Summary

Die gleichzeitige Auswertung der zerebralen Hämodynamik und Lichtstreuungseigenschaften der<em> In Vivo</em> Rattenhirn Mit Multispektral Diffuse Reflectance Imaging

Published: May 07, 2017
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Summary

Die gleichzeitige Auswertung von zerebralen Hämodynamik und den Lichtstreuungseigenschaften der in vivo Rattenhirngeweben wird ein herkömmliches multispektraler diffuses Reflexions – Bildgebungssystem unter Verwendung demonstriert.

Abstract

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.

Introduction

Multispektraler diffuse Reflektanz-Bildgebung ist die am weitesten verbreitete Technik für eine räumliche Karte der intrinsischen optischen Signale (ioss) in kortikale Gewebe zu erhalten. Ioss beobachtete in dem invivo – Gehirn wird hauptsächlich in drei Phänomene zurückzuführen: Variationen in der Lichtabsorption und Streueigenschaften aufgrund kortikaler Hämodynamik, Variation in der Absorption auf der Reduktion oder Oxidation von Cytochromen in Mitochondrien abhängig, und Änderungen in den Lichtstreuungseigenschaften durch morphologische Veränderungen induzierten 1.

Licht im sichtbaren (VIS) bis zum nahen Infrarot (NIR) Spektralbereich absorbiert und wird wirksam durch biologisches Gewebe verstreut. Das diffuse Reflexionsspektrum des invivo – Gehirns wird durch Absorption und Streuung Spektren charakterisiert. Die reduzierten Streukoeffizienten us 'von Hirngewebe im VIS-to-NIR – Wellenlängenbereich in Folge einer monotonen Streuspektrum Exhibiting kleinere Größen bei längeren Wellenlängen. Der reduzierte Streukoeffizient μ Spektrum S '(λ) angenähert werden kann in der Form der Potenzfunktion 2, 3 zu sein , wie μ s' (λ) = a × λ -B. Die Streukraft b wird in lebendem Gewebe 2, 3 auf die Größe des biologischen Streuers verwendet. Morphologische Veränderungen des Gewebes und die Verringerung der Lebensfähigkeit von lebendem Gewebe kortikalen können die Größe der biologischen Streuer beeinflussen 4, 5, 6, 7, 8, 9.

Ein optisches System zur multispektralen Abbildungs ​​diffusen Reflektanz kann leicht von einer Glühlampe Li konstruiert werdenght Quelle, einfache optische Komponenten und eine monochromatische ladungsgekoppelten Vorrichtung (CCD). Daher wurden verschiedene Algorithmen und optische Systeme für multispektraler diffuse Reflektanz Bildgebung verwendet , um kortikalen Hämodynamik und / oder Gewebemorphologie 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 auszuwerten.

Das Verfahren in diesem Artikel beschrieben wird , verwendet , um sowohl die Hämodynamik und Lichtstreuungseigenschaften von Rattenhirngeweben in vivo sichtbar zu machen ein herkömmliches multispektraler diffusen Reflexions – Bildgebungssystem verwendet wird . Die Vorteile dieses Verfahrens gegenüber alternativen Techniken sind die Fähigkeit, Raum-Zeit-Änderungen sowohl zerebrale Hämodynamik und Rindengewebe zu bewertenMorphologie sowie ihre Anwendbarkeit auf verschiedene Funktionsstörungen des Gehirns Tiermodellen. Daher wird das Verfahren zur Untersuchung von traumatischen Hirnverletzungen, epileptischen Anfall, Schlaganfall und Ischämie geeignet sein.

Protocol

Tierpflege, Vorbereitung und experimentelle Protokolle wurden von der Animal Research Committee der Tokyo University of Agriculture and Technology genehmigt. Für diese Methode wird die Ratte in einer kontrollierten Umgebung (24 ° C, 12 h Licht / Dunkel – Zyklus), mit Futter und Wasser ad libitum untergebracht. 1. Aufbau eines herkömmlichen Multispektrale Diffuse Reflectance Imaging System Halterung neun schmalbandigen optische Interferenzfilter mit Mittenwellenlängen …

Representative Results

Repräsentative Spektralbilder von diffusen Reflexionsvermögen von in – vivo – Rattenhirnen gewonnen sind in Abbildung 3 Die Abbildungen gezeigt bei 500, 520, 540, 560, 570 und 580 nm deutlich , ein dichtes Netz von Blutgefäßen in der Hirnrinde visualisieren. Die Verschlechterung des Kontrastes zwischen Blutgefßen und den umgebenden in den Bildern beobachteten Gewebe bei 600, 730 und 760 nm reflektiert die geringere Absorption von Licht durch Hämog…

Discussion

Der wichtigste Schritt in diesem Protokoll ist die Entfernung der ausgedünnten Schädel Region, um den Schädel Fenster zu machen; dies sollte sorgfältig durchgeführt werden, um unerwartete Blutungen zu vermeiden. Dieser Schritt ist wichtig für den Erhalt hochwertige multispektraler Reflexionsbilder mit hohen Genauigkeit diffundieren. Die Verwendung eines Stereomikroskops ist für den chirurgischen Eingriff, wenn möglich empfohlen. Kleine Stücke von Gelatineschwamm sind nützlich für die Hämostase.

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Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Part of this work was supported by a Grant-in-Aid for Scientific Research (C) from the Japanese Society for the Promotion of Science (25350520, 22500401, 15K06105) and the US-ARMY ITC-PAC Research and Development Project (FA5209-15-P-0175).

Materials

150-W halogen-lamp light source Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan LA-150SAE
Light guide Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan LGC1-5L1000
Collecting lens Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan SH-F16
Interference filters l@500nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65088
Interference filters l@520nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65093
Interference filters l@540nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65096
Interference filters l@560nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67766
Interference filters l@570nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67767
Interference filters l@580nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65646
Interference filters l@600nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65102
Interference filters l@730nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65115
Interference filters l@760nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67777
Motorized filter wheel  Andover Corporation, NH, USA FW-MOT-12.5
16-bit cooled CCD camera Bitran, Japan BS-40
Video zoom lens Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan VZMTM300i
Spectralon white standard with 99% diffuse reflectance Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA SRS-99-020

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Nishidate, I., Mustari, A., Kawauchi, S., Sato, S., Sato, M. Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging. J. Vis. Exp. (123), e55399, doi:10.3791/55399 (2017).

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