침술에 의해 쥐와 마우스에서 간질 Electrocorticograms (ECoGs)의 조작 및 절전

요약

이 논문은 침술, 간질 모델 및 설치류의 수면 분석의 성능을 보여줍니다. 침술 절차와 경혈의 식별에 대해 설명합니다. 필로카르핀 또는 펜틸레네테트라졸(PTZ)은 간질을 유발하는 데 사용됩니다. 피질전도(ECoG), 근전도(EMG), 뇌 온도 및 운동 활동 기록이 수면 분석에 사용됩니다.

초록

고대 중국 문헌에 따르면 침술은 간질과 불면증에 효과적인 치료 효과를 가지고 있습니다. 그러나 이러한 효과의 이면에 있는 가능한 메커니즘을 밝히는 연구는 거의 없습니다. 침술이 간질과 수면에 미치는 영향을 조사하기 위해서는 몇 가지 문제를 해결해야 한다. 첫 번째는 인간, 쥐, 생쥐 사이에 해당하는 경혈을 식별하는 것입니다. 또한, 침의 삽입 깊이, 수동 침 침술에서 바늘 비틀림 정도, 전기 침술(EA)에 대한 자극 매개변수를 결정해야 합니다. 침술이 간질과 수면에 미치는 영향을 평가하기 위해서는 설치류의 간질에 대한 실현 가능한 모델이 필요하다. 우리는 쥐의 국소 측두엽 간질(TLE)을 시뮬레이션하기 위해 편도체(CeA)의 왼쪽 중앙 핵에 필로카르핀을 투여합니다. 필로카르핀의 복강내(IP) 주사는 쥐에서 전신 간질 및 상태 간질(SE)을 유도합니다. 각 주사 사이에 하루 간격으로 펜틸레네테라졸(PTZ)을 5회 주사하면 마우스에서 자발적인 전신 간질을 성공적으로 유도할 수 있습니다. 쥐의 수면 분석에는 부신 피질 조영술(ECoG), 근전도(EMG), 뇌 온도 및 운동 활동의 기록이 사용되며, 쥐의 수면 분석에는 ECoG, EMG 및 운동 활동이 사용됩니다. ECoG 전극은 전두엽, 두정엽 및 반대쪽 후두피질에 이식되고, 대뇌피질 위에는 정위 수술을 통해 서미스터가 이식됩니다. 근전도 전극은 목 근육에 이식되고 적외선 감지기는 운동 활동을 결정합니다. 각성 상태, 빠른 안구 운동(REM) 수면 및 비렘 수면(NREM) 수면을 포함한 경계 단계를 분류하는 기준은 ECoG, EMG, 뇌 온도 및 운동 활동의 정보를 기반으로 합니다. 자세한 분류 기준은 본문에 명시되어 있습니다.

서론

간질은 재발 성 발작이 환자의 수명 전반에 걸쳐 발생하는 일반적인 신경 질환이다. 대부분 간질 재발은 항 간질 약물 (경련제)가 잘 제어 될 수있다. 그러나, 간질 환자의 약 30 %는 난치성 간질 ^{한 개발.} 간질 원인은 더 재발을 악화시킬 수 있습니다 교란을 잔다. 증거는 간질 밤에 잠을 방해 할 수 있거나 과도한 주간 졸음의 ^{2,3 발생할} 수 ^있음을 보여줍니다. 우리의 이전 연구는 또한 즉, 빛의 점등 기간의 시작 zeitgeber 시간 (ZT) 0에서 발생하는 간질을 나타냅니다 어두운주기, 수면을 감소; 이는 부 신피질 자극 호르몬 방출 호르몬 (CRH)하는 항상성 요인에 의해 매개된다. ZT13 (어두운주기의 시작)에서 간질 수면을 증가 항상성 다른 인자, 인터루킨 -1 (IL-1)의 발현을 향상시킨다. 간질은 ZT6에서의 중간 발생할 때 수면 활동 일주기가 변경된다빛 기간 ^4,5. 한편, 수면 장애, 간질 더 ^(6)의 진행 및 재발을 악화시킨다. 전술 한 증거를 바탕으로, 우리는 동시에 간질을 제어하고 간질 환자에서 수면 장애를 방지하기 위해 최적의 치료 방법을 공개하려고합니다. 우리는 이전에 성공적 electrocorticogram에게 (ECOG) 간....

프로토콜

모든 실험 프로토콜은 국립 대만 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인됩니다.

이식 ECOG 전극, EMG 전극, 뇌 서미스터, 및 주입 가이드 정맥 1. 정위 수술

1. 랫트 (250~350g, 6 내지 8 주령의 흰쥐)
   1. 50 ㎎ / ㎏ zoletil와 IP 주입하여 쥐를 마취. 뒷다리를 곤란하게 한 후 응답의 부족을 관찰하여 마취의 적절한 깊이를 확인합니다. 눈 연고를 적용 털을 면도하고, 포비돈 - 요오드 용액과 75 % 에탄올로 피부를 소독. 감염을 예방하기 위해 항생제 (페니실린 G)를 주입한다.
   2. 수술 메스, 가위, 지혈제, 거즈, 그리고 소작 기계를 준비합니다. 오토 클레이브 75 % 에탄올로 소작하여 수술 장비와 거즈를 소독.
   3. 귀 운하에 귀 표시 줄을 놓고 stereotaxis에 쥐를 탑재합니다.
   4. 사용메스는 꼬리 쪽 이동, 두 귀 사이의 선을 따라 두개골에 대략 2 cm의 중간 선 절개를합니다. 두개골을 노출하고, 메스를 이용하여 두개골을 통해 조직을 제거하는 지혈제로 피변 클립.
   5. 여덟 드릴 홀 (F1, F2, P1, P2, O1, O2, R1과 R2)와, 회전 공구와 두....

결과

다른 간질 유형의 요구를 만족시키기 위해 다른 RAT 마우스 모델이있다. 초점 TLE를 유도하기 위해, 필로 카르 핀의 0.5 μL를 (2.4 밀리그램 / μL)을 왼쪽 CEA에 투여된다. 및 희귀 간질 활동합니다 (ECOG 전극의 나머지로부터 픽업도 1a되어 A, C, D, E : 주된 간질 ECoGs은 좌반구 두정엽 (b는도 1a)에 ECOG 전극으로부터 취득 및 f) 상기 필로 카르 핀을 투여하는 경우. 간질의 ECoGs는 주로 필로 카르 핀 투여 후 즉시 기록됩니다. 이러한 결과는 ^8에서 채택된다. 이러한 결과는 CEA에 저용량의 필로 카르 핀의 직접 주입 후 쥐에서 국소 TLE의 성공적인 도입을 나타낸.......

토론

실현 가능한 간질 동물 모델을 선택하면 각각의 실험 목적에 필수적이다. 우리의 목표 중 하나는 간질에 EA 억제의 효과를 규명하는 것이다. EA는 간질의 치료 효과를 나타낼 수 있으며, 고대 중국 문헌에 기록 된 대체 의학입니다. 그러나, 그것을 증명하는 과학적 증거가 부족하다. 간질에 대한 EA의 효과를 확인하기 위해, 우리는 주로 오히려 심각한 전신 발작 또는 SE보다는, 가벼운 초점 간질에 EA의 효과에 초점을 맞추었다. 우리의 이전 연구는 낮은 주파수 (10 Hz에서) 높은 주파수 (100 Hz에서) EA 필로 카르 핀에 의한 초점 TLE 및 초점 TLE에 의한 수면 장애 ^7-에 양측 풍지 (Fengchi)의 혈의 효과를 입증하기 위해 쥐에 초점 TLE 모델을 사용 ^9. 우리의 결과는 100 Hz에서 EA가 초점 TLE와 TLE에 의한 수면 장애를 모두 악화 반면 양측 풍지 (Fengchi)의 혈의 10 Hz에서 EA는, 초점 TLE과 수면 장애를 억제하는 것이 좋습니다. 또 다른.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Drugs
Zoletil	Virbac		50 mg/kg i.p.
pilocarpine	Sigma-Aldrich	P6503	300 mg/kg i.p.; 1.2 mg microinjection
PTZ	Sigma-Aldrich	P6500	0.035 mg/mouse
polysporin	Pfizer
Surgery
ECoG 전극	E363/20	나사 전극	1개
받침대	플라스틱	하나의 MS363
캐뉼라	플라스틱, 하나의	C315G/spc
서미스터	오메가, 엔지니어링	44008
치과용 아크릴	Tempron
입체 기구	스톨팅		경막 팔
<강한>녹음 장비
ECoG 증폭기	Colbourn Instruments	V75-01
A/D 보드	National Instruments	NI PCI-6033E
적외선 기반 동작 감지기	Biobserve GmbH	맞춤형
ICELUS	G-System
AxoScope 10 소프트웨어	분자 장치
<강한>침술 요구
스테인리스 바늘	Shanghai Yanglong Medical Articles Co.	32 게이지 x 1 "
기능 전기 자극기	I.T.O., 일본	트리오 300
AcuPen	Lhasa OMS	포인터 엑셀 II

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