A surgical procedure was developed to deliver mammary tumor cells to the murine liver via portal vein injection. This model permits investigation of late stages of liver metastasis in a fully immune competent host, including tumor cell extravasation, seeding, survival, and metastatic outgrowth in the liver.
Brystkreft er den ledende årsak til kreft-relaterte dødelighet hos kvinner over hele verden. Levermetastaser er involvert i overkant av 30% av tilfellene med brystkreft metastaser, og resulterer i dårlige resultater med median overlevelse på bare 4,8 til 15 måneder. Nåværende gnagermodeller av brystkreft metastase, inkludert primær tumorcelle xenograft og spontane tumormodeller, sjelden metastasere til leveren. Intrakardial og intrasplenic injeksjon modeller resulterer i levermetastaser, men disse modellene kan bli til skamme ved samtidig sekundær-site metastasering, eller ved svekket immunforsvar på grunn av fjerning av milten for å unngå tumorvekst på injeksjonsstedet. For å møte behovet for forbedret levermetastaser modeller, en muse-portal vene injeksjon metode som gir kreftceller først og direkte til leveren ble utviklet. Denne modellen gir tumorceller til leveren uten komplikasjoner av samtidige metastaser i andre organer eller fjerning av milten. optimized portvenen protokollen benytter små injeksjonsvolumer 5-10 ul, ≥ 32 måle nåler, og hemostatisk gasbind på injeksjonsstedet for å kontrollere for blodtap. Portalen vene injeksjon tilnærming i Balb / c hunnmus ved hjelp av tre syngene brystsvulst linjer av varierende metastatisk potensiale ble testet; høy metastatisk 4T1 celler, moderat-metastatiske D2A1 celler, og lav-metastatiske D2.OR celler. Konsentrasjoner av ≤ 10.000 celler / injeksjon resulterer i en ventetid på ~ 20 – 40 dager for utvikling av levermetastaser med høyere metastatisk 4T1 og D2A1 linjer, og> 55 dager for mindre aggressive D2.OR linjen. Denne modellen er et viktig verktøy for å studere brystkreft metastaser til leveren, og kan være aktuelt for andre kreftformer som ofte metastaserer til leveren og endetarms og bukspyttkjertelen adenokarsinomer.
Breast Cancer metastaser til leveren
Leveren er et felles område av brystkreft metastase, sammen med ben og lunge 1-3. Levermetastaser hos brystkreftpasienter er en uavhengig prognostisk faktor for svært dårlige resultater 4,5, som median overlevelse for brystkreftpasienter med levermetastaser varierer fra 4,8 til 15 måneder 6-9. I motsetning til brystkreftpasienter med lunge- eller skjelettmetastaser har median overlevelse av 9 til 27,4 måneder 8,9 og 16,3 til 56 måneder 8,10-12, henholdsvis. Metastase er en flertrinns prosess, betegnet som metastatisk kaskade, som begynner med tumorcellespredning i den primære tumor og slutter med pasienten dødelighet på grunn av den såing og utvekst av sirkulerende tumorceller innenfor et fjernt organ 13-15. Gnagermodeller av metastatiske har avslørt at metastatisk kaskade er bemerkelsesverdig lite effektiv, med bare 0,02 til 10%av sirkulerende tumorceller etablere utilslørt metastase 16,17. En stor flaskehals av metastatisk ineffektivitet er diktert av de unike vev microenvironments på sekundære områder, kalt metastatisk nisjer 18, fremhever viktigheten av å forstå stedsspesifikke metastasering. Den metastatisk nisje er unik for området av tilbakefall, og er, delvis, karakterisert ved avsetning av forskjellige ekstracellulære matriksproteiner 19,20, infiltrasjon av forskjellige immuncellepopulasjoner 21-23, og homeostase forandret vev inklusive feilregulert produksjon av mange cytokiner, kjemokiner, og vekstfaktorer 15,18,24,25. Dermed en forståelse av vev bestemt metastatisk nisje foran en forståelse av hvordan å målrette metastatisk sykdom. Imidlertid mangler robuste modeller av levermetastaser. Videre vil forbedrede modeller av levermetastaser være avgjørende for å identifisere nye mål og effektive behandlinger for brystkreftpasienter with levermetastaser.
Etablert Modeller for å studere brystkreft metastaser til leveren
For tiden tilgjengelige modeller for å studere brystkreft metastaser til leveren omfatter menneskelige kreftcelletransplantater i svekket immunforsvar mus. Disse modellene bruker vanligvis godt studert menneskelige brystkreftcellelinjer som MCF-7 og MDA-MB-231 og Nude, Rag1 – / – eller SCID med svekket immunforsvar murine vertene 26-29. Xenograft modeller gir fordelen av å involvere menneskelige avledet kreft cellelinjer, men gitt den siste takknemlighet for immunceller i metastase 30-32 og i terapeutiske motstand 33-35, studiet av metastaser i en fullt immun kompetent vert er avgjørende. Modeller for å studere brystkreft metastaser til leveren ved immun kompetent vert omfatte ortotopisk injeksjon av syngeniske tumorceller (for eksempel, 4T1 og D2A1 cellelinjer) i melkefettpute, med eller uten kirurgiskreseksjon av den primære tumor, og påfølgende vurdering av metastase 36-38. Av notatet, er frekvensen av levermetastaser fra ortotopiske transplanterte modeller svært lav eller ikke-eksisterende forhold til andre metastaser som lunge 39,40, eller oppstår etter lungemetastase er etablert, kompliserer studiet av leverspesifikke metastaser 37,39 .
Tumor explants fra spontane genmanipulerte brystkreft modellene kan bli re-injisert i melkefettputer av naive verter som syngene tumorceller. For eksempel ble det nylig rapportert at spontane svulster fra K14 Cre ECAD f / f P53 f / f mus som modell invasiv lobular brystkreft, utvikle svulster når orthotopically injiseres i villtype verter. Etter kirurgisk reseksjon av disse tumorer når de når 15 mm 2, 18% av musene utviklet seg til levermetastaser 40,41. En tredje tilnærming for å modellere levermetastaser benytterspontane metastaser i genmodifiserte mus. Til dags dato, rapporter om spontane murine modeller av brystkreft metastaser som lett sprer seg til leveren er uvanlig. Unntakene er H19-IGF2, p53-fp / fp MMTV-Cre Cre-WAP, og den K14 Cre ECAD f / f P53 f / f genetisk modifiserte musemodeller, hvor levermetastaser utvikler seg i en lav prosentandel av mus 38,41- 43. Således, mens genmanipulerte musemodeller rette studiet av alle stadier av metastatisk cascade, og gir kraftige og klinisk relevante modeller, de er begrenset på grunn av lave priser av levermetastaser 38.
Flere metastasemodeller omgå de første trinnene i metastatisk kaskade inkludert spredning av kreftceller fra den primære svulsten og intravasation. Disse modellene tillate etterforskning i de senere trinnene av metastatisk cascade, fra ekstravasasjon til etablering av svulster på sekundære områder. den intracardiac injeksjon modellen leverer tumorceller inn i venstre hjertekammer, som distribuerer tumorceller inn i sirkulasjonssystemet via aorta. Intrakardial injeksjon krever ultralydveiledet avbildning av injeksjonsstedet eller andre bildediagnostikk som bioluminescence av luciferase merkede celler for å bekrefte vellykket injeksjon. Tumorcelle-injeksjon via den venstre ventrikkel kan resultere i ben, hjerne, lunge og / eller levermetastaser, blant andre organer 44-48. På grunn av flere organmetastaser, disse musene ofte må avlives før utviklingen av åpen levermetastaser, benektende muligheten til å fullt ut undersøke metastatisk vekst i leveren. En alternativ tilnærming som i betydelig grad reduserer utviklingen av multi-site metastaser er den intrasplenic injeksjon modell. Intrasplenic injeksjon leverer kreftceller via miltvenen som binder med den overlegne mesenteric venen til å bli portvenen 49,50. Dyr kan overvåkes for outgrowth av metastatiske lesjoner i lever, fordi dannelsen av metastaser på andre områder er sjeldne, og som et resultat blir dyrets generelle helseopprettholdt 49,50. Det er imidlertid viktig å merke seg at intrasplenic modellen krever splenektomi for å unngå milt-tumorer 49,50, en prosedyre som påvirker immunforsvaret. For eksempel er myokardial ischemi reperfusjonsskade, karakterisert ved infiltrasjon av Ly6C + monocytt undergrupper som stammer fra milten og er ansvarlig for fagocyttisk og proteolytisk aktivitet i sårhelingsprosessen følgende iskemi 51,52. Med splenektomi, er det en observert reduksjon i monocytt populasjoner som hjelper til sårheling 52. Videre har splenektomi vist seg å redusere primær tumorvekst og lungemetastaser i en kreftmodell ikke-småcellet lunge, nærmere bestemt ved en reduksjon i antall sirkulerende og intra-tumor CCR2 + CD11b + Ly6C + monocyttisk myeloid celler 53. I tillegg splenectomy følgende intrasplenic injeksjon av tykktarm kreft celler resultert i reduserte nivåer av anti-tumor naturlige drepeceller i mesenteriets lymfeknuter og forhøyede levermetastaser 54. I sum er disse funnene tyder på at splenektomi kompromitterer immunsystemets rolle med påfølgende konsekvenser for metastatisk celle skjebne.
Portal Vein Injeksjon Modell av levermetastaser
For å undersøke brystkreft metastaser til leveren i en fullt immun kompetent vert, under forhold hvor musene ikke blir kompromittert på grunn av multi-organmetastaser, ble en portal vene injeksjon modell utviklet. Intraportal injeksjon modeller har blitt brukt tidligere for å studere levermetastaser fra kolorektal 55,56 og føflekkreft 16 cellelinjer; Her beskriver vi bruk av intraportal injeksjon for å modellere syngene brysttumorcelle metastase. Denne modellen kan brukes til å studerede senere stadier av metastatisk cascade inkludert brystkreft celle bloduttredelse og seeding, tumor celle skjebne beslutninger om død / spredning / dvalen, og utvekst i åpenlys lesjoner. I denne modellen er syngeniske brysttumorcellelinjene injisert via portalvenen av immun vedkommende Balb / c-hunnmus, en metode som leverer tumorcellene for det første og direkte til leveren uten fjerning av milten. For å utvikle denne modellen, bruk av fire melketumorcellelinjer som varierer i sin metastatiske evne fra lav til høy var ansatt: D2.OR, D2A1, og 4T1, og har ansatt D2A1 merket med grønt fluorescerende protein (D2A1-GFP) for å undersøke tidlig tidspunkt-poeng etter tumorcelle injeksjon. 4T1 er en svært metastatisk cellelinje avledet fra 410,4 svulst som spontant oppstod i en MMTV + Balb / c hunnmus 36,37 og metastasizes til lunge, lever, hjerne og bein fra melkefettpute primære svulster 39,57,58. D2A1 tumorceller were også opprinnelig stammer fra en spontan brysttumor skriver seg fra en Balb / c verten etter transplantasjon av D2 hyperplastiske alveolære nodule celler, og er bekreftet å være metastatisk fra den primære svulsten til lungene 59,60. D2.OR kreftceller er en ikke-metastatisk søster linje til D2A1 linjen, og selv om de slipper unna den primære svulsten og ankommer sekundære områder, de sjelden etablere fjernmetastaser 60,61.
I tillegg er det viktig å unngå bruk av vanlig anvendte smertelindring medisiner, inkludert ikke-steroide antiinflammatoriske midler (NSAIDs) under eller etter den kirurgiske prosedyren. NSAIDs har anti-tumor aktivitet i visse brystkreft 62-65, og noen klasser av NSAIDs øker risikoen for levertoksisitet 66,67, potensielt kompromittere studiet av levermetastaser og leveren metastatisk nisje. Videre studier tyder på at NSAIDs direkte påvirker vevet mikromiljøet, redusere pro-metastatisk extracellular matrix proteiner tenascin-C 68 og fibrillar kollagen 62,65. Alternativt kan bruken av et opioid-derivat, buprenorfin, ble brukt på grunn av sin effekt i gnager smertebehandling 69 og på grunn av mangel på bevis for at opioider har anti-tumor-aktivitet 70. Denne portvene-injeksjon modell ble optimalisert for mindre injeksjonsvolum av 5 – 10 pl for å unngå unødvendig skade på leveren. Modellen ble også optimalisert for å inkludere nåler med mindre diameter (≥ 32 gauge) og bruk av hemostatisk gasbind umiddelbart etter injeksjon for å redusere blodtap under prosedyren. I motsetning til disse optimale injeksjonsparametre, bør celletall bestemmes på individuelt grunnlag, basert på karsinogent potensial av cellelinjen. Men, som starter på ≤ 10 000 celler / injeksjon for langtidsstudier anbefales. For kortere endepunkter (f.eks 24 timer etter injeksjon) betydelig mer kreftceller (f.eks,1 x oktober 5 til 1 x 10 6) kan brukes hvis berettiget. Oppsummert portveneinjeksjon modell beskrevet her representerer et nyttig verktøy for studier av brystkreft metastaser til leveren og omgår mange av begrensningene ved andre levermetastasemodeller. Denne modellen muliggjør studie av tumorcelle ekstravasasjon, såing, tidlige skjebne avgjørelser for overlevelse, spredning, og dvalen, og metastatisk utvekst i immun kompetente murine verter.
Balb / c mus portal vene injeksjon modell tillater studier av melke kreft lesjoner i leveren i fravær av konfunderende multi-organ metastase og i en fullt immun kompetent vert. Vår protokoll er en videreutvikling av tidligere publiserte kirurgiske prosedyrer som tillater tilgang til portalen blodåre for injeksjon av tumorceller direkte inn i leveren 16,55,56. Én utvikling vi har gjort er å vesentlig redusere antall injiserte tumorceller fra ≥ 1 x 10 5 celler / injeksjon 16,55,56 ned til ≤ 10000 tumorceller / injeksjon. Vi har også utvidet modell for studiet av brystkreft metastaser i leveren. Ved hjelp av denne protokollen, to brystkreftcellelinjer med kjent metastatisk potensial utvikle levermetastaser med kortere ventetid enn en mer stillestående brysttumorcellelinje. Videre, på tidlige tidspunkter, blir tumorceller fordelt gjennom leveren parenchyma enkle eller små grupper av enkelt cells etter tumorcelle injeksjon. Modellen er klar til å ta opp spørsmål om metastatisk effektivitet inkludert tumorcelle bloduttredelse, celleoverlevelse, dvalen, og spredning – alle fenotyper som bidrar til utvikling av mikrometastatisk og utilslørt metastatisk sykdom i leveren.
Det er viktig å vurdere mange aspekter av portvenen injeksjon protokollen før oppstart av studier. Nøye avgjøre om cellelinjer, cellekonsentrasjonen, total celle nummer, og slutt interessante basert på mindre utforskende studier er sterkt anbefalt. Videre, er bruken av immun kompetent vert og syngene cellelinjer av største betydning for å forstå vert-tumorcelleinteraksjoner. Den nyutviklede "glødende head" mus som uttrykker EGFP og luciferase fra fremre hypofysen er et viktig verktøy for å fjerne verts svar på eksogene EGFP og luciferase, proteiner ofte brukt til å merke melketumorlinjer 75 </sup>. Bruk av "glødende head" mus og syngene merket kreftceller vil forenkle identifisering av enkelt spres celler og mikrometastaser ved IHC uten bekymring for inflammatoriske respons på EGFP eller luciferase. På samme måte velger smerte forvaltningsstrategier nøye for å sikre minimal anti- eller pro-tumor effekt fra behandlingsregime anbefales sterkt. Kritiske trinn i denne protokollen omfatter vedlikehold sterile forhold gjennom operasjoner for å sikre at infeksjonen ikke skjer, da dette vil forvirre noen resultater. Det er også viktig at nålen er riktig plassert i portvenen for å sikre at tumorcellene blir levert til leveren. Øve protokollen med fargestoffer som India blekk vil hjelpe med dette problemet. Tumorvekst på huden innsnitt området er den beste indikatoren på at urettmessig nål plassering skjedde. Til slutt, er det avgjørende at blodtap fra portvenen er tilstrekkelig kontrollert og opphører helt før suturing dyret. Bruken av hemostatic gasbind reduserer sterkt risikoen for ukontrollerte blodtap fra portalen blodåre etter injeksjon. I våre hender, ble prosessrelatert dødelighet på grunn av blodtap fra portvenen etter injeksjon redusert fra 30% til 2% av mus ved bruk av hemostatisk gasbind.
Det er viktig å merke seg at portvenen injeksjonen modellen ikke replikere den fulle metastatisk kaskade, men er begrenset til studiet av tumorcelle ekstravasasjon, tumorcelle-nisje interaksjoner følgende ekstravasasjon og tumorvekst. Modeller som nøyaktig gjenskape hele metastatisk kaskade til leveren, slik som forekommer hos pasienter, er sterkt behov. En ekstra begrensning av portvenen injeksjon modellen er at den er blitt til skamme av effekten av kirurgi på verten, med sårtilheling kjent for å påvirke sykdomsprogresjon 76,77.
Portveneinjeksjon modellen representerer en forbedring i forhold til andre injeksjonsmodeller for å studere levermetastaser, inkludert intrakardiell og intrasplenic modeller. Spesifikt, gjør det mulig for portvenen injeksjons modell for studiet av et større utvalg av sykdomsprogresjon enn intrakardiale modellen, som er ofte begrenset av ledsagende metastaser i andre vev. Videre er portvenen modellen ikke kompliseres ved fjerning av milten, slik det gjøres i den intrasplenic modell.
Portveneinjeksjon Modellen kan vise seg å være et nyttig verktøy for studier av levermetastaser generelt. Levermetastaser er den hyppigste stedet for metastaser i adenokarsinomer samlet, med spesielt høye priser i bukspyttkjertel kreft (85% av metastaser er til leveren), tykktarm og endetarm adenokarsinomer (> 70%), samt mage og esophageal (> 30 %) 1. Selv om spontane og ortotopiske primærtumormodeller av bukspyttkjertelen og tykktarm adenokarsinomer lettere metastaserer til leveren 78,79, kan portvenen injeksjon modell prove nyttig å forstå metastatisk prosessen med disse kreftformene som kontrollert levering av tumorceller tillater biokjemiske, molekylære og histologiske vurderinger på bestemte tidspunkter etter tumorcelle ankomst. I sammendraget, representerer portvenen injeksjon modellen en viktig forbedring på tilgjengelige levermetastaser modeller av brystkreft, og kan også være aktuelt for levermetastaser feltet generelt.
The authors have nothing to disclose.
The authors would like to acknowledge Alexandra Quackenbush for assisting with surgical procedures during filming of the video protocol, Hadley Holden for histological support, Sonali Jindal for input on tumor and liver pathology during method development, and Breanna Caruso for critical review of the manuscript. The D2A1 and D2.OR mammary tumor cells were a gift from Dr. Ann Chambers, the D2A1-GFP tumor cells were a gift from Dr. Jeffrey Green, and the 4T1 tumor cells were a gift from Dr. Heide Ford. The OHSU Advanced Light Microscopy Core at the Jungers Center was utilized for imaging. The work included in this manuscript includes funding from NIH/NCI NRSA F31CA186524 (to ETG) and NIH/NCI 5R01CA169175 (to PS).
1 ml Syringe w/ 26-gauge Needle | BD Syringe | 309597 | For subcutaneous buprenorphine injection; use caution, sharp |
Alcohol Prep Pads | Fisher Scientific | 06-669-62 | For cleaning of abdomen prior to surgical incision |
All Purpose Sponges, Sterile | Kendall | 8044 | 4" x 4", use dipped in sterile saline to keep large and small intestines protected and hydrated during surgery |
Artificial Tears | Rugby | 370114 | Mineral oil 15%, white petrolatum 83%; use to protect eyes during surgery |
Buprenorphine HCl, 0.3 mg/ml | Mfg. by Reckitt Benckiser | NDC-12496-0757-1 | Use at 0.05 – 0.1 mg/kg body weight, 1-2x daily for 72 hours, injected subcutaneously |
Bupivacaine HCl, 0.5% (5 mg/ml) | Mfg. by Humira Inc | NDC-04091163-01 | Use at 0.5%, 1x immediately after surgery, 10 ul injected subcutaneously at incision site |
anti-CD45 antibody | BD Pharmingen | 550539 | Use in multiplex immunofluorescence to exclude leukocytes in identification of metastatic foci |
Celox™ Rapid Hemostatic Gauze | Medtrade Products Ltd. | FG08839011 | Cut into 5mm² pieces, use to stop blood flow out of the portal vein with pressure following injection |
Chemical Depilatory | Use to remove hair from surgical area; multiple suppliers | ||
Chlorhexidine, 2% Solution | Vet One | 1CHL008 | Use caution, do not get chlorhexidine in mucous membranes or ears of the mouse |
anti-CK18 antibody | Abcam | ab53118 | Use in multiplex immunofluorescence to identify metastatic foci |
Cotton Tipped Applicators, Sterile | Fisher Scientific | 23-400-114 | 6" Wooden Shaft 2 pc/envelope |
DMEM, High-Glucose | HyClone | SH30243.01 | Cell culture media base for use with D2A1, D2.OR, and 4T1 mammary tumor cell lines |
Dry Glass Bead Sterilizer | Use between surgeries to sterilize stainless steel tools, use caution, extremely hot; multiple suppliers | ||
Ethanol, 70% solution | Use caution flammable; use to clean surgical area as needed; multiple suppliers | ||
Fetal Bovine Serum | HyClone | SH30071.03 | Cell culture media additive for use with D2A1, D2.OR, and 4T1 mammary tumor cell lines, use at 10% in DMEM high glucose |
Gauze, Sterile | Kendall | 2146 | 2" x 2", use dipped in chlorhexidine 2% solution for cleaning of abdomen prior to surgical incision |
anti-Green Fluorescent Protein antibody | Vector Laboratories | BA0702 | Use to stain for GFP tagged D2A1 or other mammary tumor cell lines |
L-Glutamine 200 mM (100X) | Gibco | 25030-081 | Cell culture media additive for use with D2A1, D2.OR, and 4T1 mammary tumor cell lines, use at 2 mM (1x) in DMEM high glucose |
Heating Pad, x2-3 | Use to maintain body heat during surgery and recovery; multiple suppliers | ||
Hemocytometer | Hausser Scientific | 1483 | For use in cell culture to count cells |
Hemostatic Forceps | Stainless steel; multiple suppliers | ||
anti-Heppar-1 antibody | Dako | M7158 | Use in multiplex immunofluorescence to exclude hepatocytes in identification of metastatic foci |
Insulin Syringe, 0.3 ml, 29-gauge | BD | 324702 | For bupivacaine injection at suture site; use caution, sharp |
Isoflurane | Piramal | NDC-66794-017-25 | Administered at 2.5% |
Isoflurane Vaporizer | VetEquip | 911103 | Use caution, vaporizes anesthetic gases |
Light Source | Use for visualizing the surgical field; multiple suppliers | ||
Neutral buffered formalin, 10% | Anatech Ltd. | 135 | Use caution, toxic; use as a tissue fixative for metastasis endpoints and assesment of metastatic burden by histology |
Opal™ 4-color fIHC kit | PerkinElmer, Inc. | NEL794001KT | Use for multiplex immunofluorescence of Heppar-1/CD45/CK18 to detect metastases in murine liver |
Operating Scissors | Stainless steel; use caution, sharp; multiple suppliers | ||
Penicillin/Streptomycin, 100x | Corning | 30-002-Cl | Cell culture media additive for use with D2A1, D2.OR, and 4T1 mammary tumor cell lines, use at 1x in DMEM high glucose |
Phosphate-buffered Saline | Use at 1x for resuspending tumor cells prior to injection, multiple suppliers | ||
Removable Needle Syringe, 25 ul, Model 1702 | Hamilton | 7654-01 | For portal vein injection; use caution, paricularly while working with tumor cell-loaded needles, sharp when needle is attached |
Scalpel handle | Stainless steel; multiple suppliers | ||
Scalpel blade, #15 | Carbon steel, sterile, size 15; multiple suppliers | ||
Small Hub Removable Needles, 32-gauge | Hamilton | 7803-04 | For portal vein injection, 1" length, point style 4, 12°angle, 33- to 34-gauge reusable needles can also be used; use caution, paricularly while working with tumor cell loaded needles, sharp |
Sodium Hypochlorite | Use caution, corrosive; use at 10% to disinfect workspace and surfaces, multiple suppliers | ||
Sterile Saline | Fisher Scientific | BP358-212 | 0.9% NaCl solution; alternatively, can be homemade and sterile filtered |
Surgical Gloves, Sterile | Multiple suppliers | ||
Sutures, Sterile | Ethicon | J310H | 4-0 27" coated vicryl w/ 22 mm 1/2c taper ethalloy needle; use caution, sharp |
Table Top Portable Anesthesia Machine | VetEquip | 901801 | Use with isoflurane vaporizer for mouse anesthesia |
Thumb Dressing Forceps | Stainless steel, serrated, blunted; multiple suppliers | ||
Towel Drapes, Sterile | Dynarex | 4410 | 18" x 26", to cover heating pad and provide a sterile workspace during surgery |
Trypan Blue | Life Technologies | T10282 | For use in cell culture to assess viability, use 1:1 with cells in 1x PBS |
Trypsin/EDTA, 0.05% (1x) | Gibco | 25300-054 | Use in cell culture to detach tumor cells from tissue culture plates |