इस रिपोर्ट में लुईस चूहों में चूहे की अश्रु ग्रंथि निकालने, अंडाकार, और पूर्ण फ्रींड के सहायक के साथ टीयूटी के माध्यम से लुईस चूहों में पुरानी प्रायोगिक ऑटोइम्यून सूखी आंखों को प्रेरित करने के तरीके का वर्णन किया गया है, जिसके बाद फोरेनिसल सबकोंन्क्टेक्टिवा और अश्रु ग्रंथियों में अश्रु ग्रंथि निकालने और ओवलबिमिन के इंजेक्शन के बाद किया गया। छह हफ्ते बाद
सूखी नेत्र रोग एक बहुत ही सामान्य स्थिति है जो रोग और स्वास्थ्य संबंधी बोझ का कारण बनता है और जीवन की गुणवत्ता को कम करता है ऑटिमीम्यून सूखी आंख की स्थितियों का इलाज करने के लिए उपन्यास चिकित्सा विज्ञान का परीक्षण करने के लिए उपयुक्त सूखी आंखों के पशु मॉडल की आवश्यकता है। यह प्रोटोकॉल एक पुरानी ऑटोइम्यून सूखी आँख चूहा मॉडल का वर्णन करता है। लुईस चूहों को एक पायस के साथ प्रतिरक्षित किया गया जिसमें अश्रु ग्रंथि निकालने, ओवलबिमिन, और फ्रींड के सहायक को पूरा किया गया था। अधूरे फ्रींड के सहायक में एक ही प्रतिजनों के साथ दूसरा प्रतिरक्षण दो सप्ताह बाद प्रशासित किया गया था। इन टीकाकरणों को पूंछ के आधार पर तलवार से संचालित किया गया था। ओक्यूलर की सतह और अश्रु ग्रंथियों पर अमीरों की प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने के लिए, अश्रु ग्रंथि निकालने और ओवलबिमिन को पहली प्रतिरक्षण के बाद 6 सप्ताह के दौरान उपकलागत उपकोनोन्ग्नेटिव्वा और अश्रु ग्रंथियों में अंतःक्षिप्त किया गया था। चूहों ने सूअर आंख की विशेषताओं को विकसित किया, जिनमें कमी आंसू उत्पादन शामिल था, आंसू स्थिरता में कमी आई और कॉर्नियल क्षति में वृद्धि हुई। प्रतिरक्षा समर्थकफ्लो साइमेट्रेट्री द्वारा दाखिल ने नेत्रगोलक में सीडी 3 + इफेरोर मेमोरी टी कोशिकाओं का एक प्रावधान दिखाया।
शुष्क आंखों की बीमारी (डीईडी) आँसू और मृदु सतह की एक बहुसंख्यक बीमारी है जो परिणामस्वरूप असुविधा, दृश्यता अशांति, और फिल्म अस्थिरता आंसू, जिससे ओक्यूलर सतह को नुकसान हो सकता है। यह आंसू फिल्म की वृद्धि हुई osmolarity और नेत्र सतह 1 की सूजन के साथ है। डीईडी के साथ जुड़े लक्षण जलते हैं, डंकने लगते हैं, पीसते हैं, विदेशी शरीर उत्तेजना, फाड़, ओक्यूलर थकावट और सूखापन 2 , 3 । डीईडी के दो मुख्य कारण आंसू स्राव ग्रंथि और आंसू फिल्म 4 के अत्यधिक बाष्पीकरण द्वारा आंसू उत्पादन को कम कर रहे हैं। ऑक्सीम्यून बीमारियों, जैसे सजोग्रेन सिंड्रोम, सिस्टमिक ल्यूपस इरिथेमेटोसस, और रुमेटीइड गठिया के रोगियों में मीबोमियान ग्रंथियों को प्रतिरक्षा क्षति आंसू स्थिरता के लिए लिपिड की अभिव्यक्ति कम कर देता है। इसके अलावा, ओक्यूलर सतह को प्रतिरक्षा क्षति उत्पादित घट जाती हैसतह की कमजोरियों के लिए महत्वपूर्ण mucins पर साथ में, इन प्रक्रियाओं को संचयी रूप से पुरानी सूखी आँख 5 , 6 , 7 का कारण बनता है।
टीयर प्रतिस्थापन और विरोधी भड़काऊ थेरेपी थेरेपी के मुख्य आधार हैं। हालांकि, डीईडी ( यानी, कॉर्टिकोस्टेरॉयड और साइक्लोस्पोरिन) के लिए वर्तमान विरोधी भड़काऊ उपचार मोटे तौर पर इम्युनोसप्रेसर होते हैं, जिससे 8 , 9 , 10 के गंभीर प्रतिकूल प्रभाव पड़ सकते हैं। स्वत: प्रतिरक्षी सूखी आंख का इलाज करने के लिए उपन्यास अभिकर्मक एजेंटों का परीक्षण करने के लिए उपयुक्त पशु मॉडल की आवश्यकता है।
11 , 12 , 13 के विशिष्ट आनुवंशिक दोषों वाले चूहों, चूहों में विशिष्ट जीन 14 , 15 , और ट्रांसजेनिक चूहों की कमी होती है जो अत्यधिक मात्रा में इम्यूनोरगुलटऑरी जीन का प्रयोग ऑटोइम्यून सूखी आँख 16 , 17 के मॉडल के रूप में किया गया है। एंटीजन प्रेरित ऑटोइम्यून पशु मॉडल भी चूहों 18 , खरगोशों 19 , और चूहों 20 , 21 में सूचित किया गया है। यहां, हम पुरानी ऑटोइम्यून सूखी आंखों के एक एंटीजन प्रेरित मॉडल का वर्णन करते हैं। यह मॉडल दो पहले के मॉडल का एक संशोधन है; एक अमानवीय ग्रंथि का अर्क होता है, और दूसरा प्रयोगात्मक ग्रंथियों 20 , 21 से एक ऑटोैंटिजेन ( यानी, klk1b22) का इस्तेमाल करता था।
रोग 6 से 8 सप्ताह की महिला के लुटेरे चूहे के ओवलबिमीन के साथ चमड़े के नीचे की टीकाकरण से प्रेरित था, फ्रींड के सहायक को पूरा किया गया था और स्प्रैग-दावली चूहों ( चित्रा 1 ) से लापरवाह ग्रंथि अर्क के साथ एक पायस निकाला गया था। अपूर्ण फ्रींड के सहायक में एक ही प्रतिजन के साथ दूसरा प्रतिरक्षण थादो सप्ताह बाद प्रशासित अमाप ग्रंथि और ओक्यूलर सतह पर एंटीजन-विशिष्ट प्रतिरक्षा कोशिकाओं की भर्ती करने के लिए, अश्रु ग्रंथि निकालने और ओवलबिमिन (1 मिलीग्राम / एमएल) का मिश्रण 6 वें -7 वें सप्ताह ( चित्रा 1 ) पर फोर्निसल सबकोंन्नेक्टिव और अश्रु ग्रंथियों में अंतःक्षिप्त किया गया था। 85% से अधिक चूहों ने सूक्ष्म आंखों की विशेषताओं को विकसित किया था, जो पहली प्रतिरक्षण के 70 दिनों बाद था। इन सुविधाओं में कम आंसू उत्पादन ( चित्रा 2 ), कॉर्नियल फ्लोरोसिसिन धुंधला हो जाना ( चित्रा 3 ) में वृद्धि हुई है, और आंसू स्थिरता ( चित्रा 4 ) में कमी आई है। प्रवाह कोशिका द्वारा सामान्य चूहों की आंखों में टी कोशिकाओं की प्रतिरक्षा रूपरेखा को सीडी 3 + प्रभावकार स्मृति टी कोशिकाओं ( आंकड़े 5 और 6 ) का एक प्रावधान दिखाता है। ऑटोइम्यून डीईडी के साथ चूहे सीडी 3 + प्रभावकार स्मृति टी कोशिकाओं में वृद्धि और भोले और केंद्रीय स्मृति टी कोशिकाओं ( 6 चित्रा </stroएनजी>)।
इस प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण कदम पायस की एकरूपता सुनिश्चित करना है। अच्छी तरह से तैयार किए गए emulsions में, एंटीजन पूरी तरह से तेल के साथ लेपित हैं, इंजेक्शन एंटीजन और सतत प्रतिरक्षा उत्तेजना की धीमी गति से रिलीज सुनिश्चित करते हैं। इस प्रोटोकॉल का एक और महत्वपूर्ण विशेषता लुईस चूहों का उपयोग है। लुईस चूहों को अन्य नस्लों 27 की तुलना में ऑटोइम्यून बीमारी के विकास के प्रति अधिक संवेदनशील होता है।
इस प्रोटोकॉल को दो पहले प्रकाशित प्रोटोकॉल से संशोधित किया गया है, जो या तो लैक्रमल ग्रंथि का इस्तेमाल केवल या पुनः संयोजक Klk1b22 20 , 21 वर्तमान प्रोटोकॉल में, ओवलबिमिन प्लस अश्रु ग्रंथि निकालने का उपयोग एंटीजन के रूप में किया जाता है, और एंटीजन-विशिष्ट प्रतिरक्षा कोशिकाएं ऊपरी सतह और अश्रु ग्रंथि से आकर्षित होती हैं, स्थानीय ऊतक क्षति को प्रेरित करती हैं। प्रारंभिक प्रतिरक्षण के बाद सूखी आंख धीरे-धीरे विकसित होकर, दिन में 48% तक ~ 85% तक पहुंच जाता है। को एंटिजेनिक चुनौतीआंख और दिन 48 पर अश्रु ग्रंथि ने सूखी आंखों को बढ़ाया और यह सुनिश्चित करता है कि यह 70 वर्ष तक की पुरानी घटना है।
Klk- प्रेरित DED मॉडल में पुनः संयोजक Klk1b22 की तुलना में, वर्तमान मॉडल में इस्तेमाल किया अश्रु ग्रंथि निकालने और ओवलबिन सस्ता और प्राप्त करने में आसान है। अश्रु ग्रंथि निकालने में भी अन्य प्रोटीन होते हैं, Klk से अलग होते हैं, जो स्वत: प्रतिरक्षा को प्रेरित कर सकते हैं, इसलिए यह निकालने डीईडी उत्प्रेरण पर KML विधि से सैद्धांतिक रूप से अधिक शक्तिशाली है। हमने केवल अमाउंल्य ग्रंथि निकालने के साथ ही चूहों को निशाना बनाया है; यद्यपि डीआईडी विकसित इन इम्युनिज्ड चूहों में, नियंत्रणों की तुलना में नेत्रगोलक के ऊतकों में प्रेरक मेमोरी टी कोशिकाओं में कोई महत्वपूर्ण वृद्धि नहीं हुई थी।
इस तकनीक की सीमा यह है कि मॉडल को प्राप्त करने में 70 दिन लगते हैं। प्रभावकारी मेमोरी टी कोशिका सामान्य चूहा आंखों में मुख्य टी-सेल सबसेट हैं। इस मॉडल में, ऑटोइम्यून डीईडी नतीजे में सीडी 3 + इफेरोर मेमोरी टी कोशिकाओं में वृद्धि हुई है। ड्रग्स जो कि प्रीफ़ईंधन के प्रभाव को कम करने वाले टी कोशिकाओं, जैसे Kv1.3 पोटेशियम चैनल के चयनात्मक अवरोधकों को रोकना, इसलिए ऑटोममिने डीईडी 28 पर एक चिकित्सीय लाभ हो सकता है।
The authors have nothing to disclose.
लेखकों ने जानवरों के निपटान में उनकी मदद के लिए सुश्री टिन मिन क्यूई और डॉ। वेलचैमी अमुथा बरट्टी और उनकी टीम का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा। यह काम NHIC-I2D-1409007, सिंगएचएल्थ फाउंडेशन एसएचएफ / एफजी 586 पी / 2014 और एनएमआरसी / सीएसए / 045/2012 द्वारा समर्थित था।
Reagents | |||
Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich | P2714-1BTL | |
Pierce BCA Protein Assay Kit | Thermal Scientific | 23227 | |
Mycobacterium tuberculosis H37Ra | Becton, Dickinson and company | 231141 | |
complete Freund's adjuvant | Becton, Dickinson and company | 231131 | |
ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503-10G | |
incomplete Freund's adjuvant | Sigma-Aldrich | F5506-6X10ML | |
pertussis toxin | Sigma-Aldrich | P7208-50UG | |
fluorescein sodium solution | Bausch & Lomb U.K Limited | NA | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | |||
Sonicator | Sonics | Vibra-Cell | |
phenol red thread | Tianjin Jingming New Technological development Co. LTD. | NA | |
Stereo microscope with ring light illuminator and camera | Carl Zeiss | NA | |
Micro IV microscope | Phoenix Research Labs | NA |