Attecchimento del tumore in un modello murino di xenotrapianto di umano linfoma a cellule mantellari
Summary
Linfoma mantellare (MCL) è un difficile da trattare il disordine delle cellule di B ed è altrettanto difficile stabilire in un modello murino di xenotrapianto di MCL primario per studiare e sviluppare terapie. Qui, descriviamo la Costituzione ottimale degli xenotrapianti MCL in topi per aiutare a capire la sua biologia sottostante.
Abstract
I linfociti B sono attori chiave nella circolazione delle cellule immuni e hanno principalmente ospite e risiedono negli organi linfoidi. Mentre le cellule B normali proliferano solo quando sono stimolati da linfociti T, cellule di B oncogeniche sopravvivono ed espandono autonomamente in nicchie di organo non definito. Linfoma mantellare (MCL) è un tale disordine delle cellule B, dove il tasso di sopravvivenza mediana dei pazienti è di 4-5 anni. Ciò richiede la necessità di meccanismi efficaci per cui l’homing e l’attecchimento di queste cellule vengono bloccate al fine di aumentare la sopravvivenza e la longevità dei pazienti. Di conseguenza, lo sforzo di sviluppare un modello di xenotrapianto del topo per studiare l’efficacia di terapie MCL bloccando l’homing meccanismo in vivo è della massima importanza. Sviluppo di animali destinatari per lo xenotrapianto cellulare umana per testare farmaci fase precoce lungo sono state perseguite, come modelli di mouse preclinici rilevanti sono cruciali per nuovi agenti terapeutici dello schermo. Questo modello animale è sviluppato per evitare il rigetto dell’organo umano e per stabilire un modello per le malattie umane, e può essere uno strumento estremamente utile per studiare la progressione della malattia di tipi diversi di linfoma ed eseguire test preclinici di candidati farmaci per malignità ematologiche, come MCL. Abbiamo stabilito un modello di topo dello xenotrapianto che servirà come una risorsa eccellente per studiare e sviluppare nuovi approcci terapeutici per MCL.
Introduction
I linfociti di natura svolgono un ruolo importante nella sorveglianza immunitaria, e traffico dei linfociti è un passo fondamentale nel montaggio dell’antigene specifico immunità1,2. Questo processo include la migrazione dei linfociti T naive al timo nel flusso sanguigno e da lì a organi linfoidi secondari, inclusi i linfonodi, placche di Peyer o milza, dove si incontrano gli antigeni cognati. I linfociti B differenziano nel midollo osseo e la migrazione di cellule naive nei follicoli di organi linfoidi secondari3. Alcune di queste cellule di B legano l’antigene con loro recettore e vengono attivati da specifiche cellule T. Proliferazione e la differenziazione di queste cellule B spinge le cellule di B ingenui non attivato, nella zona del manto del follicolo. Le cellule attivate quindi possono differenziarsi in memoria B cellule, che pattugliano il corpo, o maturano in immunoglobulina che secernono le cellule di plasma che migrano al midollo osseo4.
MCL si verifica quando i linfociti di B ingenui nella zona del mantello si trasformano in un tumore. Queste cellule di linfoma risiedono nel microambiente degli organi linfoidi e proliferano indipendentemente dal controllo specifico dei linfociti T. Tuttavia, in una determinata fase della densità di fuggire da questa nicchia e ricircolare nella circolazione sanguigna in cerca di nicchie in altri organi. Considerando la complessità delle molecole di adesione e la promiscuità di chemochine e loro recettori, il meccanismo di questo cellulare traffico in vivo è capito male e quindi ostacola la terapia. Nuovi metodi sono necessari per bloccare efficacemente questo processo di migrazione per impedire che le cellule di linfoma B raggiungendo nuovi microambienti.
MCL è uno dei più difficili per il trattamento di malignità delle cellule di B. Lo sviluppo di un fenotipo neoplastico di MCL è il risultato di una cascata multistep, caratterizzata dall’acquisizione delle proprietà biologiche uniche. Al momento della diagnosi, maggior parte dei pazienti (70%) già presente con una malattia diffusa, con una maggioranza dei casi che esibiscono la partecipazione extranodal in milza, midollo osseo e/o del tratto gastrointestinale5,6. Nei pazienti trattati, ricaduta di tumori resistenti in pochi anni è comune, anche se la chemioterapia convenzionale induce tassi della remissione alta a breve termine7,8. Qui vi presentiamo un nuovo modello di malattia che può aiutare a comprendere la diffusione di MCL e sua biologia sottostante: abbiamo stabilito un modello di mouse dello xenotrapianto MCL umano che ha avuto origine dalle cellule del tumore primario dei pazienti. Speriamo che questo modello aiuterà a sviluppare strategie terapeutiche contro la diffusione di MCL e possibilmente fornire nuove prospettive cliniche per la diagnosi ottima ed il trattamento di pazienti recidivati.
Protocol
Representative Results
Discussion
Studi clinici sono possibili per i farmaci che sono in fase avanzata di sviluppo, ma non possono essere utilizzati per la scoperta di nuovi farmaci. Gli sforzi per sviluppare degli animali destinatari per lo xenotrapianto umano delle cellule al fine di testare farmaci fase precoce lungo sono stati perseguiti. Qui vi presentiamo un modello animale che evita il rigetto del trapianto umano e può stabilire un modello per le malattie umane, quali MCL. Questo è attualmente un modello di xenotrapianto d’avanguardia per studia…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato dalla Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 e 2914-02-2012 e Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 e 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
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