높은 분자량 Biotinylated Dextran 아민 Thalamocortical 프로젝션 쥐에 추적에 대 한 응용 프로그램 향상
Summary
여기, 선물이 효과적으로 상호 신경 통로 통해 방법 얼룩이 지기 형광으로 biotinylated dextran 아민 (BDA)를 공개 하는 세련 된 프로토콜. 그것은 미세 구조 분석 적합 BDA 라벨 및 다른 신경 요소 confocal 레이저 스캐닝 현미경 아래에서 구별의.
Abstract
높은 분자량 biotinylated dextran 아민 (BDA)은 많은 십 년간 동안 매우 민감한 신경 해부학 추적 프로그램으로 사용 되었습니다. 이후 그 라벨의 품질은 여기, 다양 한 요인에 의해 영향을 제공 세련 된 프로토콜 높은 분자량 BDA의 응용 프로그램에 대 한 중앙 신경 시스템에 최적의 신경 라벨을 공부 합니다. 복 부 posteromedial 핵 (VPM)의 섬세 한 유리 피 펫을 통해 쥐에 시상에 BDA의 정위 적 주입 후 BDA 형광 streptavidin-알 렉 사 (AF) 594로 얼룩진 고 형광 Nissl 얼룩 AF500/525와 counterstained. 녹색 Nissl 얼룩의 배경, 빨간 BDA 라벨, 신경 셀 시체 및 axonal 터미널을 포함 하 여 더 분명히 somatosensory 피 질에서 시연 했다. 또한, BDA에 대 한 형광 염색을 두 번 및 칼슘 묶는 단백질 parvalbumin (PV) BDA 라벨 및 로컬 신경 공부 하는 기회를 제공 하는 대뇌 피 질의 대상에 태양광 발전-긍정적인 수의 상관 관계를 관찰 하기 위해 실시 되었다 회로 및 그들의 화학 특성 따라서,이 세련 된 방법은 고품질 신경 시상과 대뇌 피 질 사이의 상호 신경 경로 통해 높은 분자량 BDA로 머릿속에 적합 하지 않습니다 하지만 또한 동시 시범 허용 됩니다. 다른 신경 마커 형광 histochemistry 또는 immunochemistry입니다.
Introduction
높은 분자량 BDA (10000 분자량), 매우 민감한 트레이 서 20 년 이상의1중추 신 경계에서에서 신경 경로 추적 사용 되었습니다. BDA의 사용은 일반적인 신경로 추적 기법, BDA 라벨의 품질 다양 한 요인1,,23에 의해 동물에서 달라질 수 있습니다. 우리의 최근 연구 표시 BDA 라벨의 최적의 구조는 관련 된 적절 한 후 주입 생존 시간 뿐만 아니라 또한 착 색 방법4와 상관. 지금, 기존의 avidin 비타민 b 복합체 과산화 효소 복합물 (ABC), streptavidin fluorescein isothiocyanate streptavidin-AF594까지 착 방법은 이전의 연구2,3, BDA 라벨 공개에 대 한 사용 되었다 4,5. 비교에서는, 형광 성 얼룩 BDA에 대 한 수행할 수 있습니다 쉽게.
높은 분자량 BDA의 응용 프로그램을 확장 하기 위하여 세련 된 프로토콜은 현재 연구에 도입 되었다. 쥐 뇌에서 시상의 VPM에 BDA의 주입, 따라 이중 형광 얼룩, BDA 라벨의 상관 관계를 관찰을 위해 실시 되었다 뿐만 아니라 표준 ABC 얼룩의 일반적인 방법으로 계시 고 기본 했다 BDA 라벨 신경 요소 또는 streptavidin AF594 및 형광 Nissl histochemistry 또는 PV-immunochemistry, 대뇌 피 질의 대상에 수 각각. VPM 기본 somatosensory 피 (S1)6,,78사이 상호 신경 경로 통해 우리는 BDA 예상 thalamocortical 축 삭 및 corticothalamic에 라벨에 우리의 관찰 집중 s 1에서 예상된 셀 somas입니다. 이 과정에 의해 우리는 높은 분자 무게 BDA, 신경 라벨의 높은 품질을 얻기 위해 상세한 프로토콜 뿐만 아니라 다른 형광 신경 마커 및 형광 BDA 라벨의 조합에 세련 된 프로토콜을 제공할 것으로 예상 histochemistry 또는 immunochemistry입니다. 이 접근은 로컬 신경 회로 confocal 레이저 스캐닝 현미경 아래에서 그들의 화학 특성을 공부 하는 것이 좋습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
적절 한 추적 프로그램을 선택 하는 성공적인 신경 추적 실험에 대 한 중요 한 단계입니다. BDA, 높은 분자량 BDA의 가족에서 (10, 000 분자량) 저 분자 무게 BDA (분자량 3000)2,3 달리 참가자 신경 통로 통해 우선적으로 수송 될 추천 , 11 , 12 , 그러나 13., 많은 연구는 또한 그 높은 분…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 국립 자연 과학 재단의 중국 (프로젝트 코드 번호 81373557, no. 81403327)에 의해 투자 되었다.
Materials
| Biotinylated dextran amine (BDA) | Molecular Probes | D1956 | 10,000 molecular weight |
| Streptavidin-Alexa Fluor 594 | Molecular Probes | S32356 | Protect from light |
| 500/525 green fluorescent Nissl stain | Molecular Probes | N21480 | Protect from light |
| Brain stereotaxis instrument | Narishige | SR-50 | |
| Freezing microtome | Thermo | Microm International GmbH | |
| Confocal imaging | Olympus | FV1200 | |
| system | |||
| Micro Drill | Saeyang Microtech | Marathon-N7 | |
| Sprague Dawley | Institute of Laboratory Animal Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences | SCKX (JUN) 2012-004 | |
| Vectastain ABC Kit | Vector Laboratories | PK-4000 | |
| superfrost plus microscope slides | Thermo | #4951PLUS-001 | 25x75x1mm |
| Photoshop and Illustration | Adobe | CS5 |
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