La exposición del cerdo del SNC para el análisis histológico: Un Manual para decapitación, Apertura cráneo, cerebro y Remoción
Summary
El objetivo de este documento y vídeo de instrucción es describir cómo exponer y retirar el cerebro de cerdo y la glándula pituitaria postmortem en un estado intacto, adecuado para el análisis macroscópico e histológico posterior.
Abstract
Los cerdos se han vuelto cada vez más popular en la investigación traslacional animal grande neurociencia como un sustituto económicamente y éticamente factible primates no humanos. El tamaño del cerebro grande del cerdo permite el uso de generadores de imágenes cerebrales clínica convencionales y el uso directo y las pruebas de los procedimientos y equipos de neurocirugía de la clínica humana. Además análisis macroscópico e histológico, sin embargo, requiere la exposición postmortem del sistema de cerdo nervioso central (CNS) y la extracción del cerebro posterior. Esta no es una tarea fácil, ya que el cerdo CNS está encapsulada por una, estructura ósea del cráneo de espesor y la columna vertebral. El objetivo de este documento y vídeo de instrucción es describir cómo exponer y retirar el cerebro de cerdo postmortem y la glándula pituitaria en un estado intacto, adecuado para el análisis macroscópico e histológico posterior.
Introduction
Los estudios de neurociencia traslacional en cerdos se han vuelto cada vez más populares en las últimas dos décadas. El gran tamaño del cerebro de cerdo permite el uso de generadores de imágenes cerebrales clínica convencionales y el uso directo y las pruebas de los procedimientos neuroquirúrgicos y el equipo de la clínica humana 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. En los últimos 20 años, cerdos, especialmente cerdos enanos (por ejemplo, Göttingen minipig), se han utilizado para examinar las modalidades de tratamiento neuromoduladores, como el trasplante de células madre; transfección vector viral; y la estimulación cerebral profunda dirigida hacia la enfermedad de Parkinson, la obesidad, la depresión y la enfermedad de Alzheimer 2, 6,= "xref"> 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Esto ha sido seguido por el desarrollo de enfoques estereotáxica y quirúrgicos para manipular el cerdo enano CNS 3, 18, 19, 20, 21. Los cambios del SNC instituidos se han evaluado en animales vivos usando imágenes del cerebro (PET 10, 13, 22, 24 y MR 23), cistometría 11, 12, 25, análisis de la marcha17, la evaluación neurológica 9, 17, y el examen postmortem base de la histología y análisis estereológico 14, 15, 17, 26, 27, 31. Sin embargo, el análisis post-mortem requiere la exposición y la eliminación del cerebro de cerdo, que no es una tarea fácil, como, cráneo óseo de espesor y un dural fibrosa que cubre rodean el cerebro de cerdo.
El objetivo de este documento y vídeo de instrucción es describir cómo el cerebro de cerdo postmortem y la pituitaria pueden estar expuestos y eliminados en un estado intacto en 15-20 min utilizando herramientas quirúrgicas no motorizados. El vídeo de instrucciones y las ilustraciones fotográficas muestran cerdos enanos varones (edad: 6 meses, el peso corporal: 20-25 kg) utilizados para un estudio anatómico de la glándula pituitaria cerdo enano.
Protocol
Representative Results
Discussion
La mayoría de los estudios de neurociencia experimentales se llevan a cabo en las especies de animales pequeños, tales como ratones y ratas, donde el acceso al SNC se ve facilitada por una fina calavera y dural-espesor. Sin embargo, en los animales de experimentación más grandes como cerdos 1, 4, 8, ovejas 32, y primates no humanos, el espesor considerable de estas estructuras requiere el uso de inst…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores reconocen con gratitud la ayuda experta de la señora Trine W. Mikkelsen, la señora Lise M. de montaje, y el personal de Påskehøjgaard. El Consejo Danés de Investigación Médica, la Fundación Lundbeck, y la Fundación Novo Nordisk con el apoyo financiero del estudio.
Materials
| Heavy Scalpel Handle #4 | FST (Fine Science Tools) | 10008-13 | Good for skin incision and soft tissue removal |
| Non-Sterile Scalpel Blades #23 | FST | 10023-00 | |
| Scalpel Handle #7 | FST | 10007-12 | Optimal for dural incision and precision work |
| Non-Sterile Scalpel Blades #11 | FST | 10011-00 | |
| Surgical Forceps | FST | 11024-18 | The tip of the surgical forceps ensure a firm grip |
| Kerrison Bone Punch | Aesculap Neurosurgery | FF713R | Must be robust, bite size 3-5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | MD615 | Must be robust, bite size 15 x 5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | FO551R | Must be robust, bite size 25 x 15 mm |
| Bone Chisel | Lawton | 67-0335 | The size of the chisel head should not exceed 20 mm |
| Mallet (Hammer) | Millarco | 5624108 | Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm |
| Micro-Scissor | FST | 14002-14 | |
| Dissector | Aesculap Neurosurgery | OL165R | |
| Göttingen minipigs | Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark | ||
| Euthanimal | pentobarbital | ||
| Ketamine | Pfizer | ||
| Midazolam | Hameln Pharmaceuticals |
References
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