सिमीयन इम्यूनो वायरस-विशिष्ट CD8 का विश्लेषण<sup> +</sup> रीसस मकाक में टी-कोशिकाओं पेप्टाइड MHC-मैं tetramer धुंधला द्वारा
Summary
यहाँ, हम एड्स के वायरस के खिलाफ की गणना और रीसस मकाक सीडी 8 + टी कोशिकाओं निस्र्पक के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल उपस्थित थे। इस लेख उपयोगी न केवल एचआईवी प्रतिरक्षा विज्ञान के क्षेत्र में, लेकिन यह भी जहां सीडी 8 + टी सेल प्रतिक्रिया रोग परिणाम को प्रभावित करने के लिए जाना जाता है जैव चिकित्सा अनुसंधान के अन्य क्षेत्रों के लिए है।
Abstract
पेप्टाइड प्रमुख उतक अनुरूपता जटिल वर्ग मैं (pMHC I) tetramers सीडी 8 + टी सेल प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक अमूल्य उपकरण किया गया है। क्योंकि इन अभिकर्मकों सीधे सीडी 8 + टी lymphocytes की सतह पर टी सेल रिसेप्टर्स करने के लिए बाध्य, fluorochrome लेबल pMHC-मैं tetramers प्रतिजन का सही पता लगाने (एजी) में इन विट्रो पुनः के लिए आवश्यकता के बिना विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं को सक्षम -stimulation। इसके अलावा, जब बहु रंग के साथ संयुक्त प्रवाह cytometry, pMHC-मैं टेट्रामर धुंधला भेदभाव मंच, स्मृति phenotype, और सक्रियण स्थिति सहित एजी-विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं के प्रमुख पहलुओं, प्रकट कर सकते हैं। विश्लेषण के इन प्रकार के एचआईवी प्रतिरक्षा विज्ञान के क्षेत्र में विशेष रूप से उपयोगी गया है, जहां सीडी 8 + टी कोशिकाओं को एड्स प्रगति को प्रभावित कर सकते हैं। बंदर इम्यूनो वायरस से रीसस मकाक (SIV) की प्रायोगिक संक्रमण एड्स वायरस के खिलाफ सेलुलर प्रतिरक्षा में अध्ययन करने के लिए एक अमूल्य उपकरण प्रदान करता है। नतीजतन, काफी progreएसएस इस पशु मॉडल में परिभाषित करने और टी सेल प्रतिक्रिया निस्र्पक में किया गया है। यहाँ हम pMHC-मैं टेट्रामर धुंधला द्वारा रीसस मकाक में SIV विशेष सीडी 8 + टी कोशिकाओं की गणना के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल उपस्थित थे। हमारे परख परीक्षण प्रति दो pMHC-मैं tetramer + सीडी 8 + टी सेल आबादी है, जो ट्रैकिंग SIV विशेष सीडी 8 + टी सेल टीकाकरण या SIV संक्रमण से उत्पन्न प्रतिक्रिया के लिए उपयोगी हो सकता है के एक साथ मात्रा का ठहराव और स्मृति phenotyping परमिट। जैव चिकित्सा अनुसंधान में nonhuman प्राइमेट की प्रासंगिकता को देखते हुए, इस पद्धति कई रोग सेटिंग्स में सीडी 8 + टी सेल प्रतिक्रिया के अध्ययन के लिए लागू है।
Introduction
के रूप में वे ट्यूमर प्रतिरक्षा निगरानी में भाग लेने और intracellular रोगजनकों 1 के उन्मूलन के लिए योगदान सीडी 8 + टी कोशिकाओं अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली के एक महत्वपूर्ण घटक शामिल हैं। सरल शब्दों में, सीडी 8 + टी कोशिकाओं टी सेल रिसेप्टर्स (TCRs) है कि विशेष रूप से पेप्टाइड प्रमुख उतक अनुरूपता जटिल वर्ग मैं (pMHC-आई) को पहचान अणुओं मेजबान कोशिकाओं के प्लाज्मा झिल्ली पर उपस्थित व्यक्त करते हैं। चूंकि इन पेप्टाइड्स endogenously संश्लेषित प्रोटीन के प्रोटियोलिसिस से निकाली गई है, कोशिका की सतह pMHC-मैं परिसरों intracellular माहौल में एक खिड़की प्रदान करते हैं। वायरस के संक्रमण पर, उदाहरण के लिए, संक्रमित कोशिकाओं MHC-मैं वायरस व्युत्पन्न पेप्टाइड्स कि सीडी 8 + टी कोशिकाओं गश्त द्वारा व्यक्त TCRs के लिए ligands के रूप में सेवा कर सकते हैं युक्त अणुओं को प्रदर्शित करेगा। घटना एक वायरस-विशिष्ट सीडी 8 + टी सेल एक संक्रमित कोशिका अपने pMHC-मैं ligand पेश मुठभेड़ों में, TCR सगाई सीडी 8 + टी सेल सक्रियण और ulti में परिणाम होगाmately सेल को लक्षित करने के लिए नेतृत्व। इन TCR / pMHC-मैं बातचीत की गंभीर प्रकृति को देखते हुए, का निर्धारण करने के परिमाण, विशिष्टता, और सीडी 8 + टी कोशिकाओं जवाब के phenotype अक्सर मानव रोगों के बारे में महत्वपूर्ण सुराग प्रकट कर सकते हैं।
1990 के दशक तक, एजी-विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं की मात्रा का ठहराव तकनीकी रूप से मांग सीमित कमजोर पड़ने परख (झील प्राधिकरण) 2,3 पर भरोसा किया। इतना ही नहीं कई दिनों झील प्राधिकरण की आवश्यकता थी पूरा किया जाना है, यह भी कोशिकाओं है कि proliferative संभावित कमी रह गई थी पता लगाने में नाकाम रहे। नतीजतन, झील प्राधिकरण बेहद प्रतिजन (एजी) विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में भाग लेने के वास्तविक आवृत्ति कम करके आंका। हालांकि ELISPOT और intracellular साइटोकाइन धुंधला assays के विकास के बहुत सेलुलर प्रतिरोधक क्षमता को मापने के लिए क्षमता में सुधार, इन तरीकों अभी भी एजी विशेष टी-कोशिकाओं 4 बढ़ाता के लिए इन विट्रो में उत्तेजना की आवश्यकता है। यह 1996 है कि Altman, डेविस, और coll तक नहीं थाeagues प्रकाशित उनकी ऐतिहासिक लेख pMHC-मैं टेट्रामर प्रौद्योगिकी 5 के विकास रिपोर्टिंग। इस तकनीक की सफलता के लिए महत्वपूर्ण pMHC-मैं अणु है, जो TCR / pMHC-मैं बातचीत के आधे-जीवन बढ़ाया है, जिससे प्रवाह cytometric assays के कदम धोने के दौरान गिरने pMHC-मैं tetramers की संभावना को कम करने के multimerization था। ऊपर उल्लिखित assays के ऊपर pMHC-मैं tetramers का मुख्य लाभ यह सही इन विट्रो फिर से उत्तेजना के लिए आवश्यकता के बिना सीधे पूर्व vivo एजी-विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं का पता लगाने की क्षमता है। इसके अलावा, बहु रंग के साथ pMHC-मैं टेट्रामर धुंधला के संयोजन cytometry भेदभाव मंच, स्मृति phenotype, और एजी- विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं 2-4 के सक्रियण की स्थिति का विस्तृत विश्लेषण की अनुमति दी गई प्रवाह। द्वारा सीडी 8 + टी सेल repertoires निस्र्पक के लिए हाल ही में तकनीकी प्रगति के प्रकाश में pMHC-पास 6 धुंधला हो multimer, के लिए आवेदनों की चौड़ाईआर इस पद्धति का विस्तार जारी होने की संभावना है।
जैव चिकित्सा अनुसंधान के क्षेत्र में कुछ क्षेत्रों में एचआईवी इम्यूनोलॉजी 7 के क्षेत्र से pMHC-मैं टेट्रामर धुंधला से अधिक लाभ हुआ है। सीडी 8 + टी कोशिकाओं अस्थायी Altman, डेविस, और उनके सहयोगियों द्वारा 8,9 प्रकाशन के समय से एचआईवी viremia की प्रारंभिक नियंत्रण के साथ संबद्ध किया गया था, हालांकि, आगामी वर्षों में pMHC-मैं tetramers का उपयोग काफी की हमारी समझ का विस्तार एचआईवी विशिष्ट सीडी 8 + टी सेल प्रतिक्रिया। उदाहरण के लिए, pMHC-मैं टेट्रामर धुंधला सबसे एचआईवी संक्रमित व्यक्तियों 10-12 में वायरस-विशिष्ट सीडी 8 + टी सेल प्रतिक्रिया के मजबूत आकार की पुष्टि की मदद की। इस पद्धति भी MHC-मैं एंटीरेट्रोवाइरल थेरेपी-एक "कुलीन नियंत्रण" के रूप में जाना जाता घटना के अभाव में वायरल प्रतिकृति की सहज नियंत्रण के साथ जुड़े अणुओं द्वारा प्रतिबंधित एचआईवी और SIV विशेष सीडी 8 + टी सेल प्रतिक्रिया के लक्षण वर्णन में मदद की <sup> 13-15। इसके अलावा, pMHC-मैं tetramers अनियंत्रित पुराने संक्रमण में एचआईवी-विशिष्ट सीडी 8 + टी कोशिकाओं की बेकार phenotype के लिए एक प्रतिवर्ती मार्ग के रूप में क्रमादेशित मौत 1 (पीडी -1) / पीडी ligand 1 (पीडी-एल 1) अक्ष स्थापित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई थी 16,17। सामूहिक रूप से, इन अध्ययनों एड्स वायरस के खिलाफ सीडी 8 + टी सेल प्रतिक्रिया की निगरानी के लिए pMHC-मैं tetramers की उपयोगिता को रेखांकित।
रीसस मकाक (macaca mulatta) की प्रायोगिक SIV संक्रमण एचआईवी / एड्स के खिलाफ 18,19 प्रतिरक्षा हस्तक्षेप के मूल्यांकन के लिए सबसे अच्छा पशु मॉडल बनी हुई है। पिछले 25 वर्षों में, पर्याप्त प्रगति इस बंदर प्रजाति में पहचान और SIV विशेष सीडी 8 + टी कोशिकाओं के लक्षण वर्णन में किया गया है, MHC-मैं alleles की खोज और पेप्टाइड बाध्यकारी रूपांकनों 13,20-27 की परिभाषा सहित । नतीजतन, pMHC-मैं tetramers SIV विशेष सीडी 8 + टी सेल के विश्लेषण के लिए विकसित किया गया हैइस पशु मॉडल 28 में हिमायती हैं। मामू-A1 * 002 मामू-A1 * 001,: 01: इन अभिकर्मकों के अधिकांश चार रीसस मकाक MHC-मैं alleles के जीन उत्पादों से बना रहे हैं 01, मामू-बी * 008: मामू-बी * 017 01, और। ध्यान से, रीसस मकाक एक MHC-सी लोकस 29 व्यक्त नहीं करते। वर्तमान प्रयोगों में इस्तेमाल pMHC-मैं tetramers के विशाल बहुमत के इमोरी विश्वविद्यालय में एनआईएच tetramer कोर सुविधा पर तैयार किए गए। फिर भी, इन अभिकर्मकों कुछ, मामू-A1 * 001 tetramers immunodominant चुप CM9 मिलान के लिए बाध्य सहित, केवल लाइसेंस समझौतों के कारण वाणिज्यिक स्रोतों से प्राप्त किया जा सकता है। चार रीसस मकाक alleles का उपयोग करना pMHC-मैं tetramers ऊपर सूचीबद्ध है, हम सफलतापूर्वक 21 SIV epitopes (तालिका 1) के एक कुल, जो टीकाकरण या प्राथमिक SIV संक्रमण 30,31 (मार्टिंस एट द्वारा प्रेरित किया गया खिलाफ सीडी 8 + टी कोशिकाओं प्रगणित है अल।, अप्रकाशित टिप्पणियों)।
वर्तमान पांडुलिपि एक प्रदान करता हैरीसस मकाक में SIV विशेष सीडी 8 + टी कोशिकाओं की आवृत्ति और स्मृति phenotype का निर्धारण करने के लिए अनुकूलित pMHC-मैं टेट्रामर धुंधला प्रोटोकॉल। आदेश TCR internalization कम होती है और जिससे में सुधार pMHC-मैं 32 धुंधला हो tetramer करने के लिए, परख एक प्रोटीन kinase अवरोध (यहाँ, Dasatinib प्रयोग किया जाता है PKI) के साथ एक वैकल्पिक 30 मिनट ऊष्मायन के साथ शुरू होता है। 01 tetramers: जैसा कि नीचे वर्णित है, इस उपचार में विशेष रूप से उपयोगी है जब का उपयोग कर मामू-बी * 017 है। कैसे fluorochrome संयुग्मित pMHC-मैं tetramers और मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (MABS) के साथ कोशिकाओं लेबल करने के निर्देश भी प्रदान की जाती हैं। इस प्रोटोकॉल भी cytolysis जुड़े अणु granzyme बी (GZM बी) के intracellular का पता लगाने के लिए एक सेल permeabilization कदम भी शामिल है। CD3 के खिलाफ एमएबी इस कदम पर जोड़ा जाता है के रूप में अच्छी तरह से इस TCR संकेत अणु का पता लगाने में सुधार होगा। एक संदर्भ के रूप में, यह धुंधला पैनल में कार्यरत सभी fluorochromes सूचीबद्ध हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रक्रिया योग्यता चर्चा में कुछ कदम वे इष्टतम परिणाम उपज के लिए महत्वपूर्ण हैं के रूप में। सबसे पहले, के बाद से जैविक नमूनों की गुणवत्ता में किसी भी प्रवाह cytometric परख 38 की सफलता का एक मजबूत कारक है, स…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम प्रयोगों कि वर्तमान कार्यप्रणाली के अनुकूलन सक्षम समर्थन करने के लिए डेविड वाटकिंस का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं। अनुसंधान इस प्रकाशन में सूचना के तहत पुरस्कार नंबर P30AI073961 राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के एड्स अनुसंधान के लिए मियामी में केंद्र द्वारा उपलब्ध कराई गई एक पायलट अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। सामग्री केवल लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के आधिकारिक विचार का प्रतिनिधित्व नहीं करता है।
Materials
| Dasatinib | Axon medchem | Axon 1392 | Must be resuspended in DMSO and immediately stored at -20°C |
| RPMI w/ Glutamax | gibco/ Life Technologies | 61870-036 | Must be stored at 4 °C |
| Heat Inactivated FBS | gibco/ Life Technologies | 10082-147 | Must be stored at 4 °C |
| Penicillin-Streptomycinp-Amphotericin B | Lonza | 17-745E | Must be stored at 4 °C |
| DMSO, Anhydrous | Life Technologies | D12345 | Store at room temperature. |
| 5-mL Round-Bottom Polypropylene Tubes | VWR | 60819-728 | |
| Fluorochrome-conjugated pMHC-I tetramers | NIH Tetramer Core or MBL, Inc. | Must be stored and maintained at 4 °C. Centrifuge at 20,000 x g for 15 min before use. Do not freeze. | |
| Fluorochrome-conjugated mAbs | Various companies | Must be stored and maintained at 4 °C. Do not freeze. | |
| LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain Kit | Life Technologies | l34957 | Must be stored at -20 °C. Resuspend each aliquot in 50 μL of DMSO prior to use. |
| Brilliant Stain Buffer | BD Biosciences | 563794 | Must be stored at 4 °C |
| Phosphate Buffered Saline | VWR | 97064-158 | Store at room temperature |
| Albumine Bovine | VWR | 700011-230 | Must be stored at 4 °C |
| Sodium Azide | VWR | 97064-646 | Store at room temperature. Toxic substance. Do not mix with bleach. |
| Bleach | VWR | 89501-620 | Corrosive chemical, cannot be mixed with sodium azide. Handle with care |
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 15714-S | Flammable, corrosive, and toxic reagent. Handle with care |
| Polysorbate 20 (Tween-20) | Alfa Aesar | L15029 | Store at room temperature |
| Permeabilization Solution 2 | BD Biosciences | 340973 | Toxic and corrosive reagent. Handle with care |
| Sarsdet Tubes 1.5mL screw top | VWR | 72.692.005 | |
| 2.0ml DNA/RNA Low bind Tubes | Eppendorf | 22431048 | The use of Sterile microtubes is preffered |
| Vortex mixer | To discretion of scientist | ||
| Biosafety Cabinet | To discretion of scientist | ||
| Milli Q Intergral Water Purification system | EMD Millipore | ZRXQ010WW | Molecular Biology grade water from any provider may be used |
| Microcentrifuge | To discretion of scientist | ||
| Centrifuge | To discretion of scientist | ||
| 4 °C refrigerator | To discretion of scientist | ||
| BD LSR II | BD Biosciences | Flow cytometer must contain lasers and filters that are compatible with the staining panel used. | |
| Deionized water | |||
| Aluminum Foil | VWR SCIENTIFIC INC. | 89068-738 | |
| Incubator | Must be able to maintain 37 °C internal temperature | ||
| FACS Diva software | BD Biosciences | ||
| Flowjo software version 9.6 | Flowjo | Used to analyze FCS files generated by FACS Diva software | |
| Micropippette tips |
References
- Parham, P., Foltin, J., Masson, S., Ghezzi, K., Engels, A., Lawrence, E., Jeffcock, E. Antigen Recognition by T Lymphocytes. The Immune System, 3rd ed. , 125-154 (2009).
- Doherty, P. C. The tetramer transformation. J Immunol. 187 (1), 5-6 (2011).
- Masopust, D., Vezys, V., Wherry, E. J., Ahmed, R. A brief history of CD8 T cells. Eur J Immunol. 37, 103-110 (2007).
- Murali-Krishna, K., et al. Counting antigen-specific CD8 T cells: a reevaluation of bystander activation during viral infection. Immunity. 8 (2), 177-187 (1998).
- Altman, J. D., et al. Phenotypic analysis of antigen-specific T lymphocytes. Science. 274 (5284), 94-96 (1996).
- Davis, M. M., Altman, J. D., Newell, E. W. Interrogating the repertoire: broadening the scope of peptide-MHC multimer analysis. Nat Rev Immunol. 11 (8), 551-558 (2011).
- Walker, B., McMichael, A. The T-cell response to HIV. Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (11), (2012).
- Borrow, P., Lewicki, H., Hahn, B. H., Shaw, G. M., Oldstone, M. B. Virus-specific CD8+ cytotoxic T-lymphocyte activity associated with control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 infection. J Virol. 68 (9), 6103-6110 (1994).
- Koup, R. A., et al. Temporal association of cellular immune responses with the initial control of viremia in primary human immunodeficiency virus type 1 syndrome. J Virol. 68 (7), 4650-4655 (1994).
- Gray, C. M., et al. Frequency of class I HLA-restricted anti-HIV CD8+ T cells in individuals receiving highly active antiretroviral therapy (HAART). J Immunol. 162 (3), 1780-1788 (1999).
- Papagno, L., et al. Comparison between HIV- and CMV-specific T cell responses in long-term HIV infected donors. Clin Exp Immunol. 130 (3), 509-517 (2002).
- Spiegel, H. M., et al. Human immunodeficiency virus type 1- and cytomegalovirus-specific cytotoxic T lymphocytes can persist at high frequency for prolonged periods in the absence of circulating peripheral CD4(+) T cells. J Virol. 74 (2), 1018-1022 (2000).
- Loffredo, J. T., et al. Patterns of CD8+ immunodominance may influence the ability of Mamu-B*08-positive macaques to naturally control simian immunodeficiency virus SIVmac239 replication. J Virol. 82 (4), 1723-1738 (2008).
- Migueles, S. A., et al. HLA B*5701 is highly associated with restriction of virus replication in a subgroup of HIV-infected long term nonprogressors. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (6), 2709-2714 (2000).
- Valentine, L. E., et al. Infection with “escaped” virus variants impairs control of simian immunodeficiency virus SIVmac239 replication in Mamu-B*08-positive macaques. J Virol. 83 (22), 11514-11527 (2009).
- Day, C. L., et al. PD-1 expression on HIV-specific T cells is associated with T-cell exhaustion and disease progression. Nature. 443 (7109), 350-354 (2006).
- Trautmann, L., et al. Upregulation of PD-1 expression on HIV-specific CD8+ T cells leads to reversible immune dysfunction. Nat Med. 12 (10), 1198-1202 (2006).
- Mudd, P. A., Watkins, D. I. Understanding animal models of elite control: windows on effective immune responses against immunodeficiency viruses. Curr Opin HIV AIDS. 6 (3), 197-201 (2011).
- Valentine, L. E., Watkins, D. I. Relevance of studying T cell responses in SIV-infected rhesus macaques. Trends Microbiol. 16 (12), 605-611 (2008).
- Allen, T. M., et al. Characterization of the peptide binding motif of a rhesus MHC class I molecule (Mamu-A*01) that binds an immunodominant CTL epitope from simian immunodeficiency virus. J Immunol. 160 (12), 6062-6071 (1998).
- Allen, T. M., et al. CD8(+) lymphocytes from simian immunodeficiency virus-infected rhesus macaques recognize 14 different epitopes bound by the major histocompatibility complex class I molecule mamu-A*01: implications for vaccine design and testing. J Virol. 75 (2), 738-749 (2001).
- Kaizu, M., et al. Molecular typing of major histocompatibility complex class I alleles in the Indian rhesus macaque which restrict SIV CD8+ T cell epitopes. Immunogenetics. 59 (9), 693-703 (2007).
- Loffredo, J. T., et al. Identification of seventeen new simian immunodeficiency virus-derived CD8+ T cell epitopes restricted by the high frequency molecule, Mamu-A*02, and potential escape from CTL recognition. J Immunol. 173 (8), 5064-5076 (2004).
- Loffredo, J. T., Valentine, L. E., Watkins, D. I. Beyond Mamu-A*01+ Indian Rhesus Macaques: Continued Discovery of New MHC Class I Molecules that Bind Epitopes from the Simian AIDS Viruses. HIV mol immunol. 2007, 29-51 (2006).
- Loffredo, J. T., et al. Two MHC class I molecules associated with elite control of immunodeficiency virus replication, Mamu-B*08 and HLA-B*2705, bind peptides with sequence similarity. J Immunol. 182 (12), 7763-7775 (2009).
- Mothe, B. R., et al. Characterization of the peptide-binding specificity of Mamu-B*17 and identification of Mamu-B*17-restricted epitopes derived from simian immunodeficiency virus proteins. J Immunol. 169 (1), 210-219 (2002).
- Miller, M. D., Yamamoto, H., Hughes, A. L., Watkins, D. I., Letvin, N. L. Definition of an epitope and MHC class I molecule recognized by gag-specific cytotoxic T lymphocytes in SIVmac-infected rhesus monkeys. J Immunol. 147 (1), 320-329 (1991).
- Kuroda, M. J., et al. Analysis of Gag-specific cytotoxic T lymphocytes in simian immunodeficiency virus-infected rhesus monkeys by cell staining with a tetrameric major histocompatibility complex class I-peptide complex. J Exp Med. 187 (9), 1373-1381 (1998).
- Otting, N., et al. Unparalleled complexity of the MHC class I region in rhesus macaques. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (5), 1626-1631 (2005).
- Martins, M. A., et al. Vaccine-Induced Simian Immunodeficiency Virus-Specific CD8+ T-Cell Responses Focused on a Single Nef Epitope Select for Escape Variants Shortly after Infection. J Virol. 89 (21), 10802-10820 (2015).
- Mudd, P. A., et al. Vaccine-induced CD8+ T cells control AIDS virus replication. Nature. 491 (7422), 129-133 (2012).
- Lissina, A., et al. Protein kinase inhibitors substantially improve the physical detection of T-cells with peptide-MHC tetramers. J Immunol Methods. 340 (1), 11-24 (2009).
- Weatherall, D. . The use of non-human primates in research. A working group report. , 152 (2006).
- Betterton, E. A., Lowry, J., Ingamells, R., Venner, B. Kinetics and mechanism of the reaction of sodium azide with hypochlorite in aqueous solution. J Hazard Mater. 182 (1-3), 716-722 (2010).
- Picker, L. J., et al. IL-15 induces CD4 effector memory T cell production and tissue emigration in nonhuman primates. J Clin Invest. 116 (6), 1514-1524 (2006).
- Dolton, G., et al. More tricks with tetramers: a practical guide to staining T cells with peptide-MHC multimers. Immunology. 146 (1), 11-22 (2015).
- Wooldridge, L., Lissina, A., Cole, D. K., vanden Berg, H. A., Price, D. A., Sewell, A. K. Tricks with tetramers: how to get the most from multimeric peptide-MHC. Immunology. 126 (2), 147-164 (2009).
- Roederer, M., Herzenberg, L. A., Weir, D. M., Blackwell, C., et al. FACS Analysis of Leukocyes. Weir’s Handbook of Experimental Immunology, 5th ed. , 1-49 (1996).
- Colantonio, A. D., et al. KIR polymorphisms modulate peptide-dependent binding to an MHC class I ligand with a Bw6 motif. PLoS Pathog. 7 (3), e1001316 (2011).
- Schafer, J. L., et al. Suppression of a Natural Killer Cell Response by Simian Immunodeficiency Virus Peptides. PLoS Pathog. 11 (9), 1005145 (2015).
