ADSC-feuille Transplantation à prévenir Rétrécissement après oesophagienne prolongée Endoscopic dissection sous-muqueuse

Summary

Cette étude rapporte une méthode efficace de la cellule adipeuse endoscopiques dérivée du tissu stromal (ADSC) feuillet transplantation pour la prévention de la sténose oesophagienne après une dissection étendue endoscopique sous-muqueuse (ESD) dans un modèle porcin.

Abstract

Au cours des dernières années, la cellule-feuille construction a suscité un grand intérêt dans la médecine régénérative, notamment pour les procédures de chirurgie reconstructive. Le développement des technologies diversifiées, combinant des cellules stromales dérivées de tissu adipeux (ADSCs) avec diverses biomatériaux a conduit à la construction de nombreux types de substituts du génie tissulaire, tels que les os, le cartilage et les tissus adipeux de rongeurs, porcine ou ADSCs humaines. dissection prolongée oesophagienne endoscopique sous-muqueuse (ESD) est responsable de la formation de sténose de l'œsophage. la prévention des Rétrécissement reste difficile, sans traitements efficaces disponibles. Des études antérieures ont rapporté l'efficacité de la muqueuse cellulaire feuilles transplantation dans un modèle canin et chez les humains. ADSCs sont attribuées des propriétés anti-inflammatoires, des effets immunitaires locales de modulation, néovascularisation induction, et les capacités de différenciation en mésenchymateuses et lignées non-mésenchymateuses. Cette étude originale décrit la tra endoscopiquensplantation d'une construction de génie tissulaire ADSC pour empêcher sténose de l'œsophage dans un modèle porcin. La construction ADSC est composée de deux feuilles ADSC allogéniques en couches les unes sur les autres sur une membrane de support en papier. Les ADSCs ont été marqués avec le fluorophore PKH67 pour permettre endomicroscopie laser confocale à base de sonde (pCLE) suivi. Le jour de la transplantation, à 5 cm et une ESD hémi-circulaire connu pour induire œsophage a été réalisée. Les animaux ont été immédiatement transplantées par voie endoscopique avec 4 constructions ADSC. L'adhérence complète des constructions ADSC a été obtenu après 10 min d'application douce. Les animaux ont été sacrifiés au jour 28. Tous les animaux ont été transplantés avec succès. Transplantation a été confirmée le jour 3 avec une évaluation de pCLE positive. Par rapport aux animaux transplantés, les animaux témoins ont développé des sténoses sévères, avec grand développement du tissu fibrotique, trouble alimentaire plus fréquent, et le gain de poids réduit. Dans notre modèle, la transplantation de allogenic ADSCs, organisés en feuilles doubles de cellules, après ESD prolongée a réussi et fortement associée à un taux de sténose de l'œsophage inférieur.

Introduction

La gestion des tumeurs œsophagiennes superficielles a changé avec le développement de nouvelles techniques endoscopiques. De nos jours, la résection endoscopique est le traitement de première ligne. En effet, elle est associée à la morbidité et de mortalité inférieurs à ceux d' une chirurgie avec des résultats oncologiques égaux ^{1, 2, 3.} La résection endoscopique de la muqueuse (EMR) et muqueux résection endoscopique (ESD) sont les techniques les plus couramment utilisés. Dans le cas d'une tumeur superficielle étendue, l'EDD est préférable. Par rapport à EMR, ESD permet en bloc résection, indépendamment de la taille de la lésion et de la forme ^{4, 5, 6.} La principale complication tardive de l'EDD est la formation de sténose de l'œsophage, ce qui se produit généralement entre une et deux semaines après la résection. Des études récentes publiées ont montré que la formation de sténose est corrélée à lataille de la résection. La Endoscopic Société japonaise recommande d'éviter l'EDD taille est supérieure à ¾ de la circonférence de l'œsophage, car ils sont associés au développement de sténoses dans plus de 90% des cas et sont responsables de troubles alimentaires graves et la détérioration importante de la qualité de vie.

La prévention de la sténose de l'œsophage reste difficile. Mécanismes impliqués dans la formation de sténoses ne sont que partiellement connus. Rétrécissement formations semble résulter de l'association de deux mécanismes différents: (1) le recrutement cellulaire pro-inflammatoire et (2) le développement excessif de la fibrose ^7. Plusieurs traitements préventifs ont été proposés. Cependant, les résultats ne sont pas satisfaisants, avec peu d' avantages et d' effets secondaires graves , ^{8, 9.} Récemment, une équipe japonaise, Ohki et al. , A proposé de transplanter une feuille cellulaire à une seule couche de cellules de la muqueuse orale autologues dans le Esophcicatrice ageal. La transplantation a été effectuée immédiatement après ESD ^{10, 11.} Ils ont démontré l'efficacité de cette approche novatrice, d'abord dans un modèle canin, puis chez les patients.

cellules adipeuses dérivées de tissu stromales (ADSCs) sont prometteurs en médecine régénérative. Leur application dans plusieurs domaines, a donné des résultats intéressants, notamment dans le processus de cicatrisation. Thérapie ADSC offre plusieurs avantages, car les cellules sont facilement isolés et sont associés à des propriétés anti-inflammatoires, des effets immunomodulateurs locaux, néovascularisation induction et capacités de différenciation en lignées mésenchymateuses et non mésenchymateuses ^{12, 13, 14.}

Dans une précédente étude, notre équipe a démontré l'efficacité de la double ADSC-feuille endoscopique transplantation pour prev sténose oesophagienneention après ESD prolongée dans un modèle porcin ^15. Dans cet article, les rapports de construction ADSC-feuille et technique de transplantation endoscopiques sont présentés.

Protocol

Tous les animaux ont été traités selon le Comité d'éthique de la recherche animale (Lignes directrices du ministère français de l'Agriculture). Le protocole a reçu l'approbation du comité d'éthique local autorisé pour les expérimentations animales à l'Université Paris Descartes (numéro enregistré MESR 2035,02; Faculté de médecine Paris Descartes, Paris, France). 1. ADSC Culture et étiquetage Obtenir ADSCs confirmés auprès d'une institution privée. Culture …

Representative Results

La culture de ADSCs et la procédure pour obtenir la feuille de ADSC est représentée sur la figure 1. La figure 2 montre la construction de la greffe, composé de deux feuilles ADSC en couches les unes sur les autres sur leur membrane support papier. ADSCs ont déjà été marqués avec le fluorophore PKH67 pour permettre la surveillance de la greffe in vivo avec pCLE. La figure 3 montre les différentes étapes d&#39…

Discussion

Dans ce modèle de porc, la transplantation ADSC-feuille était techniquement réussie, et l'évaluation in vivo de pCLE permis pour la surveillance de la greffe de cellules. Des évaluations cliniques, endoscopiques, radiologiques et histologiques ont démontré l'efficacité de la feuille de ADSC endoscopique à la prévention de la sténose oesophagienne après ESD prolongée.

La transplantation endoscopique d'une solution ADSC de glycérol contenant une feuille carmi…

Materials

Transparent endoscopic cap Q180 compatible	Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscope	Olympus Optical Co
Videoscope System Exera II	Olympus Optical Co
Injection needle 18 G	Olympus Optical Co
Electrosurgery unit ERBE ICC 350	ERBE Technology
Indigo carmin 1%	Life
Endoscopic hybrid knife	Life
Minisonde Z pCLE green probe	Mauna Kea Technology		You must learn how tu use the probe. The manipulation could be difficult
Fetal bovine serum	Sigma Aldrich	12105C
Trypsin	Sigma Aldrich	T146
Alpha minimum essential medium	Thermo Fisher	22561-021
Phosphate-Buffered Salines	Thermo Fisher	10010-023
PKH67 dye kit	Sigma Aldrich	Mini67-KT
12-well temperature responsive cell culture dish	Upcell Thermo Scientific	174900	Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 minutes before seeding cells
Esomeprazole 40 mg	Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/ mL	Lavoisier
Amoxicilline 1 g	Biogaran
Ketamine 250 mg/5 mL	Panpharma
Propofol 10 mg/ mL	Fresenius
Hydrophobic paper	Carrefour