重大な病気のマウスモデルにおける流体、医薬品や栄養管理のための中心静脈ラインの使用
Summary
This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting.
Abstract
このプロトコルは、長期の重大な病気の中央にカテーテルを挿入し、マウスモデルを記述しています。我々は、ヒト臨床環境を模倣する流体、薬物および栄養投与のための中心静脈ラインを使用して敗血症を誘導する盲腸結紮および穿刺方法を組み合わせます。重症患者は、生き残るために集中的な医療支援を必要とします。患者の大半は、数日以内に回復しますが、患者さんの約四分の長時間の集中治療を必要とし、非分解多臓器不全で死亡するリスクが高いです。さらに、重大な病気の長期化相は病因が現在完全には理解されているの深遠な筋力低下、および内分泌および代謝変化によって品質証明されています。クリティカルケア研究において最も広く使用されている動物モデルは、敗血症を誘発する盲腸結紮穿刺モデルです。これは、人間の9月に似た急性炎症性および血行動態の変化で、非常に再現モデルです重大な病気の急性期を研究するために設計されてSIS、。しかし、このモデルは、臨床的なヒトの状況と異なる高致死率によって品質証明されており、重大な病気の長期の位相を研究するために開発されていません。したがって、私たちはより良い重大な病気のヒト臨床状況を模倣するために、私たちは臨床的に関連する対症療法を管理できるように頚静脈に中心静脈カテーテルを配置することによって、技術を適応しました。このマウスモデルは、動物の大規模な外科的手技や日常の集中治療を必要とするが、それは重大な病気の急性および長期の相の関連するモデルになります。
Introduction
重大な病気は、一つ以上の臓器系の機能を集中医療支援が投与されない限り、患者は、死亡する程度に妨害された疾患状態です。集中治療室（ICU）への入院のための最初の原因は、とりわけ低灌流、低酸素症および過剰な炎症によって引き起こされる、外傷、複雑な外科手術、火傷、疾患の増悪から敗血症に至るまで、すべての重篤患者は、細胞の損傷に苦しむ、変えることができ、一方、 、臓器不全につながります。ほとんどの患者は、彼らの急性発作を生き残るが、患者の重要な一部分はすぐに回復し、長時間の集中治療を必要としません。彼らは非分解多臓器不全による死亡のリスクが高いです。さらに、重大な病気の長期の位相が病因は現在、完全には理解されているの深遠な筋力低下および内分泌および代謝の変化によって品質証明されています。
いくつかのRodentモデルは、クリティカルケアの研究の設定で使用されています。 2つの殆ど使用されるモデルは、リポ多糖（LPS）および盲腸結紮および穿刺（CLP）の外因性投与です。両方のモデルは、感染の調節不全宿主応答によって引き起こされる生命にかかわる臓器不全として定義される敗血症の急性期を模倣するために開発され、世界中のICU 1、2に入場するための主な理由の一つです。それは一時的にのみサイトカインの放出および動物3の血行動態に影響を与えるとして、LPSモデルにはいくつかの欠点があります。ヒトとは異なり、げっ歯類はまた、エンドトキシンに対して特に耐性があり、エンドトキシンの「高用量」の使用は、本明細書にさらにこの方法4,5の有効性の懸念を上げ、低血圧および死亡率を生成するために必要です。他のモデル、盲腸結紮および穿刺モデル（CLP）貫通アンド針穿刺に続いて盲腸の部分の連結を特徴とします。この手順は、血液区画への細菌の移行に続く組織損傷に複数菌腹部感染症を引き起こします。これは、全身性炎症反応や敗血症の発症の引き金となるでしょう。過剰炎症、血管拡張、低血圧および心拍出量の増加6、7：CLPモデルは広く、敗血症の主な特徴を再現する急性の重大な病気の動物モデルとして認識されています。しかし、このモデルは非分解多臓器不全、筋肉の消耗、および内分泌および重大な病気の長期相に典型的な代謝変化の研究を許可していません。マウスモデルからの調査結果は、常に人間設定8に変換することができないので、最近は重大な病気のためのマウスモデルの妥当性は、疑問視されています、9、10。可能な説明は、病気のヒトの患者を批判するために提供される支持療法は、危篤状態のマウスに提供されるケアは実質的に異なることがあります。
したがって、より密接に人間の設定に似ているし、重大な病気の長期相の調査を可能にするために、我々は、大規模な静脈内輸液投与および抗生物質治療として、ヒトに与えられる急性集中治療を模倣するマウスモデルを開発し、かつ可能な栄養サポートなど重大な病気の長期の位相を、生き残るために支持療法を管理します。この目的のために、我々は、敗血症のための黄金の標準である、CLP誘発性敗血症のマウスモデルを適応し、および流体、栄養および薬剤の投与を可能にする中心静脈ラインを置きました。
Protocol
Representative Results
Discussion
私たちは、流体、薬や栄養投与のための中心静脈ラインを使用して敗血症を誘発するために盲腸結紮穿刺法を組み合わせることにより、重大な病気のより臨床的に関連するマウスモデルを開発しました。この実験は再現性がある、ここヒト臨床状況1を模倣し、安定した死亡率に重大な病気と結果の長期の位相を勉強することができます。
盲腸結紮およ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
GVdB, via the University of Leuven (KU Leuven), receives long-term structural research support from the Methusalem Program funded by the Flemish Government (METH08/07) and holds a European Research Council Advanced Grant AdvG-2012-321670 from the Ideas Program of the European Union seventh framework program. SET received a Research Foundation-Flanders (FWO) Research Assistant Fellowship.
Materials
| Buprenorphine | Ecuphar | Vetergesic 0,3mg/ml | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| colloids | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500mg powder for injection fluid | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| Ketamine | Eurovet | Nimatek 100mg/ml | |
| LocTite Super glue3 all plastics | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025 O.D." x .012 I.D." | Bioseb | MRE-025 | |
| olimel N7E | Baxter | ||
| PE10 – Polyethylene .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 tubing .023"x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| Rodent Swivel 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| Ropivacaïne | Astrazenica | Naropin 2mg/ml | |
| Xylazine | VMD | Xylazine hydrochloride 2% |
References
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