Préparation de la phytothérapie: la décoction Er-Xian et le sérum contenant de l'er-Xian pour<em> In vivo</em> Et<em> In Vitro</em> Expériences
Summary
Ici, nous présentons la préparation d'une décoction er-xian (EXD) en quatre étapes, trempage, décoction, filtration et concentration, et démontrons l'administration d'un sérum contenant EXD préparé à des rats. Ces méthodes s'appliquent à l'étude in vivo et in vitro des décoctions à base de plantes telles que les médicaments traditionnels chinois.
Abstract
La médecine traditionnelle à base de plantes, une médecine alternative dans le milieu clinique, a reçu une attention accrue ces dernières années. Avant la livraison au corps, une procédure d'extraction supplémentaire est communément requise pour libérer les constituants actifs des herbes brutes. La décoction de l'eau est une procédure d'extraction classique qui est encore largement utilisée dans les milieux cliniques. Ici, nous proposons un protocole détaillé pour la décoction er-xian (EXD) afin d'appliquer des décoctions à base de plantes à des études expérimentales. On décrit le calcul d'une dose adaptée aux animaux, ainsi que les quatre étapes principales de l'EXD: trempage, décoction de l'eau, filtration et concentration. De plus, l'EXD contenant du sérum est introduit chez les rats comme moyen de validation in vitro . Ici, les rats ont été administrés par voie orale EXD pendant trois jours. Les échantillons de sang ont ensuite été recueillis, inactivés, centrifugés et filtrés. Le sérum, dilué avec le milieu de culture, peut être utilisé pour traiter les cellules ou les tissus dans vItro. Par exemple, EXD a été appliqué à la fois à des études in vivo et in vitro et a démontré que EXD améliore l'ostéogenèse. Ce protocole peut être utilisé comme référence pour la préparation et l'application de plantes médicinales.
Introduction
L'intérêt pour l'étude et l'application de la phytothérapie traditionnelle augmente actuellement. Par opposition aux médicaments modernes, dans lesquels les ingrédients chimiques sont définis, les formules à base de plantes contiennent des ingrédients inconnus et nécessitent des procédés d'extraction pour permettre la distribution de leurs composés actifs. Bien que de nombreuses études tentent de sélectionner un petit composé avec une structure bien connue comme représentant de l'herbe entière ou de la formule à base de plantes, ni les efficacités pharmacologiques ni les mécanismes ne peuvent être considérés comme équivalents 1 , 2 . Bien que les empreintes digitales permettent d'analyser les constituants des formules à base de plantes complexes, certains constituants ne sont toujours pas clairement analysés, ce qui entraîne un défi lors de la combinaison de tous les extraits d'étude 3 . Les interactions de nombreux constituants / extraits mesurent les effets thérapeutiques des plantes médicinales. Pour conserver cet avantage, la forme-décoct traditionnelle d'extraitIon – est encore largement utilisé dans la clinique. Comme la procédure d'extraction a un impact important sur l'efficacité thérapeutique, un protocole standard de décoction traditionnelle d'eau est nécessaire, en particulier pour les études in vivo 4 , 5 .
D'autre part, lors de l'exploration de mécanismes pharmacologiques, l'administration de décoctions à base de plantes lors d'études in vitro ou ex vivo est également un défi. La notion de sérum contenant des médicaments a d'abord été proposée par Tashino en 1988 6 . Depuis lors, un nombre croissant de chercheurs l'ont appliquée à la phytothérapie 7 , 8 , 9 . Bien que la méthode du sérum contenant du médicament présente certaines limites, telles que l'influence de certains composants du sérum, elle est encore considérée comme une méthode qui imite de près les conditions physiologiques.
<p class="Jove_content"> La décoction er-xian a été développée au début des années 1950 pour soulager les symptômes ménopausiques 10 , 11 , 12 , 13 . Il a également été appliqué au traitement de l'anémie aplasique 14 , l'ostéoporose ménopausique 15 , 16 , 17 , l'insuffisance ovarienne prématurée 18 , le cancer du sein 19 , le cancer de l'ovaire 20 et la puberté retardée 21 . Ici, nous présentons des protocoles détaillés pour la préparation à la fois de la décoction er-xian (EXD) et de son sérum contenant des médicaments. De plus, nous décrivons l'application de sérum contenant EXD et EXD aux modèles d'ostéoporose ménopausique murine.Un EXD est composé de 9 g chacun de Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM>, Radix Morindae Officinalis et Radix Angelicae Sinensis et 6 g de Cortex Phellodendri et Rhizoma Anemarrhenae par patient adulte par jour. La dose équivalente pour une souris est de 0,1418 EXD / kg / jour selon l'équation suivante 22 : dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA et dB font référence à la dose par poids corporel (mg / kg) de l'homme et de la souris, respectivement. La dose, en mg / kg, est remplacée par le nombre d'EXD / kg. La RA et la RB représentent respectivement le facteur corporel humain et le facteur corporel de la souris, qui sont proportionnels à la (surface corporelle (m 2 ) / poids corporel (kg)) 2/3 (voir tableau 1 ). WA et WB indiquent le poids corporel (kg) de l'homme et de la souris, respectivement.
Protocol
Representative Results
Discussion
Au cours des dernières années, on a accordé plus d'attention aux médicaments à base de plantes, un type de médicament alternatif appliqué dans le milieu clinique dans le monde oriental depuis des milliers d'années. Différente du modèle de la médecine moderne "banc à lit", la médecine traditionnelle à base de plantes nécessite d'abord le modèle "lit à banc" pour expliquer leurs mécanismes. Cela peut être suivi d'une validation effectuée au niveau du banc et du trait…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par la National Natural Science Foundation of China (81573992). Nous remercions Emily K. Lo et Kathleen DiNapoli pour leur aide à l'édition de langue.
Materials
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
| Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
| Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
| Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
| Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
| gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
| Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
| Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
| Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
| Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
| Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |
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