A hemorragia descontrolada, uma importante causa de mortalidade entre os pacientes com trauma, pode ser modelada utilizando uma laceração hepática padrão em um modelo murino. Este modelo resulta em perda de sangue consistente, sobrevivência e permite o teste de agentes hemostáticos. Este artigo fornece o processo passo a passo para executar este modelo valioso.
A hemorragia não controlada é uma causa importante de óbitos evitáveis entre pacientes com trauma. Desenvolvemos um modelo murino de hemorragia descontrolada através de uma lacera- ção hepática que resulta em perda sanguínea consistente, alterações hemodinâmicas e sobrevida.
Os ratos sofrem uma ressecção padronizada do lobo médio esquerdo do fígado. Eles são autorizados a sangrar sem intervenção mecânica. Os agentes hemostáticos podem ser administrados como terapia de pré-tratamento ou de resgate, dependendo do interesse do investigador. Durante o tempo de hemorragia, é realizada monitorização hemodinâmica em tempo real através de uma linha arterial femoral esquerda. Os ratinhos são então sacrificados, a perda de sangue é quantificada, o sangue é recolhido para análise posterior e os órgãos são colhidos para análise da lesão. O desenho experimental é descrito para permitir o teste simultâneo de múltiplos animais.
Hemorragia hepática como modelo de hemorragia não controlada existeNa literatura, principalmente em modelos de ratos e suínos. Alguns destes modelos utilizam monitorização hemodinâmica ou quantificam a perda de sangue mas não têm consistência. O presente modelo incorpora a quantificação de perda sangüínea, monitoramento hemodinâmico em tempo real em um modelo murino que oferece a vantagem de usar linhas transgênicas e um mecanismo de alto rendimento para investigar os mecanismos fisiopatológicos em hemorragia não controlada.
O trauma é a principal causa de morte e incapacidade entre os jovens em todo o mundo. 1 A hemorragia não controlada continua a ser uma das principais causas de mortalidade entre os pacientes com traumatismos gravemente feridos. 2 O tratamento do paciente com trauma hemorrágico é duplo: controle do sangramento cirúrgico e ressuscitação e reposição do sangue perdido.
Modelos animais de choque hemorrágico têm sido a pedra angular na pesquisa de trauma e podem ser utilizados na avaliação da fisiopatologia e tratamento de choque traumático / hemorrágico. 3 , 4 O choque em modelos animais pode ser conseguido amplamente por dois métodos: hemorragia controlada e hemorragia descontrolada. 5 , 6 A hemorragia controlada é realizada pela remoção de um volume fixo de sangue ou por remoção de sangue para atingir determinada pressão sanguínea (pressão fixa). Enquanto oOs modelos são úteis na avaliação dos mecanismos e das alterações imunes no choque hemorrágico, não são aplicáveis ao teste de agentes hemostáticos e não imitam o cenário clínico de hemorragia após trauma. Nesse sentido, procurou-se desenvolver um modelo de hemorragia descontrolada que nos permitisse testar alterações hemostáticas e agentes pró-coagulantes em um modelo murino. O fígado é uma opção atraente para a hemorragia descontrolada, em parte por causa do fornecimento de sangue dupla para o fígado e é um dos mais comumente lesionado órgãos intrabdominais, tanto em trauma fechado e penetrante. Dada a alta relevância clínica, o fígado tem sido utilizado como um modelo de hemorragia não controlada, mais comumente em modelos de ratos e porcinos, mas recentemente também em primatas. 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 </suModelos murinos também incorporaram lesão hepática, como um modelo de esmagamento ou trauma fechado; Contudo, estes modelos não resultam em choque hemorrágico secundário à lesão hepática. 13 , 14
Os modelos de ratos e porcinos de hemorragia hepática descontrolada, embora valiosos na observação de práticas de ressuscitação e monitorização hemodinâmica, são menos vantajosos do que um modelo murino por várias razões, tais como custo, número de animais utilizados e, sobretudo, a falta relativa de linhas transgénicas disponíveis para análise De sinalização celular e molecular específica. O presente modelo de murino compartilha semelhanças importantes com modelos de hemorragia hepática existentes, incluindo laceração hepática padronizada, quantificação de perda de sangue, monitorização hemodinâmica e capacidade para realizar a análise de sobrevivência. Muitos modelos existentes incorporam apenas alguns destes aspectos, enquanto o nosso modelo foi desenvolvido para medir muitas das variações fisiológicasBles simultaneamente e em múltiplos ratos. Além disso, o desenvolvimento de um modelo murino abre a porta a investigações além da reanimação e a mecanismos fisiopatológicos maiores em hemorragia descontrolada com o potencial de um modelo de baixo custo e alto rendimento usando técnicas moleculares avançadas.
O modelo de laceração de fígado murino aqui descrito fornece um modelo confiável e consistente de hemorragia não controlada. Este modelo é simples de executar, mas há etapas importantes que exigem consideração meticulosa. A parte mais desafiadora tecnicamente do modelo é a canulação dos vasos femorais para monitorização hemodinâmica e administração de fluido / fármaco. Cuidado deve ser tomado durante a dissecção do nervo e da arteriotomia / venotomia. É importante não tocar o nervo durante a dissec…
The authors have nothing to disclose.
O trabalho deste manuscrito foi financiado pelo Dr. Neal pelo Programa Piloto do Instituto de Medicina Vascular em Hemostasia e Biologia Vascular (P3HVB) e pela AAST Research Fellowship. Este trabalho é apoiado por US National Institutes of Health concede 1 R35 GM119526-01 e UM1HL120877-01.
SS/45 dumonts | Fine Science Tools | 11203-25 |
surgical scissors | Fine Science Tools | 14068-12 |
hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 |
microscissors | Fine Science Tools | 15000-08 |
0.8mm curved forceps | Fine Science Tools | 11009-13 |
suture reel 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 |
suture 4-0 silk w/ needle | Owens Minor | K188H |
gauze 4×4 | can be purchased through any global vendor | |
cotton-tip applicator | can be purchased through any global vendor | |
30G needle | can be purchased through any global vendor | |
23G needle | can be purchased through any global vendor | |
10cc syringe | can be purchased through any global vendor | |
50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |
1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 |
Polyethylene 10 tubing 100`(PE-10) | Fisher Scientific | 14-170-12P |
Polyethylene 50 tubing 100`(PE-50) | Fisher Scientific | 14-170-12B |
3-way stopcock | Fisher Scientific | NC9779127 |
surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 |
Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 |
tape rolls 1" | Corporate Express | MMM26001 |
straight side wide mouth jars | VWR | 159000-058 |
stainless steel tray 8" x 11" | VWR | 62687-049 |
male-male leur lock 3-way | VWR | 20068-909 |
sterilization pouch 3"x8" | VWR | 24008 |
sterilization pouch 5"x10" | VWR | 24010 |
absorption triangles | Fine Science Tools | 18105-03 |
7mm wound clip applier | Fisher Scientific | E0522687 |
1000 7mm wound clips | Fisher Scientific | E0522687 |
betadine (4oz) | can be purchased through any global vendor | |
sterile gloves | can be purchased through any global vendor | |
eppendorfs | can be purchased through any global vendor | |
1/2cc Lo-Dose insulin syringe | Fisher Scientific | 12-826-79 |
small weigh boat | can be purchased through any global vendor | |
lactated ringers | can be purchased through any global vendor | |
hepranized saline solution (.1µ hep + 9.9µNaCl) | can be purchased through any global vendor | |
phosphate buffered saline | can be purchased through any global vendor | |
pentobarbital | can be purchased through any global vendor | |
Wild M650 microscope w/ boom stand | Leica | |
Digi-Med BPA-400 analyzer & systems integrator | Micro-Med | SYS-400 |
TXD-310 (Digi-Med Transducer) | Micro-Med | TXD-300 |
Computer | Dell | |
microbead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 |
Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 |
circulating heating pad 18×26 | Harvard | py872-5272 |
rectal thermometer | Kent Scientific | RET-3 |