Choc hémorrhagique incontrôlable modélisé par la lacération du foie chez les souris avec une surveillance hémodynamique en temps réel
Summary
L'hémorragie incontrôlée, une cause importante de mortalité chez les patients traumatisés, peut être modélisée en utilisant une lacération standard du foie dans un modèle murin. Ce modèle entraîne une perte de sang constante, une survie et permet de tester des agents hémostatiques. Cet article fournit le processus étape par étape pour effectuer ce modèle précieux.
Abstract
L'hémorragie incontrôlée est une cause importante de décès évitables chez les patients traumatisés. Nous avons développé un modèle murin d'hémorragie incontrôlée par une lacération du foie qui entraîne une perte de sang constante, des altérations hémodynamiques et une survie.
Les souris subissent une résection standardisée du lobe central gauche du foie. Ils sont autorisés à saigner sans intervention mécanique. Les agents hémostatiques peuvent être administrés comme traitement de prétraitement ou de sauvetage en fonction de l'intérêt de l'investigateur. Pendant le temps de l'hémorragie, on effectue une surveillance hémodynamique en temps réel via une ligne artérielle fémorale gauche. Les souris sont ensuite sacrifiées, la perte de sang est quantifiée, le sang est collecté pour une analyse plus approfondie et les organes sont récoltés pour l'analyse des blessures. La conception expérimentale est décrite pour permettre le test simultané de multiples animaux.
L'hémorragie du foie comme modèle d'hémorragie incontrôlée existe iDans la littérature, principalement dans les modèles de rat et de porc. Certains de ces modèles utilisent la surveillance hémodynamique ou quantifier la perte de sang, mais ils manquent de cohérence. Le modèle actuel comprend la quantification de la perte de sang, la surveillance hémodynamique en temps réel dans un modèle murin qui offre l'avantage d'utiliser des lignes transgéniques et un mécanisme à haut débit pour enquêter davantage sur les mécanismes physiopathologiques de l'hémorragie incontrôlée.
Introduction
Le traumatisme est la principale cause de décès et d'incapacité chez les jeunes du monde entier. 1 L' hémorragie non contrôlée reste la principale cause de mortalité chez les patients traumatisés gravement blessés. 2 La prise en charge du traumatisme hémorragique est double: le contrôle des saignements chirurgicaux et la réanimation et le remplacement du sang perdu.
Les modèles animaux de choc hémorragique ont été la pierre angulaire de la recherche sur les traumatismes et peuvent être utilisés dans l'évaluation de la pathophysiologie et du traitement du choc traumatique / hémorragique. 3 , 4 Les chocs dans les modèles animaux peuvent être atteints largement par deux méthodes: hémorragie contrôlée et hémorragie incontrôlée. 5 , 6 L' hémorragie contrôlée est effectuée par élimination d'un volume fixe de sang ou par prélèvement sanguin pour obtenir une certaine pression artérielle (pression fixe). Tandis que leLes modèles se sont utiles dans l'évaluation des mécanismes et des altérations immunitaires du choc hémorragique, ils ne sont pas applicables aux tests d'agents hémostatiques et ne modifient pas le scénario clinique de l'hémorragie suite à un traumatisme. Dans ce but, nous avons cherché à développer un modèle d'hémorragie incontrôlée qui nous permettrait de tester des modifications hémostatiques et des agents pro-coagulants dans un modèle murin. Le foie est une option attrayante pour une hémorragie incontrôlée en partie en raison de l'apport sanguin double sur le foie et c'est l'un des organes intrabdominaux les plus fréquemment blessés dans les traumatismes contondants et pénétrants. Compte tenu de la pertinence clinique élevée, le foie a été utilisé comme modèle d'hémorragie incontrôlée, le plus souvent chez les modèles de rat et de porc, mais récemment chez les primates. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 </suP> Les modèles murins ont également incorporé des lésions hépatiques, comme un modèle d'écrasement ou un traumatisme contondant; Cependant, ces modèles n'entraînent pas de choc hémorragique secondaire à la lésion hépatique. 13 , 14
Les modèles de rat et de porc de l'hémorragie hémorragique incontrôlée, bien que précieux en ce qui concerne les pratiques de réanimation et la surveillance hémodynamique, sont moins avantageux qu'un modèle murin pour diverses raisons telles que le coût, le nombre d'animaux utilisés et, surtout, le manque relatif de lignes transgéniques disponibles pour l'analyse De signalisation cellulaire et moléculaire spécifique. Le modèle murin actuel présente des similitudes importantes avec les modèles existants d'hémorragie hépatique, y compris la lacération standardisée du foie, la quantification de la perte de sang, le suivi hémodynamique et la capacité d'effectuer une analyse de survie. De nombreux modèles existants ne comportent que certains de ces aspects alors que notre modèle a été développé pour mesurer une grande partie de la variabilité physiologiqueSimultanément et à plusieurs souris. De plus, le développement d'un modèle murin ouvre la porte à des recherches au-delà de la réanimation et à de plus grands mécanismes de pathophysie en hémorragie incontrôlée avec le potentiel d'un modèle rentable à haut débit utilisant des techniques moléculaires avancées.
Protocol
Representative Results
Discussion
Le modèle de laceration du foie murin décrit ici fournit un modèle fiable et cohérent d'hémorragie incontrôlée. Ce modèle est simple à réaliser, mais il y a des étapes importantes qui nécessitent une considération méticuleuse. La partie la plus techniquement difficile du modèle est la canulation des vaisseaux fémoraux pour la surveillance hémodynamique et l'administration de fluide / médicament. Des précautions doivent être prises lors de la dissection du nerf et de l'artériotomie / veno…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Le travail de ce manuscrit a été soutenu par le financement du Dr Neal par le programme pilote de l'Institut de médecine vasculaire en hémostase et biologie vasculaire (P3HVB) et la bourse de recherche AAST. Ce travail est soutenu par les subventions américaines des instituts nationaux de santé 1 R35 GM119526-01 et UM1HL120877-01.
Materials
| SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 |
| surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 |
| hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 |
| microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 |
| 0.8mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 |
| suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
| suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H |
| gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
| cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
| 30G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 23G needle | can be purchased through any global vendor | |
| 10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
| 50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
| Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
| Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
| 3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
| surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
| tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 |
| straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 |
| stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 |
| male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
| sterilization pouch 3"x8" | VWR | 24008 |
| sterilization pouch 5"x10" | VWR | 24010 |
| absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 |
| 7mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 |
| 1000 7mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 |
| betadine (4oz) | can be purchased through any global vendor | |
| sterile gloves | can be purchased through any global vendor | |
| eppendorfs | can be purchased through any global vendor | |
| 1/2cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 |
| small weigh boat | can be purchased through any global vendor | |
| lactated ringers | can be purchased through any global vendor | |
| hepranized saline solution (.1µ hep + 9.9µNaCl) | can be purchased through any global vendor | |
| phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | |
| pentobarbital | can be purchased through any global vendor | |
| Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
| Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
| TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
| Computer | Dell | |
| microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 |
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
| circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
| rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |
References
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