Ukontrolleret blødning, en vigtig årsag til dødelighed blandt traumapatienter, kan modelleres ved hjælp af en standard leverlaceration i en murin model. Denne model resulterer i konsekvent blodtab, overlevelse og muliggør afprøvning af hæmostatiske midler. Denne artikel indeholder trin-for-trin-processen til at udføre denne værdifulde model.
Ukontrolleret blødning er en vigtig årsag til forebyggende dødsfald hos traumapatienter. Vi har udviklet en murin model af ukontrolleret blødning via en leverlaceration, der resulterer i konsistent blodtab, hæmodynamiske ændringer og overlevelse.
Mus undergår en standardiseret resektion af leverens venstre-midterlobe. De må bløde uden mekanisk indgreb. Hemostatiske midler kan indgives som forbehandlings- eller redningsbehandling afhængigt af undersøgelsens interesse. I løbet af blødningstiden udføres realtids hæmodynamisk overvågning via en venstre femoral arteriel linje. Musene bliver derefter ofret, blodtab kvantificeres, blod indsamles til yderligere analyse, og organer høstes til analyse af skade. Eksperimentelt design er beskrevet for at muliggøre samtidig testning af flere dyr.
Leverblødning som en model for ukontrolleret blødning eksisterer iN litteraturen, primært i rotte- og svinemodeller. Nogle af disse modeller benytter hæmodynamisk overvågning eller kvantificerer blodtab men mangler konsistens. Den nuværende model inkorporerer kvantificering af blodtab, realtids hæmodynamisk overvågning i en murin model, der giver fordelen ved at anvende transgene linjer og en høj-gennemløbsmekanisme til yderligere at undersøge de patofysiologiske mekanismer ved ukontrolleret blødning.
Traume er den største dødsårsag og handicap blandt unge over hele verden. 1 Ukontrolleret blødning forbliver en førende årsag til dødelighed blandt alvorligt skadede traumapatienter. 2 Behandling af blødningstraume patienten er to gange: kontrol af kirurgisk blødning og genoplivning og udskiftning af tabt blod.
Dyremodeller af hæmoragisk shock har været hjørnestenen i traumerundersøgelsen og kan anvendes til evaluering af patofysiologien og behandling af traumatisk / hæmoragisk shock. 3 , 4 Shock i dyremodeller kan opnås bredt ved to metoder: kontrolleret blødning og ukontrolleret blødning. 5 , 6 Kontrolleret blødning udføres ved fjernelse af et fast volumen blod eller ved fjernelse af blod for at opnå et bestemt blodtryk (fast tryk). MensSe modeller er nyttige i evalueringen i mekanismerne og immunforandringer i hæmoragisk shock, de er ikke anvendelige til test af hæmostatiske midler og efterligner ikke det kliniske scenarie af blødning efter traume. I denne grad forsøgte vi at udvikle en model for ukontrolleret blødning, der ville give os mulighed for at teste hæmatostatiske ændringer og prokoaguleringsmidler i en murin model. Leveren er en attraktiv mulighed for ukontrolleret blødning delvist på grund af den dobbelte blodtilførsel til leveren, og det er et af de mest almindeligt skadede intrabdominale organer i både stump og gennemtrængende traume. I betragtning af den høje kliniske relevans er leveren blevet anvendt som en model for ukontrolleret blødning, oftest hos rotte- og svinemodeller, men også for nylig i primater. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 </suP> Murine-modeller har også indarbejdet leverskade, som f.eks. En crush-model eller et stumt traume; Imidlertid resulterer disse modeller ikke i hæmoragisk shock sekundært til leverskade. 13 , 14
Rotte- og svinemodellerne af ukontrolleret leverblødning, men værdifulde med hensyn til genoplivning og hæmodynamisk overvågning, er mindre fordelagtige end en murin model af forskellige årsager, såsom omkostning, antal dyr, der anvendes og vigtigere de relative manglende transgene linjer, der er til rådighed til analyse Af specifik cellulær og molekylær signalering. Den nuværende murinmodel deler vigtige ligheder med eksisterende leverblødningsmodeller, herunder standardiseret leverlaceration, kvantificering af blodtab, hæmodynamisk overvågning og evnen til at udføre overlevelsesanalyse. Mange eksisterende modeller indeholder kun nogle af disse aspekter, mens vores model blev udviklet til at måle mange af de fysiologiske variablerBles samtidigt og i flere mus. Udviklingen af en murinmodel åbner også døren for undersøgelser ud over genoplivning og ind i større patofysiologimekanismer ved ukontrolleret blødning med potentialet i en omkostningseffektiv, høj gennemstrømningsmodel ved anvendelse af avancerede molekylære teknikker.
Den her beskrevne murine leverlacerationsmodel tilvejebringer en pålidelig og konsistent model for ukontrolleret blødning. Denne model er let at udføre, men der er vigtige trin, der kræver grundig overvejelse. Den mest teknisk udfordrende del af modellen er kanylering af lårbenet til hæmodynamisk overvågning og væske- / lægemiddeladministration. Forsigtig skal tages under dissektion af nerve og arteriotomi / venotomi. Det er vigtigt ikke at berøre nerven under dissekationen af karrene for at undgå at re…
The authors have nothing to disclose.
Arbejdet i dette manuskript blev støttet af finansiering til Dr. Neal af Vascular Medicine Institute Pilot Project Programmet i Hemostasis og Vascular Biology (P3HVB) og AAST Research Fellowship. Dette arbejde støttes af amerikanske National Institutes of Health-stipendier 1 R35 GM119526-01 og UM1HL120877-01.
SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 |
surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 |
hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 |
microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 |
0.8mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 |
suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H |
gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
30G needle | can be purchased through any global vendor | |
23G needle | can be purchased through any global vendor | |
10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 |
straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 |
stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 |
male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
sterilization pouch 3"x8" | VWR | 24008 |
sterilization pouch 5"x10" | VWR | 24010 |
absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 |
7mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 |
1000 7mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 |
betadine (4oz) | can be purchased through any global vendor | |
sterile gloves | can be purchased through any global vendor | |
eppendorfs | can be purchased through any global vendor | |
1/2cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 |
small weigh boat | can be purchased through any global vendor | |
lactated ringers | can be purchased through any global vendor | |
hepranized saline solution (.1µ hep + 9.9µNaCl) | can be purchased through any global vendor | |
phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | |
pentobarbital | can be purchased through any global vendor | |
Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
Computer | Dell | |
microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 |
Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |