संवहनी चिकना मस्तिष्क कोशिकाओं के उपचार के लिए रुक-सूखे बेरी पाउडर से पॉलीफेनोल के निष्कर्षण और शुद्धि<em> विट्रो में</em
Summary
यह कार्य फ्रीज-सूखे बेर पाउडर से पॉलिफेनोल-अमीर अर्क तैयार करने के लिए चरण-दर-चरण विधि का विवरण देता है। इसके अलावा, यह कोशिका संवर्धन में पेप्टाइड हार्मोन एंजियोटेंसिन II (आंग II) की उपस्थिति में इन पॉलीफेनोल-समृद्ध निष्कर्षों का उपयोग करने का एक संपूर्ण विवरण प्रदान करता है जो वास्कुलर चिकना मांसल कोशिकाओं (वीएसएमसीएस) का उपयोग करते हैं।
Abstract
महामारी विज्ञान के अध्ययन से पता चलता है कि संयुक्त राज्य अमेरिका (अमेरिका) और यूरोप में कार्डियोवैस्कुलर बीमारियों (सीवीडी) के कारण फ्लैनोइड की मात्रा में वृद्धि हुई है। जामुन अमेरिका में व्यापक रूप से भस्म हो रहे हैं और एक उच्च पॉलीफ़ोनोलिक सामग्री है कई आणविक लक्ष्यों के साथ बातचीत करने और एंटीऑक्सिडेंट, विरोधी भड़काऊ, और कार्डियोप्रोटेक्टिव प्रभाव सहित कई सकारात्मक जैविक कार्यों को लागू करने के लिए Polyphenols दिखाया गया है। ब्लैकबेरी (बीएल), रास्पबेरी (आरबी), और काली रास्पबेरी (बीआरबी) से पृथक पॉलीफेनोल एंजियोटेंसिन II (एंग II) के जवाब में ऑक्सीडेटिव तनाव और सेलुलर सिनसेंस को कम करते हैं। यह काम फ्रीज सूखे बेरीज से पॉलीफेनोल अर्क को तैयार करने के लिए प्रयुक्त प्रोटोकॉल का विस्तृत वर्णन प्रदान करता है। फ्रीज-सूखे बेर पाउडर से पॉलीफेनॉल निष्कर्षण 80% जलीय इथेनॉल और एक अल्ट्रासोनिक-सहायता प्राप्त निष्कर्षण पद्धति का उपयोग किया गया था। क्रूड निकालने को और अधिक शुद्ध और क्लोरोफॉर्म और एथिल एसीटेट का उपयोग करके अलग किया गया था,क्रमशः। संस्कृति में संवहनी चिकना मांसल कोशिकाओं (वीएसएमसी) पर कच्चे और शुद्ध दोनों अर्क के प्रभाव का परीक्षण किया गया था।
Introduction
पॉलीफेनॉल उनके संरचना में कम से कम एक phenolic अंगूठी युक्त यौगिक हैं और पौधे साम्राज्य 1 में प्रचुर मात्रा में मौजूद हैं। ऐसे संयुग्मों के अस्तित्व की जानकारी के बिना मानव सदियों से औषधीय उद्देश्यों के लिए पौधों का उपभोग कर रहे हैं। कई फलों और सब्जियों में कुछ साझा पॉलिफ़ोनिक यौगिक हैं, यद्यपि फ्लैनोनोइड्स, स्टिलबेनेस, और फीनिलिक एसिड 3 सहित विभिन्न मात्राओं के साथ। हालांकि पॉलिफेनोल अक्सर रंगीन फलों और सब्जियों से जुड़े होते हैं, ये कड़ाई से सच नहीं है। उदाहरण के लिए, ज़ेकैक्थिन और ज़ैन्थिन सब्जियों में मौजूद होते हैं जो अत्यधिक रंगीन नहीं होते हैं, जैसे कि प्याज और लहसुन, जो स्कैलियां के परिवार से होते हैं और कई स्वास्थ्य लाभ से जुड़े होते हैं 4 कई स्वास्थ्य लाभों से जुड़ा होने के अलावा 5 , पॉलीफेनोल भी पौधों की रक्षा के द्वारा कीड़ों से बचाते हैंडी पराबैंगनी विकिरण 2 पॉलिफेनॉल आमतौर पर मानव आहार में पाए जाते हैं और शक्तिशाली एंटीऑक्सिडेंट माना जाता है, क्योंकि वे रिएक्टिव ऑक्सीजन प्रजाति (आरओएस) 6 , 7 , 8 को हटा सकते हैं। उनके विरोधी भक्षण 9 , रोगाणुरोधी 10 , एंटी-हाइपरटेसेंस 11 , और एंटी-कैंसरजनक 12 , 13 गुण हैं।
महामारी विज्ञान के अध्ययनों में फ्लेवोनोइड्स और कार्डियोवैस्कुलर रोग (सीवीडी) की घटनाओं 16 , 17 और मृत्यु दर 14 , 15 के बीच व्युत्क्रम सम्बन्ध दर्शाता है। जामुन अमेरिका में व्यापक रूप से भस्म हो रहे हैं और इसमें उच्च मात्रा में पॉलीफेनोल शामिल हैं, जिसमें फ्लेवोनोइड शामिल हैं। उदाहरण के लिए, ब्लैकबेरी (बीएल) रस का खपत (300 एमएल / डी) आठ हफ्तों के लिए डिस्लेपीडिमिक मरीजों में सिस्टल रक्तचाप 18 में काफी कमी आई है। जीओंग एट अल 1 9 ने बताया कि पूर्व-उच्च रक्तचाप वाले पुरुषों और महिलाओं को प्रति दिन 2.5 ग्राम काले रास्पबेरी (बीआरबी) निकालने की खपत 24-एच और रात का रक्तचाप कम होता है जो प्लेसबो के उपभोग करने वालों की तुलना में कम होता है। रसाबरी (आरबी) ने रक्तचाप को कम किया जबकि स्वस्थ रूप से उच्च रक्तचाप वाले चूहों 20 में सुपरऑक्साइड डिसूटासेज़ (एसओडी) की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई। यह हाल ही में दिखाया गया है कि बीएल, आरबी, और बीआरबी आरओएस के स्तर को कम करते हैं और संवेदक चिकना मस्तिष्क कोशिकाओं (वीएसएमसी) 21 में एंजियोटेंसिन द्वितीय (एंग II) द्वारा प्रेरित होने वाले साँसेंस। इसके अलावा, बीएल निकालने से एन्थॉकायनिन अंश ने अप्रभावी नाइट्रिक ऑक्साइड सिंथेस (आईएनओएस) की अभिव्यक्ति कम कर दी और लिपोपॉलीसेकेराइड (एलपीएस) में परमाणु फैक्टर कपा बी (एनएफ-κबी) और बाह्य सिग्नल-विनियमित किनेज (ईआरके) की गतिविधि को रोक दिया। J774 कोशिकाओंAss = "xref"> 22 बीआरबी निष्कर्षों ने एनएफ-ए ए बी बी सक्रियण और साइक्लोक्सीजिनेज 2 (सीओएक्स -2) की अभिव्यक्ति में विट्रो 23 में कमी आई है, लिपिड प्रोफाइल में सुधार किया है, और चूहों में एथेरोस्क्लेरोसिस के घावों के गठन से रोका जा सकता है 24 उच्च वसायुक्त आहार 24 । एंथोकायनिन, जो जामुनों में सबसे अधिक प्रचुर मात्रा में फ्लेवोनोइड माना जाता है, ट्यूमर नेकोसिस फैक्टर अल्फा (टीएनएफ-α) उत्पादन 25 को कम करके एलपीएस-उत्तेजित रॉ 264.7 मैक्रोफेज में भड़काऊ प्रतिक्रिया तैयार करता है और वीएसएमसीएस 26 के प्रसार और माइग्रेशन को कम करता है।
चूंकि मानव स्वास्थ्य और रोग में पॉलीफेनोल की भूमिका को समझने में रुचि बढ़ रही है, इसलिए निकासी विधि को अनुकूलित करना महत्वपूर्ण है। सॉल्वेंट निष्कर्षण व्यापक रूप से उस प्रयोजन के लिए उपयोग किया जाता है, क्योंकि यह लागत प्रभावी और आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है। इस अध्ययन में, एक विलायक निष्कर्षण का उपयोग एथेनॉल के साथ किया गया था, साथ ही अल्ट्रासोनिक-सहायता प्राप्त एक्स्ट्रेसिओN विधि, जिसे किम और ली 27 से अनुकूलित किया गया था। क्लोरोफॉर्म और एथिल एसीटेट का उपयोग करके कच्चे तेल के निष्कर्षण (सीई) के शुद्धिकरण और विभाजन को शुद्ध ऐड्रेक्ट (पीई) अंश प्राप्त करने के लिए किया गया जो कि क्वीयर एट अल 28 से अनुकूलित किया गया था। इसके अलावा, ईआरके 1/2 के बेसल फास्फोरायलेशन को कम करने के लिए बीआर से क्रूड बनाम शुद्ध पॉलिफेनोल निष्कर्षों की प्रभावकारी तुलना की गई थी, और वीएसएमसीएस में आंग द्वितीय प्रेरित सिग्नलिंग कटौती पर शुद्ध बीएल पॉलीफेनॉल निकालने के निरोधात्मक प्रभाव के प्रतिनिधि के उदाहरण दिए गए थे।
Protocol
Representative Results
Discussion
बेरीज से पृथक पॉलीफेनोल अलग रचनाएं शामिल हैं यहाँ वर्णित इथेनॉल आधारित निष्कर्षण प्रोटोकॉल बीएल ( तालिका 1 ) के क्रूड और शुद्ध पॉलीफेनोल अर्क में उपस्थित फीनिलिक एसिड और फ्लैनोनोइड के विभिन्न स?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन (14GRNT20180028) और फ्लोरिडा स्टेट यूनिवर्सिटी काउंसिल ऑन रिसर्च एंड क्रिएटिविटी (सीओओएफआरएस) ने वित्त पोषित किया था।
Materials
| Angiotensin II | Sigma-Aldrich, Inc. | A9525-10MG | Treatment of VSMCs |
| β-actin | Sigma-Aldrich, Inc. | A2228 | Primary antibody (1:5000) |
| Blackberry fruit | Mercer Foods | Freeze-dried blackberry powder | |
| Catalase | Calbiochem | 219010 | Primary antibody (1:1000) |
| Chloroform | Biotech Grd, Inc. | 97064-678 | Preparation of purified polyphenol extracts |
| DMEM | Mediatech, Inc. | 10-014-CV | Culture of VSMCs |
| Ethanol (absolute molecular biology grade) | Sigma-Aldrich, Inc. | E7023-500ML | Preparation of polyphenol extracts |
| Ethylacetate | Sigma-Aldrich, Inc. | 439169 | Preparation of purified polyphenol extracts |
| ERK1/2 | Cell Signaling Technology, Inc. | 9102S | Primary antibody (1:500) |
| EDTA, 500 mM, pH 8.0 | Teknova, Inc. | E0306 | Lysis buffer |
| Freeze-Dryer | Labconco | VirTis Benchtop K | Preparation of polyphenol extracts |
| FBS | Seradigm | 1400-500 | Cell culture |
| HEPES | Sigma-Aldrich, Inc. | H3375 | Lysis buffer |
| NaCl | EMD Millipore, Inc. | 7760 | Lysis buffer |
| NaF | J.T.Baker, Inc. | 3688-01 | Lysis buffer |
| Na3VO4 | Sigma-Aldrich, Inc. | 450243 | Lysis buffer |
| Na4P2O7 , decahydrate | Sigma-Aldrich, Inc. | S-9515 | Lysis buffer |
| phospho ERK1/2 | Cell Signaling Technology, Inc. | 9101S | Primary antibody (1:1000) |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich, Inc. | P8340-5ml | Lysis buffer |
| Protein assay dye reagent | Bio-Rad Laboratories, Inc. | 500-0006 | Protein concentration Measurement |
| PVDF transfer membrane | Thermo Scientific, Inc. | 88518 | Western blots |
| Rotatory Evaporator | Buchi Labortechnik | Rotavapor R3000 |
Preparation of polyphenol extracts |
| Sterile water | Mediatech, Inc. | 25-055-CV | Preparation of polyphenol extracts |
| Sonicator | QSonica, LLC | Q125 | Preparation of cell extracts |
| SOD2 | Enzo Life Sciences, Inc. | ADI-SOD-110-F | Primary antibody (1:1000) |
| Triton-X-100 | Sigma-Aldrich, Inc. | X100 | Western blots |
| Whatman #2 filter paper | GE Healthcare, Inc. | 28317-241 | Preparation of polyphenol extracts |
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