MicroSecure 유리화 (μS-VTF)은 유리화의 품질 관리 측면을 최적화 비용이 들지 않는, 상업, FDA 준수하는 방법으로 2008 년에 개발되었다. 그것은 변조 방지, 내면화, 듀얼 컬러 라벨을 제공하는 것을 유일했다. 또한, 로딩 (보조 장치의 표면에 피펫 팅없이 IE) 피펫에 사용되는 멸균 flexipette 직접 배아를 저장함으로써 자동화 된 시일 재를 사용하여 완벽하게 용접 밀봉 기술 변화가 효과적으로 제거 된 이오노머 수지 빨대를 이용하여.
는 C를 평가할 때1) 라벨링 가능한 라벨 – 수 단단히 부착 될 : 잠재적 용도 유리화 장치 ompleteness 포함 고려해야 할 여러 가지 품질 관리 요인이 있는가? 그들은 부정 조작하고 있습니까? 그들은 이중 색상 식별 가능성을 제공합니까? 이 보조 라벨을 필요합니까, 레이블을 쉽게 기록 유지 목적 (즉, 환자 확인) 후 온난화 제거 할 수 있습니까? 2) 기술 용이성 – 수 배아 용이 적시 장치로 /에 로딩 단순히 식별 사후 온난화 추적? 3) 절차 단순 / 반복 기술자 (내부) 및 프로그램 (외부) 사이의 변화를 최소화 쉽게 반복을 허용 유리화 방법 제공 단순성과 신뢰성을 -Does? 4) LN이 저장 용량을 용이하고 안전하게 취급 식별 장치가 수 – 수? 자신의 석재입니다잠재적 인 공간을 효율적 분노? 무균 폐쇄 시스템과 같은 물리적 손상 또는 가능한 오염 물질에서 장치의 서비스 보안 및 안전합니까? 5) 복구 가능성 / 생존 결정됨 장치 배아의 보장 회복에 잠재적 인 문제가 발생하기 쉬운 디자인, 그들이 안정적 유리화하고 완전한 세포 무결성 후 온난화를 유지? 후자의 특정 품질 문제, 회복 속도는 실제로 놀라 울 게시 된 보고서에 최소화하고있다; 이것은 일반적으로 일반적으로-좋은 생존율에 불리한 결과 (즉, 손실 배아 또는 달걀을) 숨기기에 의해 이루어집니다. 일관성 복구 (<99 %)하는 경향이 모든 장치는 심각한 결함과 절차 책임을 구성한다.
우리의 무균는, μS-VTF 방법을 전략적으로 각각의 품질 관리 측정을 고려하여 개발 된 마감했다. 그러나, 우수한 임상 성공 및 유효성 검사 14 5 년 후, 절차는 t을했다오 수정을합니다. (소수성 플러그를 가진) 원래 0.3 mL의 배아 빨은 IVF 산업에서 제거하고 표준면 / PVP 플러그를 가진 0.3 mL의 정액 짚 (즉, 정액 / 배아 밀짚으로 레이블이 재 지정)로 대체되었다. 이 절차 문서는 안전하게, 간단하고 효과적으로 μS-VTF를 구현하는 데 필요한 특정 단계와 전략을 설명합니다. 대안 이상적인 짚 용기가 임상 실험에 다시 재 도입 될 때 더욱이, 우리 때까지 안정적으로 공급 제한을 고려하여 필요한 변경 (들)을 강조.
오늘날 완전히 배반포 생존율 (> 95 %) 달성 신선한 배아 유사한 이식 성공을 달성 높은 기대가있다. 일부 그룹은 유리화 배아 전송 사이클의 출산 비율이 그대로 동결 보존 배아 건강 비 호르몬 자극 자궁에 이식되어 신선한 포배보다 아마도 더 높은 것을 제안했다. 우리의 데이터는 명확 유리화 효과적이고 안정적으로 신선한 배아의 생존을 유지하고 있음을 나타냅니다. 또한, 우리는 MicroSecure 유리화 (μS-VTF)라는 우리의 무균, 폐쇄 방법은, 상기 IVF 산업에서 사용되는 상용 표준 (즉, 개방 장치 시스템)보다 비슷하거나 더 최적의 결과를 달성 할 수 있음을 입증했다.
변화는 유리화 장치 / 방법의 다수를 사용 개인간 기술 재현성 및 신뢰성과 관련된다. 차례로, 이것은 inconsi 가져왔다유리화을 적용 프로그램 사이 stencies. 따라서, 장치 친숙 실험실 능력 성공적인 결과에 관한 중요한 요소이다 것은 놀라운 일이 아니다. 이 프로그램 간의 반복성이 문제가 될 수 있습니다 이유를 설명 "기술 서명"11이 개념이다. 뿐만 아니라 상업 장치가이 현상을 복잡 이상 다스의 개발이, 그것은 품질 관리 문제를 만들었습니다. 다행히 μS-VTF, 빠른-I와 같은 유리화 시스템을 폐쇄하고, VitriSafe, 지금 장치 시스템 12, 13, 14을 열 동등하게 효과적인 것으로 증명된다.
MicroSecure VTF 염두에 기술 용이성, 안정성 및 극저온 보안 개발 한 소설, 무균 유리화 기술이다. 두 이전에 승인 FDA 호환 장치의 사용을 조합함으로써, 비상업적 유리화 시스템 w는특수한 장치 달리 설정된 낮은 비용을 갖는 별개의 장점 번째. 또한, 독특한 조작 방지 및 내면화 이중 색상 라벨링 시스템뿐만 아니라 수많은 다른 품질 관리의 장점은 만든 μS-VTF 매력적인 글로벌 옵션 11. 비상업적 VTF 장치로서, 그러나, 널리 산업 응용 서서히 발전하고있다. 단지 그것의 안전, 보안 및 임상 효과의 지속적인 발간을 통해 활용도를 μS-VTF 이득 성장합니다.
2014 년 8 월, 때 내부, 비 심지 소수성 플러그 제조 원래 0.3 mL의 배아 빨대를 획득 할 수 없다는 직면, 우리는 확실하게 μS-VTF 방법을 수정 할 수 있었다. 즉, 자신의 솜 PVP 플러그와 함께 새로운 0.3 mL의 정액 / 배아 빨 효과적으로 적응했다. 이것은 단순히 따라서,면 플러그하기 전에 내부 실을 만드는 접촉을 방지하고 유체가에 심지에 의해 달성되었다개방형 VTF 팁 (즉, 배아 또는 계란을 포함하는 flexipette). 40 mm의 ID 봉 액세스 할 수없는 경우 또한, 라이터 30 mm로드와 연관된 부력 문제는 두 개의 볼 베어링을 사용 counterweighted 수있다.
이러한 추가 단계는 여전히 매우 효과적인 기술이 약간 덜 간단하게 만들었지 만했다. 자신의 euploidy 상태는 유전학 보고서를 확인할 때까지 생체 검사 배반포는 일반적으로 개별적으로 유리화되는 오늘날, 경제 및 효능은 점점 더 중요한 문제가되고있다. 확인 된 비 가능한 이수성 상태 배반포는 일반적으로 주 이내에 환자의 동의를 폐기하자. 따라서 VTF 장치의 대부분 (> 50 %)의 상업적 장비를 사용할 때 확대 연간 비용을 초래 단기 보관 후 폐기된다. 전반적으로, μS-VTF 인간 배반포의 냉동 보존을위한 매우 효과적인 신뢰성과 반복 과정이다. 우수한 품질 관리 설계 SECUREL복구 실패를 제거하고 배아의 유리화에 대한 보편적 인 접근 방식으로 시스템의 사용을 정당화 후 온난화의 생존과 생존을 최적화하면서 안전하게 Y 라벨 및 배아 / 난 모세포를 저장합니다.
The authors have nothing to disclose.
MC Schiewe 분석하고 연간 CDC와 SART 데이터를 평가하는 자신의 통계 전문 지식 라스 베이거스의 불임 센터에서 씨 숲 가너에게 감사의 말씀을 전합니다. 또한, 저자는 우리의 기술 능력과 전문 지식을 자신의 헌신적 인 지원과 믿음에 대한 자신의 의료 감독, 로버트 E. 앤더슨, 감사드립니다.
Aluminum Cane | IVM | XC055 | ||||
Ball bearings, 3/32" | VXB.com | KIT15977 | stainless steel | |||
CBS semen/embryo straw, 0.3ml | CryoBioSystems | 25292 | individual sterile | |||
Color, ID rods, 30 mm | CryoBioSystems | 019021-26 | weighted | |||
Culture tubes, 15ml | Falcon | 352099 | Conical | |||
Culture tubes, 10ml | Falcon | 352057 | Snap-cap | |||
Cryosleeves | Nalgene | 5016-001 | ||||
Filter, 250ml | Fisher Sci. | 09-740-2A | 0.22 μm | |||
Flasks, Tissue Culture 50ml | Falcon | 353014 | ||||
Flexipettes, 300μm ID | Cook Med. | K-FPIP-1300-10BS-5 | Sterile, 20/pack | |||
Forcep, Large | Miltex | 6-30TC | ||||
Forcep,Splinter – fine | Miltex | 17-305 | ||||
Goblet | IVM | PA003 | ||||
Heat Sealer, SYMS 1 | CryoBioSystems | 16399 | 110V or 220V with adapter | |||
Hepes-buffered media | Life Global or | LGGH-100; 100ml, or | stored at 2-8ºC | |||
Irvine Scientific | H-HTF; 90126; 100ml | with non-essential AA's | ||||
Labels, Cryo | GA International | CL-23T1 | Various colors | |||
Liquid Nitrogen Tank, 40L | MVE or Taylor Warton | various | liquid storage | |||
LN2 Dewar flask, 0.5L | Hampton Research | HR4-695 | Stainless steel | |||
6-well Custer Dishes | Biogenics | 015/020 | plasticware by case | |||
Pipette Bulb, Micro Cap | Drummond | Fisher#13681451 | Hole on bulb apex | |||
Petri Dishes, 35mm | Falcon | 351006 | ||||
Petri Dishes, 58mm | Nunc | 150288 | ||||
Petri Dishes, 100mm | Falcon | 351029 | ||||
Pipette Tips, ART long | Fisher Sci. | 02-707-80 | 10-100μl | |||
Pipet Aid | Drummond or Falcon | various | rechargeable | |||
Pipetting Device, Stripper | Cooper Surgical | MXL3-STR | ||||
Pipettes, Serological 1ml | Falcon | 357521 | ||||
Pipettes, Serological 2ml | Falcon | 357507 | ||||
Pipettes, Serological 5ml | Falcon | 357543 | ||||
Pipettes, Serological 10ml | Falcon | 357551 | ||||
Scissors, Surgical Mayo | Miltex | 5-SC-16 | ||||
Stereomicroscope | Nikon, Olympus, Leica | various | ||||
Sterile Gauze pads, 4"x4" | Kendall Healthcare | 6939 | ||||
Synthetic serum | Life Global or | LGPS-20 ; 20ml, or | stored at 2-8ºC | |||
Irvine Scientific | SS-99193; 12 x 10ml | purchase low endotoxin lot | ||||
Sucrose | Sigma Chemical Co. | #S9378 | Aliquot into 50ml flasks, 1year | |||
17.1g/flask +Medium to 50ml | ||||||
makes a 1M solution | ||||||
Filter with 0.22µm unit | ||||||
Timer | Nalgene | 5016-001 | ||||
Thawing Solution | Innovative | BL-TS | T1, T2, T3, T4 | |||
Cryo Enterprises | (≤1.0M Sucrose) | stored at 2-8ºC for ≤1 month after opening | ||||
Vitrification Solution*,** | Innovative | BL-VS | V1, V2, V3 | |||
Cryo Enterprises | (≥7.9M [Glycerol/EG]) | stored at 2-8ºC for ≤1 month after opening | ||||
* Non-permeating cryoprotective additives may include: sucrose, ficoll and sodium hyaluronate | ||||||
** other commercial preparations are typically ethylene glycol (EG)/dimethyl sulfoxide (DMSO; 30% v/v; 4.8M), but could be EG/propylene glycol (32% v/v; 5.2M). Mixed solutions are typically used to reduce cryo-toxicity concerns of a high molar solution. Commercial solutions typically include an ES and VS solution. The formulation of commercial preparation is typically proprietary property. |