인간의 자궁 경부 감마 델타 T 세포의 분리 및 유세포 분석
Summary
We describe here an isolation method to obtain human endocervical intraepithelial lymphocytes for the analysis of intraepithelial gamma delta T cells. This protocol can be extended for the purification of endocervical gamma delta T cells by magnetic beads or by cell sorting.
Abstract
여성의 생식 기관 (FRT) 점막 면역 시스템은 첫 번째 방어선 역할을합니다. 성기 점막의 더 나은 지식은 HIV를 포함하여 다른 병원균의 병원성을 이해하는 것이 필수적이다. 감마 델타 (GD) T 세포는 '비 전통적인'T 세포의 원형이며, 감마 및 델타 사슬로 구성된 이종이 T 세포 수용체 (TCR도)들의 식으로 정의 T 세포의 상대적으로 작은 부분 집합을 나타낸다. 이 알파 – 베타 TCR도에 의해 정의 된 고전 훨씬 더 잘 알려 CD4 + 헬퍼 T 세포와 CD8 + 세포 독성 T 세포에서 차별화. GD T 세포는 종종 조직 별 현지화를 보여 상피 세포에 농축되어있다. GD T 세포는 염증, 종양 감시, 감염성 질환, 및자가 면역 반응에 대한 면역 반응을 조율.
여기서는 재현성 분리 및 인간 자궁 경부 상피내 GD T 림프구를 분석하는 방법을 제시한다. 우리는 하여자의 부처 간 HIV 감염 연구 (WIHS)에 참여하는 여성에서 사용 경부 cytobrush 샘플을했습니다. 질 점막 모독가 인 조건에서 GD T 세포의 상호 작용에 대한 지식은 질 microbicides.In 추가의 개발을 포함한 점막 취약점을 해결하는 임상 연구에 적용 할 수 점막 GD T 세포 반응에 대한 지식을 가지고 감염성 질환의 치료에서 GD T 세포 기반 면역 요법의 적용 가능성.
Introduction
우리는 GD 상피내 T 세포를 평가하기 위해 브러시 경부 샘플을 사용하는 방법을 개발 하였다. 자궁 경관은 원주 상피의 단일 층으로 늘어서있다. 상피내 림프구는 병원성 미생물 7, 8 발생에 면역 반응을 빠르게을 시작할 수 있습니다 상피 층 내부에있는 전선 림프구를 나타냅니다. 자궁 경부 상피내 구획의 면역 학적 사건을 이해하는 것은 HIV를 포함하여 감염을 방지하는 효과적인 전략의 설계에 중요합니다.
우리의 방법은 HIV 감염 또는 HIV 감염 위험이있는 여성 GD 상피내 T 세포의 역할을 조사하기 위해 신선하게 수집 된 인간 경부 샘플뿐만 아니라 냉동 경부 세포에 적용 할 수있다. 이 프로토콜의 주요 목표는 자궁 경부 상피내 구획에 새로운 면역 학적 이벤트를 발견하고 evaluat하는 것입니다HIV 감염 여성의 점막 취약점 마커로 전자 GD T 세포 반응.
FGT 내성 주변 지식에 상당한 격차가 성공적으로 수집하고 점막 샘플의 처리에 어려움에 부분적으로 기인한다. 또한, 복잡한 점막 면역 세포 이질성, 서로와의 상호 연결성은 면역 시스템의 상태 및 성능을 반영 임상 적 측정을 식별하는 주요 과제이다. 우리는 추가 될 FRT 면역 기전을 확인하기위한 없어서는 안될 매우 다중화 된 단일 셀 기술을 사용하여 분석 할 수 고순도 GD 상피내 T 세포를 수득하는 방법을 개발 하였다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여성 하부 생식기의 점막 취약점 평가는 HIV 수집 및 전송의 위험을 다루는 임상 연구의 필수적인 구성 요소입니다. 일반적으로 HIV 감염에 FGT 취약점은 생식기 분비물 (사이토 카인, 케모카인 및 항균 펩타이드) 12, 13에 용해 면역 조절제를 측정하여 평가한다. 그러나 이러한 바이오 마커는, 질 염증의 지표이다 생리 학적 및 병리학 적 사건에 의해 영향?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는이 작업에 참여할 의지의 마이애미 WIHS 연구 참가자 감사합니다. 이 논문의 데이터는 마이애미 여성 부처 HIV 연구 (WIHS)에 의해 수집 하였다. 이 책의 내용은 전적으로 저자의 책임이며 국립 보건원 (NIH)의 공식 견해를 대변하지 않습니다. 이 작품은 전진에 대한 알레르기 및 전염병 국립 연구소와 여자의 부처 간 HIV 감염 연구 (WIHS) 허가 번호 U01의 AI103397, 알레르기 국립 연구소 감염증, 건강 [허가 번호 P30AI073961]의 국립 연구소, 국립 센터 지원 건강의 병진 과학 및 소수 민족 보건 및 건강 불균형에 국립 연구소, 건강 [허가 번호 UL1TR000460 및 1KL2TR000461] 국립 연구소 및 아동 건강 및 인간 발달의 국립 연구소 국립 연구소 [허가 번호 K23HD074489].
Materials
| Cytobrush Plus GT | (CareFusion, San Diego, CA, USA | ||
| IMDM,Iscove's Modified Dulbecco's Medium | ThermoFisher Scientific | 12440061 | |
| Beckman Coulter automated cell counter (The Vi-CELL Series Cell Viability Analyzer | Beckman Coulter | 496178 | |
| DMSO, Dimethyl sulfoxide | Sigma Aldrich | D2650 | |
| FBS, Fetal Bovine Serum | Invitrogen, Gibco | 26140-079 | |
| PBS | Invitrogen, Gibco | 10010023 | |
| BSA | Sigma Aldrich | A-9647 | |
| LIVE/DEAD Fixable Yellow Dead Cell Stain kit | Life Technologies, | L349S9 | |
| 1% paraformaldehyde (Sigma-Aldrich | Sigma Aldrich | D6148 | |
| Fortessa flow cytometer | Becton Dickinson | ||
| UltraComp eBeads | eBioscience | 01-2222-42 | |
| ArC Amine Reactive Compensation Beads (Life Technologies, Grand Island, NY, USA) | Life Technologies | A10346 | |
| anti-TCR gamma/delta MicroBead Kit | Milteny Miltenyi Biotec Inc. | 130-050-701 | |
| MS column | 103-042-201 | ||
| MACS separator | 4124 |
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