형태학 및 Murine 악의 관절 돌기 세포 분석 방법
Summary
이 원고 형태학 및 설치류의 악의 관절 돌기 내의 세포질 변화를 분석 하기 위한 메서드를 제공 합니다.
Abstract
턱 관절 (TMJ) 외부 자극에 적응 하는 능력 있고 변경 로드 condyles의 위치 뿐만 아니라 악의 condylar 연골 (MCC)의 구조와 세포 구성 요소에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 원고에는 이러한 변경 및 마우스 (즉, 압축 정적 TMJ 로드)에서 TMJ의 로드를 변경 하는 방법을 분석 하는 방법을 설명 합니다. 여기에 그림 구조 평가 Digimizer 소프트웨어를 사용 하 고 작은 뼈의 방사선에서 수행 되는 간단한 형태학 접근 이다. 또한, 휴대의 분석 선도 콜라겐 식, 뼈, 세포 분열, 변경에 변화와 proteoglycan 메일 고객 센터에서 설명 하는. 이러한 변화는 긍정적인 형광 픽셀을 사용 하 여 계산 하 여 조직학 단면도-의 정량화 이미지 소프트웨어 및 측정 거리 매핑 및 스테인드 영역 Digimizer-는 또한 설명 했다. 여기에 표시 된 메서드는 murine TMJ에 국한 되지 않습니다 하지만 추가 뼈 작은 실험 동물의 및 endochondral 나오고의 다른 지역에서 사용 될 수 있습니다.
Introduction
TMJ craniofacial 지역에 위치한 독특한 로드 베어링 조인트 이며 fibrocartilage의 형성 된다. MCC는 TMJ의 말하기와 masticating, unhindered 턱 운동을 하 여 관절 기능을 위해 필수적 이지만 일반적으로 관절염1를 포함 한 퇴행 성 질환에 의해 영향을 받습니다. TMJ 고객 센터2,3,,45의 구성 요소 구조와 세포 변화를 선도 외부 자극 및 로드 변경에 적응 하는 능력이 있다. MCC의 부하 베어링 속성 그것의 성분, 물, 콜라겐 네트워크를 포함 하 고 밀도가 proteoglycans 포장 사이 상호 작용에 의해 설명 될 수 있다. 고객 센터는 콜라겐과 비 콜라겐 단백질의 종류를 나타내는 4 개의 고유 셀룰러 영역: 1) 표면 또는 관절 영역; 요구; 로드에 응답 하는 2) 증식 영역, 미 분화 간 엽 세포의 구성 성숙한 chondrocytes 표현 콜라겐 유형 2; 3) prehypertrophic 영역 구성 그리고 4)는 hypertrophic 영역, 콜라겐 표현 hypertrophic chondrocytes 10 다를 입력 하는 지역 및 석 회화를 받 다. 비 mineralized 지역 proteoglycans 압축 력을6에 저항을 제공 하는 풍부 하다.
Hypertrophic 영역에서 골 chondrogenesis에서 전환 발생 하면 고객 센터의 지속적인 강화는 악의 관절 돌기7의 마찰의 뼈의 강력한 미네랄 구조를 보장. Unmineralized 및 광물 화 된 지역에서 세포질 변화는 궁극적으로 악의 관절 돌기에 mandible 형태학 및 구조 변화에 리드. 고객 센터의 모든 세포질 영역 및 마찰의 부분의 강화 작용의 항상성 유지, 부하 베어링 용량, 건강과 TMJ의 무결성을 필수적입니다.
여러 콜라겐 유전자 변형 마우스 모델 (Utreja 그 외 여러분에 의해와 같이) 8 모든 transgenes는 MCC에서 표현 됩니다 때문에 콜라겐 식의 변화를 이해를 사용 하 여 훌륭한 도구입니다. 깊이 조직학 평가, 대 한 조직학 얼룩 매트릭스 증 착, 강화 작용, 세포 증식, apoptosis, 뿐만 아니라 고객 센터의 다른 세포 층에 단백질 식 공부 하는 데 사용 됩니다.
이 원고, 조직학 및 형태학 분석 쥐의 악의 관절 돌기의 MCC 및 마찰의 뼈에서 세포 및 구조 변화를 평가 하는 데 사용 됩니다. 또한, 세포 정량화 방법, 형광 조직학 이미지를 분석 하 고 가벼운 현미경 슬라이드를 매핑 설명 되어 있습니다. 고객 센터 및 마찰의 뼈9세포 형태학 변화 원인, 메서드를 로드 압축 정적 TMJ 또한 우리의 방법을 확인 하기 위해 그림입니다.
형태학 및 악의 관절 돌기에 설치류의 mandible 조직학 변화 결정 또는 endochondral 나오고의 다른 지역 및 추가 광물 화 된 직물의 형태 분석 여기에 설명 된 방법은 사용할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 원고는 형태학 측정 및 세포 분석 murine 악의 condyles mandibles의 방법을 설명합니다. 방사선 형태학 측정 작은 실험 동물에서 다른 뼈 분석을 사용할 수 있습니다. 또한, 세포 분석 (셀 정량화 및 연골 거리 매핑) 설치류 악의 관절 돌기에 국한 되지 않습니다 하지만 수많은 조직의 조직학 섹션 척도를 사용할 수 있습니다.
유전자 변형 마우스 모델 표현 형광 기자는 유전자 발현…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 친절 하 게 제공 하 고 유전자 변형 쥐 리 첸 조직학 지원에 대 한 박사 데이비드 로우를 감사 하 고 싶습니다.
이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구의 보너스 번호 K08DE025914에서 건강의 국가 학회 및 미국 협회의 교정 기초 Sumit Yadav에 의해 지원 되었다.
Materials
| MX20 Radiography System | Faxitron X-Ray LLC | ||
| Digimizer Image software | MedCalc Software | ||
| Shandon Cryomatrix embedding resin | Thermo Scientific | 6769006 | |
| Manual microscope Axio Imager Z1 | Carl Zeiss | 208562 | |
| yellow fluorescent protein filter – EYFP | Chroma Technology Corp | 49003 | |
| cyan fluorescent protein filter – ECFP | Chroma Technology Corp | 49001 | |
| red fluoresecent protein filter – Cy5 | Chroma Technology Corp | 49009 | |
| sodium acetate anhydrous | Sigma-Aldrich | S2889 | |
| sodium L-tartrate dibasic dihydrate | Sigma-Aldrich | 228729 | |
| sodium nitrite | Sigma-Aldrich | 237213 | |
| ELF97 substrate | Thermo Fisher Scientific | E6600 | |
| ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit | Life Technologies | C10339 | includes EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine) |
| DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Scientific | D1306 | |
| Sodium phosphate dibasic | Sigma-Aldrich | S3264 | |
| Sodium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | 71505 | |
| Toluidine Blue O | Sigma-Aldrich | T3260 | |
| Adobe Photoshop | Adobe Systems Incorporated | ||
| Phosphate buffered saline tablets (PBS) | Research Products International | P32080-100T | |
| CNA Beta III Nickel-Free Archwire | Ortho Organizers, Inc. | ||
| GraphPad Prism | GraphPad Software, Inc. |
References
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