Engraftment גידול במודל של עכברים Xenograft של האדם מנטל לימפומה התא
Summary
לימפומה cell מנטל (MCL) היא קשה לטפל הפרעת תא B ולכן לא פחות קשה להקים מודל העכבר xenograft של ראשי MCL ללמוד ולפתח את הרפוי. כאן, אנו מתארים את הקמת MCL xenografts בעכברים כדי לעזור להבין את הביולוגיה כבסיס מוצלחת.
Abstract
B לימפוציטים הם שחקני המפתח מחזור תא החיסון והם בעיקר ביתם, שוכנים באזור איברי הלימפה. בעוד תאי B נורמלי להתרבות רק כשאתה מגורה על ידי לימפוציטים מסוג T, תאי B oncogenic לשרוד ו להרחיב באופן עצמאי בתוך נישות איברים לא מוגדר. לימפומה cell מנטל (MCL) הוא אחד כזה הפרעת תא B, שבו שיעור חציון ההישרדות של חולים היא 4-5 שנים. זה דורש את הצורך של מנגנונים יעילים באמצעותו יונת ואת engraftment של תאים אלה נחסמות על מנת להגביר את הישרדות, תוחלת החיים של המטופלים. לכן, המאמץ לפתח מודל העכבר xenograft לחקור את היעילות של הרפוי MCL על ידי חסימת ה ביות מנגנון ויוו הוא בעל חשיבות עליונה. התפתחות בעלי חיים הנמענים התא האנושי השתלת איברים מבעלי חיים לבדוק תרופות בשלב מוקדם של זמן כנראה תפס, כמו דגמים הרלוונטיים העכבר פרה יש חשיבות מכרעת מסך סוכני טיפולית חדשה. מודל זה בעל חיים מפותחת כדי למנוע דחיית שתל האנושי ולהקים מודל עבור מחלות אנושיות, והוא עשוי להיות כלי שימושי ביותר ללמוד את התקדמות המחלה סוגי לימפומה שונים, לבצע בדיקה פרה של תרופות עבור ממאירויות המטולוגיות, כמו MCL. הקמנו דגם העכבר xenograft אשר ישמש משאב מצוין ללמוד ולפתח את רומן גישות טיפוליות עבור MCL.
Introduction
לימפוציטים על ידי הטבע לשחק תפקיד מרכזי מעקב המערכת החיסונית, לימפוציט סחר היא שלב קריטי הרכבה אנטיגן ספציפי חסינות1,2. תהליך זה כולל העברה של לימפוציטים נאיביים T של בלוטת התימוס כדי להזרים את הדם, ומשם לאיברים הלימפה המשני, כולל בלוטות הלימפה, התיקונים של פייה או הטחול, הם נפגשים אנטיגנים cognate. לימפוציטים B להבדיל במח העצם, נודדים כתאי תמים אל זקיקים של איברי הלימפה משני3. חלק תאים B אלה לאגד אנטיגן עם קולטן שלהם, מופעלים על ידי תאי T ספציפי. התפשטות ובידול של תאים אלה B דוחף את התאים תמים B שאינו מופעל ע י לאזור מנטל של הזקיק. תאים מופעל יכול להבדיל ואז לזיכרון B תאים, אשר מסיירים הגוף, או לידי בנוגדנים הפרשת תאי פלזמה להגר מח העצם4.
MCL מתרחשת כאשר לימפוציטים נאיביים B באזור מנטל להפוך גידול. אלו תאים לימפומה לשכון microenvironment של איברים הלימפה, להתרבות ללא תלות שליטה לימפוציט T ספציפי. עם זאת, בשלב מסוים של צפיפות לברוח מן הנישה הזאת והם recirculate במחזור הדם לחפש נישות באיברים אחרים. בהתחשב במורכבות של מולקולות אדהזיה והפקרות של נוגדנים, קולטנים שלהם, המנגנון של הסלולר סחר זה ויוו ממעטים להבין, לכן הסלים טיפול. שיטות רומן נחוצים כדי לחסום ביעילות תהליך הגירה זה כדי למנוע את התאים לימפומה B מלהגיע microenvironments חדש.
MCL הוא אחד הקשים ביותר לטיפול תא B ממאירות. הפיתוח של הפנוטיפ אמצעים של MCL היא התוצאה של מפל רב-שלבי, המאופיינת על ידי רכישת מאפיינים ביולוגיים ייחודיים. בזמן האבחנה, רוב המטופלים (70%) שכבר קיים עם מחלה המופץ, עם רוב המקרים מפגין extranodal מעורבות הטחול, מוח עצם, ו/או מערכת העיכול5,6. בחולים שטופלו, נסיגה על ידי גידולים עמידים בתוך כמה שנים הוא נפוץ, למרות כימותרפיה קונבנציונלית מעניקה שיעורי הפוגה גבוהה לטווח קצר7,8. כאן אנו מציגים מודל המחלה חדש יכול לעזור להבין MCL הפצתו וביולוגיה הבסיסית שלה: הקמנו האנושי MCL xenograft העכבר מודל שמקורם בתאי הגידול העיקרי של חולים. אנו מקווים כי מודל זה יעזור לפתח אסטרטגיות טיפוליות נגד הפצת MCL, לספק במרכיבי קליניים אופטימלית אבחון וטיפול בחולים הישנות.
Protocol
Representative Results
Discussion
ניסויים קליניים אפשריות לתרופות הניתנות בשלב מתקדם של פיתוח אך אינם יכולים לשמש עבור גילוי תרופות. זמן כנראה תפס המאמצים לפתח נמענים בעלי חיים עבור התא האנושי השתלת איברים מבעלי חיים כדי לבדוק תרופות בשלב מוקדם. כאן אנו מציגים במודל חיה מונע דחיית שתל האנושית, יכול להקים מודל עבור מחלות א?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי le חדר מרווח וחדיש ליגה Genevoise סרטן, ד ר Fondation דובואה Ferriere דינו-ליפאטי, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008, 2914-02-2012, שוויצרי מענק קרן המדע הלאומית 31003A_156760 ו 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
- Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. Human chemokines: an update. Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).
- Baggiolini, M. Chemokines and leukocyte traffic. Nature. 392, 565-568 (1998).
- Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. . Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).
- De Silva, N. S., Klein, U. Dynamics of B cells in germinal centres. Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).
- Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma. Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).
- Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems. Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).
- Herrmann, A., et al. Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma. J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).
- Martin, P., et al. Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies. Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).
- Iyengar, S., et al. Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice. Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).
- Klco, J. M., et al. Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia. Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).
- Kerbel, R. S. Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved. Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).
- Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts. Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).
- Doñate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma. J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).
