Summary

हर्बल चिकित्सा की तैयारी: एर-जियान काढ़े और एर-जियान युक्त सीरम के लिए<em> विवो में</em> और<em> विट्रो में</em> प्रयोग

Published: May 31, 2017
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Summary

यहाँ, हम चार चरणों में एक एर-एक्सयन काढ़े (एएनडीडी) की तैयारी प्रस्तुत करते हैं-भिगोने, काढ़े, निस्पंदन, और एकाग्रता- और चूहों को तैयार EXD युक्त सीरम के प्रशासन का प्रदर्शन करते हैं। ये विधियां विवो और पारंपरिक चीनी दवाओं जैसे हर्बल डकोचों के इन विट्रो अध्ययन में लागू होती हैं।

Abstract

पारंपरिक हर्बल दवाएं, नैदानिक ​​सेटिंग में एक वैकल्पिक चिकित्सा, हाल के वर्षों में बढ़ी हुई ध्यान प्राप्त हुई हैं। शरीर को प्रसव करने से पहले, सक्रिय निकासी को कच्ची जड़ी-बूटियों से जारी करने के लिए एक अतिरिक्त निकासी प्रक्रिया सामान्यतः आवश्यक होती है। जल का काढ़ा एक शास्त्रीय निष्कर्षण प्रक्रिया है जो अभी भी सामान्य रूप से नैदानिक ​​सेटिंग्स में उपयोग किया जाता है। यहां, हम प्रायोगिक अध्ययनों के लिए हर्बल डकोप्लों को लागू करने के लिए एर-एक्सयन डीकोक्शन (एक्सडी) के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल का प्रस्ताव करते हैं। पशु-उचित खुराक की गणना वर्णित है, साथ ही साथ EXD के चार मुख्य चरण: भिगोने, पानी का काढ़ा, निस्पंदन, और एकाग्रता। इसके अतिरिक्त, सीरम युक्त एक्सडी इन विट्रो सत्यापन में एक साधन के रूप में चूहों को पेश किया जाता है। यहां, चूहों को मौखिक रूप से तीन दिनों के लिए EXD का प्रबंध किया गया था तब रक्त के नमूनों को इकट्ठा, निष्क्रिय, केन्द्रित किया गया, और फ़िल्टर्ड किया गया। संस्कृति माध्यम से पतला सीरम, वी में कोशिकाओं या ऊतकों का इलाज करने के लिए उपयोग किया जा सकता हैइट्रो उदाहरण के लिए, EXD को विवो और इन विट्रो अध्ययन दोनों में लागू किया गया और यह दर्शाया गया कि EXD में ऑस्टोजेनेसिस को बढ़ाया जाता है इस प्रोटोकॉल को हर्बल दवाओं की तैयारी और आवेदन के संदर्भ के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

Introduction

परंपरागत हर्बल दवाओं के अध्ययन और आवेदन में रुचि वर्तमान में बढ़ रही है। आधुनिक दवाओं के विरोध में, जिसमें रासायनिक अवयव निश्चित होते हैं, हर्बल फ़ार्मुलों में कुछ अज्ञात तत्व होते हैं और उनके सक्रिय यौगिकों के वितरण को सक्षम करने के लिए निकासी प्रक्रिया की आवश्यकता होती है। हालांकि कई अध्ययन पूरे जड़ी बूटी या हर्बल फार्मूले के एक प्रतिनिधि के रूप में प्रसिद्ध संरचना के साथ एक छोटे से यौगिक चुनने की कोशिश करते हैं, न कि औषधीय व्यंजनों और न ही तंत्र को समतुल्य 1 , 2 माना जा सकता है। जबकि फिंगरप्रिंटिंग जटिल हर्बल फार्मूले के घटकों के विश्लेषण को सक्षम बनाता है, कुछ घटकों को अभी भी स्पष्ट रूप से विश्लेषण नहीं किया जाता है, जो एक चुनौती के लिए आगे बढ़ता है जब अध्ययन 3 के सभी अर्क सम्मिलित होते हैं। कई घटक / निष्कर्षों की बातचीत हर्बल दवाओं के चिकित्सीय प्रभावों की मध्यस्थता करते हैं। इस लाभ को बरकरार रखने के लिए, पारंपरिक निकालने के प्रपत्र- डांटआयन-अभी भी क्लिनिक में व्यापक रूप से प्रयोग किया जाता है। चूंकि निकालने की प्रक्रिया का चिकित्सीय प्रभावकारिता पर काफी प्रभाव पड़ता है, इसलिए परंपरागत जल काढ़े का एक मानक प्रोटोकॉल आवश्यक है, खासकर विवो अध्ययन 4 , 5 में

दूसरी ओर, औषधीय तंत्र की खोज करते समय, इन विट्रो या पूर्व विवो अध्ययन के दौरान हर्बल डकोक्शन का प्रशासन भी एक चुनौती है। एक दवा युक्त सीरम की अवधारणा को पहले 1988 में ताशिनो द्वारा प्रस्तावित किया गया था। तब से, शोधकर्ताओं की बढ़ती संख्या ने हर्बल औषधि 7 , 8 , 9 में इसे लागू किया है। यद्यपि दवा युक्त सीरम की विधि में कुछ सीमाएं हैं, जैसे कि सीरम के कुछ घटकों के प्रभाव, यह अभी भी ऐसी विधि माना जाता है जो निकट शारीरिक स्थितियों की नकल करता है

<p class="Jove_content"> एर-एक्सयन काढ़े 1 9 50 के दशक में रजोनिवृत्ति के लक्षणों को दूर करने के लिए विकसित किया गया था , 10 , 11 , 12 , 13 । यह एप्लास्टिक एनीमिया 14 , रजोनिवृत्त ऑस्टियोपोरोसिस 15 , 16 , 17 , समयपूर्व डिम्बग्रंथि विफलता 18 , स्तन कैंसर 19 , डिम्बग्रंथि के कैंसर 20 और देयता में यौवन 21 के उपचार के लिए भी लागू किया गया है। यहां, हम एर-एक्सयन काढ़े (एएनडीडी) और इसकी दवा युक्त सीरम की तैयारी के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। इसके अलावा, हम एक्सरी और एक्सडी युक्त सीरम के मूविन रजोनिवृत्ति के ऑस्टियोपोरोसिस मॉडलों के बारे में बताते हैं।

एक EXD कर्क्यूलागो ऑर्किओइड गर्टन , हेर्बा एपिमाइडी के प्रत्येक 9 ग्राम से बना है </eएम>, रेडिक्स मोरिंडी एफ़ासिनालिस , और रेडिक्स एंजेलिका सीनेंसिस तथा प्रति ग्रेट प्रति कैंसर के प्रति वयस्क प्रोटेक्स फीलोडेंड्री और Rhizoma Anemarrhenae प्रत्येक रोगी प्रति दिन। निम्न समीकरण 22 : डीबी = डीए * आरबी / आरए * (डब्लूए / डब्ल्यूबी) 1/3 के आधार पर माउस के बराबर मात्रा 0.1418 एक्सडी / किग्रा / दिन है। डीए और डीबी क्रमशः मानव और माउस की मात्रा प्रति शरीर वजन (मिलीग्राम / किग्रा) का उल्लेख करते हैं। खुराक, मिलीग्राम / किग्रा में, एक्सडी / किग्रा की संख्या से प्रतिस्थापित किया जाता है आरए और आरबी क्रमशः मानव शरीर के कारक और माउस बॉडी फॅक्टर का प्रतिनिधित्व करते हैं, जो (शरीर की सतह क्षेत्र (एम 2 ) / शरीर के वजन (किग्रा)) के अनुपात में होते हैं। 2/3 ( तालिका 1 देखें)। डब्ल्यूए और डब्लू। बी। क्रमशः मानव और माउस के शरीर के वजन (किग्रा) को दर्शाता है।

Protocol

प्रोटोकॉल शंघाई पारंपरिक चीनी चिकित्सा विश्वविद्यालय के पशु देखभाल दिशानिर्देशों का पालन करता है और पशु प्रयोग शंघाई पशु आचार समिति द्वारा अनुमोदित है। 1. प्रोटोकॉल I: EXD की तैयारी ग?…

Representative Results

OVX चूहों की हड्डी घनत्व पर EXD का प्रभाव काठ का कवच अनुभाग के हेमटॉक्सिलिन और ईसिन (एच एंड ई) धुंधला ओवीएक्स समूह ( चित्रा 1 ए , बाएं पैनल) के साथ तुलना में विवो में ?…

Discussion

हाल के वर्षों में, हर्बल दवाइयों को अधिक ध्यान दिया गया है, एक प्रकार की वैकल्पिक चिकित्सा जिसे पूर्वी दुनिया में क्लिनिकल सेटिंग में हजारों सालों से लागू किया गया है। आधुनिक चिकित्सा के "बेंच से बिस?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

यह काम चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (815739 9 2) द्वारा समर्थित था। हम अपनी भाषा संपादन सहायता के लिए एमिली के लो और कैथलीन डायनापोल का धन्यवाद करते हैं।

Materials

Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) 160922 EXD components
Filter paper GElifesciences 99-103-952 Filter EXD decoction before concentration
Imprinting Control Region (ICR) mice Shanghai Laboratory Animal Center SCXK 2007-0005 In vivo study
Sprague Dawley rats Shanghai Laboratory Animal Center SCXK 2007-0005 EXD-containing serum preparation
Syringe filter Millipore SLGP033RB 0.22 µm
gavage needles (10 ml) Shanghai BO Ge trade sales department 59104274 Adminstration of EXD
Ketamine (80 mg/kg)  Fujian Gutian Pharma Co. Ltd H35020148 Anesthesia
Xylazine (10 mg/kg) Sunway Pharma Co. Ltd CB07591 Anesthesia
Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium Gibco 12800-116 DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides
Streptomycin Sigma 1277 100 µg / ml
Penicillin Sigma 4687 100 µg / ml

References

  1. Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes. J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).
  2. Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan. J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).
  3. Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819 (2016).
  4. Sheridan, H., et al. The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations. J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).
  5. Planas, G. M., Kucacute, J. Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana. Science. 162 (3857), 1007 (1968).
  6. Tashino, S. “Serum pharmacology” and “serum pharmaceutical chemistry”: from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).
  7. Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway. Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).
  8. Fu, L., et al. Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439 (2016).
  9. Chen, X., et al. Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine. Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).
  10. Sze, S. C., et al. A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome. J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).
  11. Sze, S. C., et al. Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause. Chin Med. 6, 40 (2011).
  12. Zhong, L. L., et al. A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women. Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).
  13. Wang, S. W., et al. Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo. J Ethnopharmacol. , (2016).
  14. Lin, L., Wu, S., Tang, J. [Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney]. Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).
  15. Nian, H., et al. Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats. J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).
  16. Qin, L., et al. Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula. J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).
  17. Xue, L., et al. A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats. Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).
  18. Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. [Clinical observation of bushen er’xian decoction in treating premature ovarian failure]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).
  19. Yu, X., et al. Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish. Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).
  20. Chu, E. S., et al. An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models. Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).
  21. Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty. Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).
  22. Miao, M. S. . Experimental animals and technology. 1997, 145 (1997).
  23. Soleimani, M., Nadri, S. A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow. Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).
  24. Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis. Stem Cells International. 2016, 4079210 (2016).
  25. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).
  26. Wu, C., et al. Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction. J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).
  27. Hu, Y. M., et al. Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry. Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).
  28. Xue, L., et al. Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption. Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).
  29. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).
  30. Xu, X., et al. Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats. Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).
  31. Li, Z., Wang, J. On the methods for Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).
  32. Jiang, Y. R., et al. Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors’ expression in endothelial cells. Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).
  33. Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. [Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).
  34. Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells]. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).
  35. Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).
  36. Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).
  37. Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).
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Cite This Article
Liu, S., Sun, Y., Li, J., Dong, J., Bian, Q. Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments. J. Vis. Exp. (123), e55654, doi:10.3791/55654 (2017).

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