Auswirkungen der allogenen Platelet-Rich Plasma (PRP) auf den Heilungsprozess des geschnittenen Achillessehnen von Ratten: eine methodische Beschreibung
Summary
Dieses Protokoll beschreibt Verfahren zur Bewertung der Heilung sehnen in Ratten, die mit allogenen Platelet rich Plasma (PRP) oder Kochsalzlösung injiziert wurde, nach dem entfernen Teil der Achillessehne. Der Fortschritt der Heilung der Sehne zu mehreren Zeitpunkten mit verschiedenen Arten von Analysen ausgewertet.
Abstract
Dieser Artikel beschreibt die experimentellen Verfahren zu beobachten, wenn PRP positiv Sehne Heilung beeinflussen kann. Es gibt 4 wichtigsten Schritten zu folgen: induzieren eine Läsion in der Achillessehne; Vorbereiten von PRP und injizieren es (oder die Kochsalzlösung); Entfernen Sie die Sehne; und biomechanischen, molekulare und histologischen Auswertungen. Bei jedem Schritt werden alle Verfahren und Methoden detailliert beschrieben, so dass sie leicht reproduziert werden können.
Achillessehnen wurden chirurgisch geschnitten (Entfernung von einen 5 mm langen Abschnitt). Danach wurde PRP oder Kochsalzlösung injiziert, um zu untersuchen ob PRP einen positiven Effekt hat auf die Heilung der Sehne. Drei Gruppen von 40 Tieren (insgesamt 120 Ratten in dieser Studie verwendet wurden) wurden in 2 Gruppen unterteilt: PRP-Injektion-Gruppe und eine Kochsalzlösung Injektion Gruppe steuern. Ratten wurden geopfert, bei zunehmender Zeitpunkten (Gruppe A: 5 Tage; Gruppe B: 15 Tage; Gruppe C: 30 Tage) und Sehnen entfernt wurden. 90 sehnen unterzog sich biomechanische Tests vor der Ausführung transkriptomischen Analyse und 30 verbleibenden Spannglieder wurden histologische Analyse vorgelegt.
Introduction
Koagulation, entzündliche Prozesse und die Immunität Modulation Rollen der Thrombozyten sind bekannt1. Vor kurzem wurde nachgewiesen, dass sie auch stärkenden Eigenschaften2,3. In der Tat verschiedene Zytokine und Wachstum Faktoren (VEGF, PDGF, TGF-B, IGF-I und HGF) während Degranulation von Blutplättchen freigesetzt werden. Diese Wachstumsfaktoren fördern Angiogenese, Gewebe Umbau und Wunde heilen (Knochen, Haut, Muskel, Sehne)2. Autologem Blut Zentrifugieren produziert Thrombozyten rich Plasma (PRP) enthält hohe Thrombozyten-Konzentrationen abhängig von der Isolierung-Methode (zwischen 3 und 10 Mal Blut Grundlinie Konzentrationen). In der Tat können nicht verschiedenen PRP Präparationstechniken eine identische Endprodukt zur Verfügung stellen. Bis jetzt gab es keine internationale Einigkeit zu diesem Thema. Insgesamt konnte PRP eine attraktive Therapieoption für die Behandlung von chronischen Muskel-Skelett-Erkrankungen, wie Sehnenerkrankung, Plantarfasziitis, Arthrose und Pseudarthrose4sein. Es wurde zum ersten Mal in orale Chirurgie und Implantologie4 verwendet, zur Verbesserung und Beschleunigung der Knochenheilung nach dem Platzieren eines Zahnimplantats. In dieser Studie beschreiben wir eine reproduzierbare Methode, die den Erwerb von PRP für Tierversuche4ermöglicht.
Da Verletzungen von Sehnen häufig bei Sportlern und körperliche Arbeiter beobachtet werden, den Heilungsprozess und reduziert die Zeit zur Erholung zu verstärken sind von großem Interesse5. Neue Behandlungsmethoden, die oft entwickeln beinhalten die Verwendung von Wachstumsfaktoren und die Verwaltung der PRP ist eine einfache und minimal-invasive Möglichkeit, eine Mischung aus endogene Wachstumsfaktoren4liefern.
Mehrere in-vitro- oder Tier-Studien haben gezeigt, dass die Gabe von Plasma, enthält ein hohes Maß an Thrombozyten, durch biologische Mediatoren lösen Sehnen- und Bänderverletzungen Reparatur anregen kann, durch die Freigabe biologische Mediatoren6 ,7,8,9. Darüber hinaus haben andere Studien gezeigt, dass PRP Typ I und III Kollagen-Synthese in Sehne Zellen9,10,11, stimulieren kann. Es wurde auch vermutet, dass PRP kann die Aktivierung der Matrix-Metalloproteinasen (MMPs) zu verringern und verringern somit den Abbau der Matrix. Zellen, die den Entzündungsprozess beteiligt sind können MMP-9, produzieren, die in Gewebe Umbau (physiologische und pathologische) durch Entzündung12induziert eine Rolle spielt.
Basierend auf diesen Informationen, vermutet wir, dass eine einzige PRP-Injektion in den geschnittenen Achillessehnen von Ratten die Recovery-Prozess und die mechanische Festigkeit des reparierten Gewebes verbessert werden könnte. Dies wird durch die Messung der biomechanischen Eigenschaften der Heilung sehnen während des Wiederherstellungsprozesses und durch histologische und molekularbiologische Analysen zur Bewertung von Kollagen Umbau in das neu gebildete Gewebe getestet. Ziel der Studie war zu beobachten, wenn die Heilung der geschnittenen Achillessehnen eine einmalige Injektion von allogenen PRP beeinflussen könnten.
Protocol
Representative Results
Discussion
Thrombozyten sind wichtig für die frühen entzündlichen Phase der Heilungsprozess Sehne. Wenn diese Plättchen verbindlich Gewebe oder Faktoren, die Gerinnung induzieren ausgesetzt sind, werden sie Wachstumsfaktoren freigesetzt, die in α-Granulat gefüllt sind. Durch diese Interaktion extrazelluläre Matrix Makromoleküle sind dazu und mesenchymale Zellen vermehren. Thrombozyten haben auch eine chemotaktische Aktivität auf Vorläuferzellen in der Durchblutung, Verbesserung der Angiogenese und anregende zellulare Unte…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Studie wurde unterstützt durch Standard de Liège und Lejeune – Lechien gewährt der Leon Frédéricq Mittel.
Materials
| Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
| Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
| Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
| iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
| resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
| Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
| Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
| Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
| Xylene | VWR | 28973.363 | |
| Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
| Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
| Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
| Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
| CaCl2 |
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